Грамположительные кокки
|
|
Скачать 1.2 Mb.
|
|
^
(подробнее см. в теме ЗППП) Neisseria gonorrhoeae является возбудителем гонореи и бленнореи, лишь в редких случаях, вызывает воспаление слизистых глотки и прямой кишки. Гонококки представляют собой диплококки размером 1,2 х 0,8 мкм, состоящие из двух бобовидных кокков, располагающихся вогнутыми сторонами друг к другу. Спор не образуют, имеют нежную капсулу, жгутиков не имеют, грамотрицательны. Гонококки - факультативные анаэробы, на простых питательных средах не растут. Оптимальная температура роста 35-36°С. Биохимические свойства гонококков выражены слабо: ферментируют глюкозу с образованием кислоты, обладают цитохромоксидазной активностью. ^ У мужчин - отделяемое из уретры, сок предстательной железы, сперма, осадок мочи. У женщин - отделяемое влагалища, шейки матки, моча. В необходимых случаях берут соскобы со слизистых других возможных очагов поражения (прямой кишки, глотки, конъюнктивы глаз). Материал отбирают стерильной петлей, ватным тампоном или ложечкой не ранее чем через 2 часа после последнего мочеиспускания или спринцевания и доставляют в лабораторию максимально быстро во избежание аутолиза гонококков. ^ Готовят два мазка из исследуемого материала, фиксируя их 96% спиртом в течение 3 минут. Один из мазков окрашивают метиленовым синим, другой - по Граму, При положительных результатах в мазках обнаруживают грамотрицательные диплококки бобовидной формы, находящиеся внутри лейкоцитов. Положительный бактериоскопический диагноз ставится с основном при острой форме гонореи до начала антибиотикотерапии. При хронической форме заболевания гонококки либо вовсе не обнаруживаются в мазках, либо имеют атипичную форму (в виде шаров или очень мелких образований). ^ Метод является обязательным при диагностике хронической гонореи, а также для контроля по окончании лечения больных гонореей, при диагностике заболевания у детей, по требованию судебно-медицинской экспертизы. Среды готовят на основе МПА из мяса кроликов или свежих бычьих сердец с добавлением сыворотки крови, дрожжевого гидролизата, казеина. Материал инкубируют при 37°С в течение 24-72 часов в атмосфере, содержащей 10-20% углекислого газа. Гонококки растут в виде круглых прозрачных колоний, напоминающих капли росы. При идентификации гонококков проводится определение биохимической активности. В завершении исследования обязательно определяют чувствительность культуры к антибиотикам. ^ . Самостоятельного значения не имеют. При хронической гонореи и в сомнительных случаях ставят РСК (реакция Борде-Жангу) с сывороткой крови больного. В качестве антигена используют взвесь гонококков, убитых формалином. В настоящее время применяется иммунофлюоресцентное исследование, ИФА. Генодиагностика - (ПЦР). Принцип метода заключается в естественной репликации ДНК, включающей тепловую денатурацию нуклеиновой кислоты (плавление), ее отжиг с синтетическими олигонуклеотидными праймерами и удлинение цепи (элонгация). Смена этих этапов происходит в результате простого изменения температуры реакционной смеси. Метод ПЦР обеспечивает многократное приумножение (амплификацию, amplification - усиление, увеличение) в условиях in vitro фрагментов генома и быстрое накопление практически в любых количествах определенной, интересующей исследователя последовательности ДНК, которая первоначально может быть представлена всего лишь одной молекулой. В результате получают количество материала, достаточное для проведения анализа обычными методами детекции (рис. 12). Сущность метода ПЦР составляет многократный циклический процесс, попеременно включающий полимеразную реакцию и денатурацию синтезированного фрагмента двунитевой ДНК и отжиг праймеров, что, в конечном счете, может привести к неограниченному увеличению исходного материала. ^ Обоснование темы: Corynebacterium diphtheriae обитают в организме больного человека или носителя. Дифтерия, по-прежнему, в первую очередь поражает детей. Но в настоящее время дифтерия «постарела», зарегистрированы многочисленные заболевания у взрослых, которые протекают в тяжелой форме. Заболевание развивается у лиц, не имеющих антитоксического иммунитета. Анализ причин распространения возбудителя, изучение биологии возбудителя, разработка методов быстрой диагностики и профилактики создаст возможность контролировать заболевание. Цель обучения - дать представление о биологических свойствах возбудителя, способах проникновения в организм, особенностях формирования инфекционного процесса, иммунитета, микробиологической диагностик; познакомить с вопросами профилактики и специфического лечения. Студент должен знать: -механизмы передачи возбудителей -основные факторы иммунной защиты и неспецифической резистентности макроорганизма -принципы лабораторной диагностики -теоретические основы вакцинопрофилактики Студент должен уметь: -правильно выбрать и собрать материал для исследования -выполнять доступные методы исследования (окраска по Граму, Леффлеру, Нейссеру) -учесть культуральные свойства на питательных средах -учесть токсигенные свойства и ферментативную активность микроба -оформить результаты микробиологического исследования ^
Дополнительные вопросы для педиатрического факультета
Дополнительные вопросы для стомфака
Вопросы для самоконтроля
^ Дифтерийная палочка (Corynebacterim diphtheriae) является грамположительной палочковидной бактерией, неподвижной, не образующей спор и капсул. Отличительной морфологической особенностью этого микроба является наличие в его цитоплазме зерен волютина. Дифтерийная палочка хорошо растет на простых питательных средах, но для выделения микробов рекомендуется использовать элективные питательные среды: Клауберга, хинозольную среду Бучина, модифицированную среду Тинсдаля (цистин-теллурит-сывороточная среда), кровяной теллуритовый агар. Дифтерийная палочка при росте на питательных средах и в организме больного продуцирует сильный экзотоксин, который обладает избирательным действием на мышцу сердца, надпочечники и периферические нервы. Забор материала Материал берет врач или опытная медсестра сухим стерильным тампоном. При необходимости пересылки материала тампоны смачивают 5% раствором глицерина в физиологическом растворе. Можно использовать среды обогащения: Пергола или полужидкую среду. Материал из зева следует брать до еды, язык фиксировать шпателем, затем тампоном, не касаясь языка, зубов и слизистой щек, извлечь материл на границе пораженной и здоровой тканей (материал целесообразно забирать до начала антибиотикотерапии или через 3 дня после отмены антибиотиков). Тампоны в пробирках этикетируются следующим образом: на каждый анализ заполняют бланк-направление, в котором указывают ФИО исследуемого, вид материала, цель направления, время забора материала, ФИО отправителя, адрес получателя заключения. Бактериоскопическое исследование Бактериоскопия малоинформативна, поэтому мазки с тампона делают только по требованию врача, направляющего материал на анализ. В этом случае материал должен быть забран двумя тампонами (для мазка и для посева). Фиксированные мазки окрашивают по Леффлеру, уксусной толуидиновой синей или по Нейссеру. Для люминесцентной микроскопии окрашивают корифосфином. Целесообразно один мазок окрасить по Граму. Наличие грамположительных палочковидных микроорганизмов, обнаружение волютиновых зерен, расположенных на концах клеток, а также расположение микроорганизмов в виде растопыренных пальцев или “V” позволяет предположить наличие в материале дифтерийных бактерий. Предварительный результат оформляется на отдельном бланке. Бактериологическое исследование Инфицированным тампоном проводят посев на одну из рекомендуемых сред: кровяной теллуритовый агар, среда Клауберга–II, хинозольная среда Бучина, среда Тинсдаля (цистеин-теллурит-сывороточная среда). Посевы со сред обогащения производят петлей. Предварительно материал в среде обогащения инкубируют. Чашки с засеянным материалом инкубируют в термостате и изучают через 24-48 часов. На средах с теллуритом калия хорошо различимы биовары. Биовар гравис - крупные серые шероховатые с радиальной исчерченностью колонии; биовар митис - мелкие черные блестящие выпуклые гемолитические колонии; биовар интермедиус имеет промежуточные признаки. На хинозольной среде колонии возбудителя дифтерии окрашиваются в синий цвет, а среда на месте образования колоний приобретает фиолетовый оттенок (следствие восстановления индикатора). На среде Тинсдаля формируются круглые, выпуклые, блестящие черные или темно-коричневые колонии, окруженные темно-коричневым ореолом, являющимся специфическим признаком роста и размножения дифтерийного микроба. Изучив колонии микроорганизмов по внешним признакам и особенностям роста, отбирают из них 2-3 типичных. Для накопления чистой культуры из отобранных колоний микроорганизмы пересевают на скошенный сывороточный агар, а также готовят мазки, окрашивают их по методам Нейссера и по Леффлера. Оставшуюся часть колоний засевают на среду для определения токсигенности и среду для выявления цистиназной активности (проба Пизу). Поскольку на чашке первичного посева могут одновременно вырастать колонии токсигенных и нетоксигенных вариантов C.diphtheriae, рекомендуется в тесте на токсигенность испытывать максимальное число колоний (10-20), смешивая материал нескольких колоний в одну бляшку. Через 24 часа инкубации при появлении специфических линий преципитации изучаемую культуру идентифицируют как токсигенную и выдают документированный ответ. В случае отсутствия токсигенности чашки инкубируют еще 24 часа. Накопленную на сывороточном агаре чистую культуру используют для определения ферментативной активности на средах Гисса с глюкозой, сахарозой, крахмалом и мочевиной (проба Закса). На 4 день исследования учитывают сахаролитические свойства, уреазную активность (проба Закса), а также повторно (через 48 часов) изучают результат пробы на токсигенность. Проба Закса может быть положительной уже через 30 минут пребывания материала в термостате (при усвоении мочевины среда ощелачивается и за счет фенолового красного окрашивается в красный цвет). При отсутствии специфических линий преципитации, но при положительном результате на цистиназу, глюкозу, отрицательном результате на уреазу и сахарозу культуру идентифицируют как нетоксигенные коринебактерии. Положительный тест с крахмалом свидетельствует о выделенном биоваре гравис. Определение токсигенности. In vitro: В основу метода положен принцип взаимодействия дифтерийного токсина и антитоксической противодифтерийной сыворотки, диффундирующих в толщу агара и образующих в нем зоны преципитации. Пропитанную антитоксической сывороткой (500МЕ в 1мл) фильтровальную полоску 1,5 ∙ 8 см накладывают на середину чашки с мартеновским агаром. Открытую чашку подсушивают в термостате 15 минут. Испытуемую культуру петлей наносят на питательную среду в форме бляшек или перпендикулярных к полоске линий. Между двумя исследуемыми культурами засевают штамм заведомо известных токсигенных дифтерийных бактерий. Чашки помещают в термостат при температуре 37°С и через 24-48 часа учитывают результат. Просматривают питательную среду в проходящем свете или с помощью лупы. Обнаружение линий преципитации, идущих от заведомо токсигеных штаммов и от исследуемых культур в виде четких «усов», свидетельствует о токсигенности выделенных культур. Обнаружение дифтерийного токсина в сыворотке возможно в реакции агглютинации с латексом.In vivo: Токсигенность возбудителя дифтерии может быть определена в опыте на морских свинках путем внутрикожного или подкожного заражения. Токсигенные культуры приводят к гибели животных в течение 3-5 суток, при вскрытии можно обнаружить гиперемированные надпочечники, а при внутрикожном заражении - некроз кожи. Серологическая диагностика направлена на определение антитоксического иммунитета. Титр антитоксинов в сыворотке определяют в РА, РНГА, ИФА. ^ Таблица 3
Обозначения: (+) - наличие признака, (-) - отсутствие признака; (+–) признак вариабелен. Тема:БОРДЕТЕЛЛЫ Обоснование темы: Бордетеллы являются возбудителем коклюша и паракоклюша, заболеваний которые чаще всего поражают детей дошкольного возраста и распространены повсеместно. При соответствующей вакцинопрофилактике удается контролировать заболеваемость коклюшем. Однако с введением вакцинопрофилактики произошли существенные изменения клинической картины с преобладанием умеренно выраженных и стертых форм (до 95%) болезни. Основным методом диагностики заболеваний, вызванных бордетеллами, является бактериологический метод. Цель обучения - сформировать представление о роли бордетелл в развитии заболеваний у человека, биологических свойствах микробов, особенностях развития инфекционного процесса, формирования невосприимчивости человека к коклюшу, особенностях микробиологической диагностики и профилактики. ^ -способы передачи возбудителей -стадии формирования инфекционного процесса -формирование иммунитета при бактериальных инфекциях -основные принципы конструирования питательных сред -правила забора и транспортировки инфицированного материала -теоретические основы вакцинопрофилактики |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
 |
●Условно-патогенные кокки, способные вызывать заболевания различной локализации: Стафилококки Стрептококки |
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям