Грамположительные кокки
|
|
Скачать 1.2 Mb.
|
|
^
1. История открытия и изучения возбудителей ЗППП. Понятие об инфекциях, передающихся половым путём (ИППП). ИППП 1 и 2 поколения. 2. Роль гонококков, бледной трепонемы, хламидий и микоплазм в патологии человека. 3. Гонококки. Таксономическая характеристика гонококков. Биологические свойства гонококков. Клинико-эпидемиологические сведения, патогенез заболевания, иммунитет при гонорее. Лабораторная диагностика острой и хронической форм гонореи. Этиотропная терапия. Профилактика гонореи.
Дополнительные вопросы для стоматологов: Сифилис полости рта. Основные проявления сифилитического поражения ротовой полости . Дополнительные вопросы для педиатров:
Вопросы для самоконтроля:
^
Микробиологическая диагностика ЗППП Для возбудителей венерических заболеваний характерен половой путь передачи инфекции. К ним относятся возбудители сифилиса, гонореи, мягкого шанкра и другие микроорганизмы, вызывающие разнообразные урогенитальные заболевания, передающиеся половым путём (ЗППП). ^ Таблица 6.
При диагностике этих инфекций, особенно с преимущественным поражением мочеполовых органов, например, при дифференциальной диагностике гонореи и негонококковых уретритов, выборе рациональной терапии микробиологические методы имеют решающее значение. ^ Материал для исследования:
Методы диагностики: 1. Бактериоскопическое исследование 2. Бактериологическое исследование 3. Серодиагностика 4. Экспресс-методы: биохимические и молекулярно-биологические исследования Бактериоскопическое исследование Применяется на ранних стадиях заболевания (1,2 период) Материал: отделяемое шанкра, аспират из высыпных элементов, пунктат регионарных лимфатических узлов. Методика: из исследуемого материала готовят препарат "висячая капля", который микроскопируют в тёмном поле. ^ при положительном результате видны тонкие извитые нити длиной 6-14 мкм, имеющие 10-12 равномерных мелких завитков правильной формы. Для T.pallidum (бледной трепонемы) характерны маятникообразные и поступателъно-сгибательные движения. T.pallidum можно обнаружить методом темнопольной микроскопии фиксированных мазков. Мазки фиксируются только высушиванием, т.к. тонкая клеточная стенка микроорганизма не содержит пептидогликана и разрушается при фиксации спиртом. Бактерии восстанавливают нитрат серебра в металлическое серебро, что придает им черную или темно-коричневую окраску. В отечественной практике распространен метод серебрения по Морозову. Дифференциальная диагностика: при развитии поражений на слизистой оболочке полости рта при вторичном сифилисе, а также при локализации твёрдого шанкра в полости рта приходится дифференцировать T.pallidum от сапрофитных трепонем, являющихся представителями нормальной микрофлоры. В этом случае решающее диагностическое значение имеет обнаружение типичных трепонем в пунктате регионарных лимфатических узлов. Бактериологическое исследование: не применяется в связи со сложностью культивирования возбудителя. Экспресс-методы диагностики: биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз. Серодиагностика сифилиса Наиболее доступна и применяется как основной метод диагностики. Серологические методы диагностики применяются для подтверждения клинического диагноза сифилиса, выявления скрытого сифилиса, контроля за лечением, в качестве одного из критериев излеченности инфекции, а также для скрининга групп населения в целях профилактического осмотра. В крови у больных сифилисом выявляются неспецифические (реагины) и специфические (трепонемные) антитела. Неспецифические антитела (реагины) направлены против липидных антигенов T.pallidum и против аутоантигенов липидной природы (кардиолипин, лецитин, холестерин), появляющихся вследствие деструкции клеток организма в процессе инфекции. Специфические антитела классов IgG и IgM направлены против протеиновых антигенов T.pallidum. Необходимо помнить, что первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательными серологическими реакциями. Антитела в крови больных удаётся обнаружить не ранее, чем через 2-3 недели после появления твёрдого шанкра. Для серо- и ликвородиагностики сифилиса в России могут применяться следующие методы: 1.Микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном (МР), которая является отборочным тестом при обследовании населения на сифилис. Постановка МР осуществляется с плазмой или инактивированной сывороткой крови. 2.Иммуноферментный анализ (ИФА). С использованием антигена из культуральных или патогенных бледных трепонем. 3.Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), с использованием антигена из культуральных или патогенных бледных трепонем. 4.Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в следующих модификациях: РИФ-абс, РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца. Антиген - патогенная бледная трепонема штамма Никольса. 5.Комплекс классических серологических реакций на сифилис (КСР), состоящий из реакции связывания комплимента (реакция Вассермана) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами. Поскольку трепонемный антиген является специфическим, КСР являются диагностическими тестами. 6.Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса. РИТ, РИФ, ИФА и РПГА являются высокочувствительными и высокоспецифичными реакциями на сифилис. Они относятся к диагностическим подтверждающим тестам. При диагностике скрытого сифилиса целесообразна постановка двух специфических тестов одновременно. ^
Микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном (экспресс-метод). Принцип. При добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс антиген-антитело), выпадающий в виде хлопьев белого цвета. Методика. В лунку на пластине из плексигласа (или на обычное стекло) наносят 3 капли сыворотки и добавляют 1 каплю кардиолипинового антигена. Смесь тщательно перемешивают и учитывают результаты. Положительная реакция характеризуется образованием и выпадением хлопьев разной величины; при отрицательном результате наблюдается равномерная лёгкая опалесценция. Положительная реакция микропреципитации позволяет поставить предварительный диагноз и направить пациента на дальнейшее обследование. Для получения достоверных результатов следует пользоваться одной и той же серией препарата при обследовании больного в процессе лечения, что относится ко всем реакциям на сифилис. К моменту снятия леченного больного с учёта неспецифические тесты с кардиолипиновым антигеном обычно негативируются, в то время как позитивность специфических реакций может наблюдаться долгое время после окончания лечения. В связи с этим данные тесты не могут служить критерием излеченности. Больные снимаются с учёта с положительными результатами РИТ. РИФ, ИФА, РПГА. ^
^ Таблица 8.
^ Материал для исследования: гнойное отделяемое и мазки со слизистых оболочек мочеполовых органов и прямой кишки, отделяемое конъюнктивы глаза при бленнорее. Методы диагностики: 1. бактериоскопический 2. бактериологический 3. серологический 4. экспресс-методы: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Для качественного проведения лабораторной диагностики гонореи важное значение имеет правильное взятие от больного патологического материала, правильное приготовление мазков и производство посева. Материал для исследования должен быть максимально быстро доставлен в лабораторию в избежания аутолиза гонококков, которые очень чувствительны к изменению температуры и охлаждению. ^ Методика: взятый материал наносят тонким равномерным слоем обязательно на два предметных стекла, фиксируют спиртом, высушивают и окрашивают - одно метиленовым синим или бриллиантовым зелёным, другое - по Граму. Оба окрашенных мазка исследуют под микроскопом. Мазки, окрашенные метиленовым синим, нужно использовать для изучения морфологии и расположения диплококков, в то время как окончательный лабораторный диагноз гонореи ставится на основании мазков, окрашенных по Граму. ^ при положительном результате в мазках обнаруживаются грамотрицательные диплококки бобовидной формы, которые могут располагаться как внутри лейкоцитов, так и внеклеточно. При правильной окраске по методу Грама ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) должны частично удерживать основную фиолетовую окраску (критерий правильности окраски), т.е. в центре они должны быть окрашены в фиолетовый цвет, а по периферии - в оранжево-красный. Гонококки, расположенные в лейкоцитах и на эпителиальных клетках, будут оранжево-красные. Внутри лейкоцитов диплококки располагаются парами или группами так, что одни диплококки лежат по отношению к другим под различными углами. Внеклеточное расположение гонококков также имеет свои характерные особенности. Часто гонококки лежат на клетках плоского эпителия в большом количестве рядами с расположением диплококков под углом или перпендикулярно друг к другу внутри ряда. Частота внутри- и внеклеточного расположения гонококков зависит как от периода заболевания, так и от методики взятия материала. Положительный бактериоскопический диагноз ставится в основном при острой форме гонореи до применения антибиотиков. При хронической гонорее бактериоскопическое исследование часто даёт отрицательный результат, т.к. в этих случаях возбудители могут иметь атипичную форму в виде шаров или, наоборот, очень мелких образований. Кроме того, в препарате обнаруживают разнообразную постороннюю микрофлору, лейкоциты, эпителиальные и другие клеточные элементы. При хроническом или торпидно протекающем воспалительном процессе, если после первого исследования мазков гонококки в отделяемом не обнаружены, производят комбинированную провокацию с 3-х дневным (через 24-48-72 часа) бактериоскопическим исследованием отделяемого слизистых оболочек тех же очагов. Виды провокации
Лучшим методом провокации является одновременное комбинированное применение указанных её видов с учетом противопоказаний. Бактериологическое исследование Показания к бактериологическому исследованию:
^ наиболее широко используются два вида сред – асцит-агар и безасцитные питательные среды с добавлением казеина, дрожжевого экстракта и сыворотки крови. Основой обеих сред является МПА из мяса кроликов или свежих бычьих сердец. Асцитическая жидкость должна быть получена от больных с асцитом, причиной которого является сердечная недостаточность, и не должна содержать желчных пигментов. Методика: выращивание гонококков можно производить в пробирках или на чашках Петри. Посевы инкубируют при 37°С в атмосфере с повышенным содержанием СО2 (не менее 3%) в течение 24-72 часов. Гонококки образуют круглые прозрачные колонии, напоминающие капли росы в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также могут расти на этих средах. При снятии колоний с поверхности среды петлей или при получении суспензии гонококков в изотоническом растворе хлорида натрия или водопроводной воде с целью получения мазков из культур на предметном стекле определяется их слизистая консистенция. Подозрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого ряда» или с помощью микротестсистем. Гонококки ферментируют только глюкозу с образованием кислоты. ^ важное эпидемиологическое значение имеет выявление экстрагенитальных очагов гонореи. В связи с тем, что бактериоскопия при гонорее миндалин и глотки дает обычно отрицательный результат, первостепенное значение приобретает бактериологическое исследование. Ввиду наличия на слизистой оболочке миндалин и глотки большого числа различных нейссерий решающее значение приобретает выделение чистых культур грамотрицательных кокков и их тщательная идентификация путем изучения морфологических свойств, особенностей роста на питательных средах, пигментообразования и определения сахаролитических свойств. Наиболее трудным является дифференцирование гонококка от менингококка. Следует учитывать возможность получения смешанных культур гонококка с другими нейссериями. В мазках из культур гонококк отличается от других нейссерий меньшей интенсивностью окраски и четкостью контуров, более выраженным лизисом и типичным расположением в виде скоплений с густым центром и рассыпанными по периферии кокками. Это расположение обусловлено большей слизистостью колоний гонококка. Колонии большинства непатогенных нейссерий непрозрачны, гонококка и менингококка - прозрачны. Колонии гонококка мельче колоний менингококка, последние - более плоские. При изучении роста микроорганизмов через слой питательной среды с боковым электрическим освещением отмечается голубой оттенок колоний менингококка, в то время как колонии гонококка имеют цвет среды или являются беловатыми. ^ Принцип. Реакция связывания комплимента (РСК). Специфические антигонококковые антитела вступают в соединение со специфическим антигеном (убитая культура гонококка, содержащая 3 млрд. микробных тел в 1 мл). Образовавшиеся комплексы сорбируют вводимый в реакцию комплимент. Индикация образовавшихся комплексов достигается введением гемолитической системы (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка). РСК применяется для выявления больных гонореей, в основном при хронических и осложненных формах заболевания. ^ для обозначения позитивности реакции пользуются системой четырех плюсов. Полная задержка гемолиза в опытных пробирках расценивается как резко положительный результат (++++), значительная задержка гемолиза - положительный (+++), частичная задержка гемолиза слабоположительный (++ и +), незначительная задержка гемолиза - сомнительный (+/-). Полный гемолиз в опытных пробирках расценивается как отрицательный результат реакции. С положительными сыворотками крови (++++) ставят количественный метод реакции Борде-Жангу. Этим методом определяют титр антител в положительных сыворотках крови путем исследования в РСК уменьшающихся количеств сыворотки крови, разведенных изотоническим раствором хлорида натрия. Титром антител исследуемой сыворотки крови является последнее разведение, давшее положительный результат (задержка гемолиза). ^
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
 |
●Условно-патогенные кокки, способные вызывать заболевания различной локализации: Стафилококки Стрептококки |
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям