Кабинет лабораторных исследований «овум»
|
|
Скачать 1.14 Mb.
|
|
^ В качестве альтернативы ПЦР- анализу используется методика НАСБА (NASBA- Nucleis Acid Sequence-Based Amplification), выявляющая молекулы рибосомальных РНК бактерий. Данная методика обладает максимальной чувствительностью, так как мишенью для реакции служит РНК рибосом, которых находится в количестве от сотен до десятков тысяч на одну клетку, обеспечивая достаточное количество мишеней для реакции даже при малом количестве бактериальных клеток в образце. В связи с этим чувствительность тестов приближается к 100%. Реакция НАСБА выявляет присутствие лишь живых микробов (так как РНК быстро деградирует при гибели клетки). Это позволяет судить о наличии или отсутствии жизнеспособных возбудителей и проводить тесты излеченности сразу после окончания терапии, в отличие от ПЦР- анализа, при котором контроль лечения проводится не ранее чем через 4 недели. Реакция НАСБА, не уступая по чувствительности и специфичности ПЦР- анализу, может использоваться и как подтверждающий тест его результатов. ^ 1. За 10 дней до взятия материала на исследование необходимо прекратить прием химиопрепаратов, особенно антибиотиков, и лечебные процедуры. 2. При вялотекущих формах заболеваний, особенно гонореи и хламидиоза, перед исследо- ванием желательно провести провокацию употреблением острой и соленой пищи и пива. 3. У женщин забор материала следует производить за 1-2 дня перед менструацией или через 1-2 дня после её окончания или взятие материала должно проводиться в период обострения инфекции. 4. В день явки на обследование не проводить туалет наружных половых органов и спринцевание. 5.При взятии материала из уретры необходимо исключить мочеиспускание за 3-4 часа перед взятием материала. 6. Забор материала производится специальным одноразовым зондом (щеточкой) в специальные пластиковые пробирки с транспортной средой. Забор секрета простаты для исследования методом ПЦР производится в количестве 0,5-1,0 мл с одноразовую сухую стерильную пробирку. Забор эякулята для исследования методом ПЦР производится в одноразовую сухую стерильную пробирку с транспортной средой. Забор мочи для исследования методом ПЦР производится в количестве 20 мл в одноразовую сухую стерильный флакон с завинчивающейся крышкой. Для исследования необходимо собирать первую порцию утренней мочи. Если нет возможности придерживаться данных правил, то следует учитывать, что это может повлиять на качество результатов исследования и снизить их диагностическую ценность. ^ При проведении ПЦР возможны как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Основной причиной ложноположительных результатов ПЦР является перекрестная контаминация (загрязнение) продуктами амплификации. Однако при соблюдении правильных условий постановки реакции, четкого выполнения инструкций этой проблемы удается избежать. Применение тест-систем для ПЦР нового поколения- формата FLASH (флуоресцентной детекции)- когда после проведения реакции не требуется открывание пробирок, а результат реакции считывается специальным прибором - флуориметром через стенку пробирки, проблему контаминации полностью удается решить. Кроме того, при интерпретации результатов, следует учитывать, что ПЦР выявляет только небольшую часть генома микроорганизма и, следовательно, не является критерием его жизнеспособности. Это следует учитывать при проведении тестов контроля излеченности, которые рекомендуется проводить не ранее чем через 4 недели после окончания терапии. Фрагменты нуклеиновых кислот нежизнеспособных бактерий могут определяться ещё в течение 1-2 месяцев после проведенного лечения. Ложноотрицательные результаты возникают вследствие присутствия в клиническом образце веществ, которые ингибируют ПЦР. Ингибиторами ПЦР являются примесь гноя, крови, мочевины, лекарственных препаратов и других веществ в исследуемом материале. Также отрицательные результаты ПЦР возможны при несоблюдении правил подготовки пациента к исследованию или взятии материала для исследования из мест не соответствующих локализации возбудителя. В лаборатории «ОВУМ» точность и достоверность работы по проведению ПЦР- анализа проверяется многоуровневой системой контроля качества исследований. Существует система внутрилабораторных контролей - ежедневная постановка отрицательного и положительного контроля, позволяющих сделать выводы о правильности проведения реакции. Также ежеквартально проводится внешний контроль оценки качества исследований лаборатории – участие в ФСВОК (Федеральной системе внешней оценке качества лабораторных исследований МЗ РФ). Код лаборатории в реестре ФСВОК- 06957. ^ Предоставляем анализ заболеваемости ИППП мужчин и женщин города Кемерово за период с декабря 2004г по январь 2006г. В нашей лаборатории проводилась оценка спектра инфицированности населения г. Кемерова урогенитальными инфекциями с применением метода молекулярной биологии - ПЦР. Было проведено обследование 4625 женщин и 2253 мужчин репродуктивного возраста, обратившихся в амбулаторно-поликлинические службы Кемерова с признаками воспалительных заболеваний урогенитального тракта. Пациентам проводилось обследование по обнаружению ИППП методом полимеразной цепной реакции- исследовались урогенитальные соскобы. Применялись наборы НПФ «ДНК-Технология» (г. Москва), НПФ «Литех» (г. Москва), и НПФ «Ампли-Сенс» (г. Москва). Уровень инфицирования обследованных составил: 
Полученные данные свидетельствуют о высоком уровне инфицированности населения репродуктивного возраста. Более высокие показатели инфицированности отмечены в молодой возрастной группе (17-21 год), что может быть обусловлено сочетанием высокой сексуальной активности с малой информированностью об ИППП и социальной незрелостью. Показатели выявляемости специфических возбудителей (хламидий, гонореи, вирусов гепеса и цитомегаловируса ) у мужчин и женщин находятся примерно на одном уровне, так как данные возбудители паразитируют внутриклеточно. У женщин в спектре ИППП превалируют условно-патогенные бактерии (уреаплазмы, микоплазмы, гарднереллы), что связано с несколькими причинами, создающими благоприятные условия для развития анаэробных микроорганизмов:
Оценка уровня инфицированности урогенитального тракта женщин условно-патогенными бактериями. В структуре инфекционно-воспалительных заболеваний у женщин репродуктивного возраста и беременных большую роль играют условно-патогенные бактерии, способные вызвать патологический процесс при наличии предрасполагающих факторов или превышении пороговой концентрации возбудителя. В настоящее время, для диагностики инфекций, вызванных бактериями данной группы, в качестве скрининга применяется метод генодиагностики - ПЦР- анализ. Чувствительность ПЦР- анализа очень высока и позволяет выявить фрагменты ДНК даже единичных бактерий в исследуемой пробе, которые могут обнаруживаться и у здоровых женщин. Новым в молекулярной биологии явилась разработка метода ПЦР в режиме реального времени (Real time), который позволяет проводить количественное определение ДНК или РНК микроорганизмов в исследуемой пробе и оценивать уровень микробной обсемененности. Исследование проводилось в период с августа 2006 г по январь 2007г. Было проведено обследование 552 беременной женщины в возрасте 17-43 лет на сроках гестации от 6 до 29 недель, проходивших лечение по поводу угрозы прерывания беременности в гинекологических отделениях и дневных стационарах женских консультаций. Первобеременные-28%, повторнобеременные -72%. Работающие- 61%, неработающие-22%, студентки-17%. До настоящей беременности страдали гинекологическими заболеваниями- 77%. До беременности были обследованы на хронические инфекции-21%, не обследованы-79%. Параллельно оценивался уровень инфицированности у 843 женщин репродуктивного возраста от 18 до 42 лет, как имеющих признаки урогенитальных инфекций, так и обратившихся с профилактической целью в женские консультации города Кемерово. Всем женщинам проводилось морфологическое исследование методом световой микроскопии, генодиагностика –определение фрагментов ДНК условно-патогенных бактерий методами количественного (Real time) и качественного ПЦР- анализа, серологическая диагностика методом ИФА. Методом световой микроскопии исследовались окрашенные препараты мазков из влагалища, цервикального канала и уретры. Исследование проводилось на микроскопе Axiostar Plus фирмы «Карл Цейс», (Германия), оценивалось наличие воспалительных изменений, клеточная реакция, количество и морфотипы бактерий. Методом ПЦР исследовались соскобы из цервикального канала и влагалища на наличие участков ДНК урогенитальных инфекций, использовались реактивы фирм «ДНК- Технология», «Литех», «Ампли Сенс» (г. Москва). Методом ИФА проводили исследование сыворотки крови для определения специфических иммуноглобулинов к Chlamydia trachomatis; Herpes simplex virus 1,2 types, Cytomegalovirus, Toxoplasma gondii. Исследования проводились с применением реактивов ЗАО «Вектор Бест» (г. Новосибирск), «DRG diagnostic» (Германия), «Radim» (Италия). ^ Распределение обследованных методом морфологии по типу микроценоза:
  Частота выявления возбудителей ИППП составила:
  При этом ДНК условно- патогенных бактерий выявлялось ПЦР-методом во всех группах пациенток, но концентрации были различны.В группе женщин с неспецифическим бактериальным вагинитом ДНК условно-патогенных бактерий выявлялось у 203 пациенток (97%) в концентрации104-109 копий/мл, в группе с декомпенсированным бактериальным вагинозом- у 349 (78%) в концентрации103-109 копий/мл, в группе с субкомпенсированным бактериальным вагинозом – у 213 (53%) в концентрации102-105копий/мл, с промежуточным типом микроценоза- у 57 (32%) в концентрации101-103 копий/мл и у 11 (18%) женщин с нормоценозом в концентрации101-102 копий/мл. Лактобактерии обнаруживались у пациенток с компенсированным бактериальным вагинозом, промежуточным типом микроценоза, нормоценозом и не выявлялись в группе женщин с диагнозами неспецифический бактериальный вагинит и декомпенсированный бактериальный вагиноз. Проведённое исследование свидетельствуют о высоком уровне распространения инфекций, передающихся половым путём, как у небеременных женщин репродуктивного возраста, так и у беременных Кемерова. Большую роль в развитии патологических процессов, приводящих к невынашиванию беременности, играют не столько специфические патогенные микроорганизмы, полученные женщиной извне (хламидии, гонококки, трихомонады), сколько условнопатогенные бактерии (уреаплазмы, микоплазмы, гарднереллы) и кандиды, что связано с особенностями гормонального фона и измененной иммунологической реактивностью во время беременности. Микст-инфекции выявлялись в 24 % случаев у женщин репродуктивного возраста и в 38% случаев у беременных женщин. Исходы беременностей были следующие: прогрессирующая беременность -82%, самопроизвольный аборт-10,5%, замершая беременность (после лечения)-7,5%
На основании проведенных исследований были сделаны выводы, что применение одного метода обследования не дает полной диагностической информации в случае диагностики инфекций, вызванных условно-патогенной флорой. Необходимо проведения комплексного обследования пациенток. Бактерии, участвующие в патогенезе воспалительного процесса во влагалище, в норме, могут являться коменсалами вагинального тракта женщины, поэтому результаты применяемых методов лабораторной диагностики должны носить не только качественный, но и количественный характер. Диагностически значимая концентрация условно- патогенных бактерий была определена концентрация 103 копий/мл, поэтому проведенные исследования позволили отдифференцировать пациенток с заболеваниями, вызванными условно- патогенными бактериями от здоровых. Сочетание метода морфологии, позволяющего выявить наличие воспалительных изменений, косвенно оценить количественное содержание и морфотипы бактерий, и метода Real time- ПЦР, позволяющего определить видовую принадлежность микроорганизмов и оценить их количественное содержание, позволяет своевременно назначить лечение нуждающимся пациентам и избежать гипердиагностики и нерационального назначения антибактериальной терапии у здоровых. Данное исследование показывает необходимость комплексного лабораторного обследования на наличие возбудителей ИППП женщин в плане прегравидной подготовки, а также беременных, с целью проведения соответствующего своевременного лечения и предупреждения возможных осложнений. ^ Хронические воспалительные заболевания предстательной железы являются наиболее распространенными среди урологических заболеваний у мужчин. Течение простатитов хоть и не угрожает жизни пациента, но значительно снижает её качество. Простатит сопровождается нарушениями в половой и репродуктивной сфере, что обуславливает также и социальную значимость данного заболевания. Основной из причин развития простатита является инфекция, а определяющее значение в диагностике инфекций принадлежит комплексу лабораторных методов обследования. В лаборатории «ОВУМ» за период с августа 2006г. по январь 2007г. были обследованы 1027 пациента с клиническим диагнозом хронический простатит в возрасте от 24 до 63 лет. Каждому пациенту проводилось микроскопическое исследование, ПЦР - анализ инфекций, передающихся половым и серодиагностика методом ИФА. Методом световой микроскопии исследовались окрашенные препараты мазков из уретры, секрета простаты и эякулята. Исследование проводилось на микроскопе Axiostar plus фирмы «Карл Цейс» (Германия), оценивалось наличие воспалительных изменений (по европейским критериям - более 5 лейкоцитов в поле зрения), клеточная реакция, количество и морфотипы бактерий. Методом ПЦР оценивались соскобы из уретры, секрет простаты и эякулят на наличие урогенитальных инфекций с использованием реактивов фирмы «ДНК- Технология» (г.Москва). Также определялись иммуноглобулины классов JgA и JgG к хламидии трахоматис, JgM и JgG к вирусу простого герпеса 1,2 типа и цитомегаловирусу, использовались реактивы фирмы «DRG diagnostic» (Германия). По данным микроскопии, наличие воспаления было выявлено в 508 (49,5%) мазках из уретры, 917 (89,3%) мазках секрета простаты и 894 (87%) мазках эякулята.   По данным ПЦР и ИФА, инфицирование трихомонас вагиналис выявлено у 89 пациентов -8,7%, нейссерией гонореи- у 33 -3,2%, кандидой альбиканс- у 54 -5,3%, хламидией трахоматис- у 144 -14%(в концентрации 2,0х10²- 5,6х10³ копий/мл), уреаплазмой уреалитикум- у 329 -32%( 2,0х10¹- 5,6х105 коп/мл), гарднереллой вагиналис- у 216 -21%( 4,6х10²- 7,3х104 коп/мл), микоплазмой гениталиум- у 86-8,4% ( 3,6х10¹- 7,5х104 коп/мл), вирусом простого герпеса 1,2 типа- у 109 -10,6% (4,2х10¹- 3,3х10³ коп/мл), цитомегаловирусом – у 90-8,8%( 3,8х10²- 8,9х10³ коп/мл). В 28% случаев (у 288 пациентов) было выявлено сочетание 2-х и более инфекций, в 36% (у 370 пациентов) результаты ПЦР были отрицательны. Выводы. Для выявления воспалительного процесса оптимально исследовать не только мазки из уретры, но и мазки секрета простаты и эякулята, так как диагностика воспаления по мазкам из уретры гораздо менее информативна (лейкоциты и флора смываются током мочи). В случае ПЦР исследования, больший процент положительных результатов зарегистрирован в пробах секрета простаты и эякулята, чем в пробах соскобов из уретры, что обусловлено большей концентрацией микрофлоры в секрете простаты. Только в случае определения ДНК хламидии трахоматис и нейссерии гонореи результаты ПЦР в соскобах из уретры совпали с результатами в пробах секрета простаты и эякулята, что может быть обусловлено внутриклеточной локализацией возбудителя инфекции. Уровни инфицирования микоплазмами и гарднереллами, при которых возникает заболевание, у мужчин ниже, чем у женщин – и составляет 101-105 коп/мл (при проведении Real-time ПЦР), это может объясняться тем, что данные микроорганизмы не являются комменсалами урогенитального тракта мужчин, в отличие от женщин, и поэтому могут вызвать заболевание и в меньших концентрациях, а также отсутствием анатомических условий для развития анаэробов. В случае отрицательного результата ПЦР на ИППП в 38% случаев (у141 пациента) реакция ингибировалась из-за выраженной лейкоцитарной реакции. После проведения неспецифической противовоспалительной терапии у данных пациентов были выявлены возбудители ИППП методом ПЦР. В остальных случаях, по данным морфологии, определялась Грам (-) бациллярная флора, вероятно, относящаяся к бактериям кишечной группы. Результаты проведенного исследования свидетельствуют о значительной этиологической роли инфекций, передающихся половым путем. Своевременное комплексное обследование пациента позволяет врачу определить адекватную тактику терапии урогенитальной инфекции, основной задачей которой является эрадикация возбудителей заболевания и устранение воспалительного процесса. ^ Инфекции мочевыводящих путей относятся к наиболее распространенным инфекционным заболеваниям в амбулаторной и в госпитальной практике. Инфекции мочевых путей, наиболее часто это - острый цистит, уретрит, являются одними из самых частых урологических заболеваний женщин. В течение года у 25-35% женщин в возрасте от 20-40 лет имеет место по крайней мере один эпизод мочевой инфекции. Нарушения мочеиспускания широко распространены, у женщин они встречаются в 3 раза чаще, чем у мужчин. К нарушениям мочеиспускания относится болезненное, учащенное мочеиспускание. Болезненное мочеиспускание у женщин чаще всего обусловлено острым циститом- 40%, в 15% - вагинитом, в 5-10% - атрофией эпителия мочевых путей в постменопаузе, в 40% - уретритом. По данным литературы наиболее часто возбудителями инфекций мочевых путей являются грамотрицательные энтеробактерии (70-95 %), вторыми по частоте выделения является стафиликокки (5-20%). Этиологическими факторами уретрита и цистита кроме типичных патогенов, могут быть хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, гонококки, трихомонады и другие возбудители инфекций, передающихся половым путем. Высокая частота обнаружения урогенитальных инфекций при заболеваниях мочевых путей у женщин объясняется следующими факторами: - анатомо-физиологическими особенностями женского организма (короткая и широкая уретра, близость к такому естественным резервуарам инфекции как влагалище и прямая кишка); - частыми сопутствующими гинекологическими заболеваниями - воспалительными процессами во влагалище, гормональными нарушениями, приводящими к дисбиозу влагалища и размножению в нем патогенной микрофлоры; - частотой половых актов- во время полового акта возможно нарушение эпителиального покрова уретры, что создает условия для заселения ее микрофлорой кишечника и влагалища; - характером применяемых контрацептивов- частота возникновения острого цистита выше при использовании диафрагм и спермицидов; - также повышается риск возникновения инфекций мочевых путей во время беременности. Нами было проведено обследование женщин с целью оценки состояния микроценоза уретры, наличия уретрита, установить частоту уретрита и связь с урогенитальными инфекциями у пациенток разных возрастов. Было проведено обследование 338 женщин обратившихся в амбулаторно-поликлинические службы Кемерова с признаками воспалительных заболеваний урогенитального тракта. Пациентки были условно разделены на 2 группы- женщин репродуктивного возраста- 206 человек от 17-40 лет и 132 женщины старшей возрастной группы- от 41 до 69 лет. Всем пациенткам проводилось морфологическое исследование методом световой микроскопии, генодиагностика – определение ДНК условно-патогенных бактерий методами количественного и качественного ПЦР- анализа. Методом световой микроскопии исследовались окрашенные препараты мазков из влагалища, цервикального канала и уретры. Исследование проводилось на микроскопе Axiostar Plus фирмы «Карл Цейс», (Германия), оценивалось наличие воспалительных изменений, клеточная реакция, количество и морфотипы бактерий в трех отделах урогенитального тракта. Методом ПЦР исследовались соскобы из цервикального канала, влагалища и уретры на наличие ДНК урогенитальных инфекций. Пробоподготовка проводилась наборами «ДНКсорб -АМ» фирмы «АмплиСенс»(Москва) и «ДНК-экспресс» фирмы «Литех»(Москва), амплификация с использованием реактивов фирмы «ДНК- Технология» (Москва), на термоциклере «ТЕРЦИК» с детекцией на флуоресцентном детекторе «ДЖИН» по конечной точке и на «ДТ-322» с детекцией в режиме реального времени. Результаты. Распределение обследованных методом морфологии по типу микроценоза составило:
По данным морфологического метода исследования, большое количество микрофлоры в уретре, идентичной флоре в цервикальном канале и влагалище регистрировалось в группе женщин репродуктивного возраста в 34,5 % (71 человек), в старшей возрастной группе- в 32,6% (43 человека). Уретрит выявлен в группе женщин репродуктивного возраста в 18,9 % (39 человек), а в старшей возрастной группе- в 28,8% (38 человек). Среди женщин, у которых был выявлен уретрит, была проведена оценка сопутствующих ему факторов. В старшей возрастной группе в 47,4 % (18 человек) уретрит сочетался с бактериальным вагинозом, в 13,2% (5 человек) с микотическим вагинитом, в 34,2% (13 человек) с неспецифическим вагинитом. В группе женщин репродуктивного возраста в 15,4 % (6 человек) уретрит сочетался с бактериальным вагинозом, в 10,3% (4 человека) с микотическим вагинитом, в 61,5% (24 человека) с неспецифическим вагинитом. При видовой идентификации возбудителей из проб уретры и влагалища от пациентов у которых уретрит сочетался с бактериальным вагинозом и неспецифическим вагинитом в 36,1 % (22 человека) имела место микст инфекция, вызванная двумя и более возбудителями, в 23,0 % (14 человек) обнаружена моноинфекция Ureaplasma urealyticum (в концентрации 104-109 коп/мл в пробах из влагалища и 103-105 коп/мл в пробах из уретры), в 18,0 % (11 человек) выделена Gardnerella vaginalis (в концентрации 105-1011 коп/мл в пробах из влагалища и 103-107 коп/мл в пробах из уретры) в 13,1 % (8 человек) - Chlamydia trachomatis(в концентрации 102-105 коп/мл в пробах из влагалища и 102-106 коп/мл в пробах из уретры), в 3,3 % (2 человека)- Trichomonas vaginalis, в 4,9 % (3 человека) - Herpes simplex virus 1,2 types, в 1,6 % (1 человек) - Cytomegalovirus. По данным проведенного исследования, отмечалось большое количество случаев вторичного поражения уретры при наличии воспалительных заболеваний влагалища и цервикального канала. Развитие уретритов чаще происходило у женщин старшей возрастной группы, что может быть объяснено возрастным снижением барьерных свойств слизистых оболочек половых органов, которое приводит к бактериальной колонизации этих зон и созданию условий для формирования резервуара инфекции у наружного отверстия уретры. Обращает на себя внимание, что чаще всего уретрит развивался у пациенток с бактериальным вагинозом. Это может быть обусловлено реализацией патогенных свойств условно-патогенных микроорганизмов, а также тем, что высокие концентрации анаэробных микроорганизмов создают благоприятные фоновые условия для развития ИППП. Проблема инфекций мочевых путей, протекающих на фоне урогенитальных инфекций, в настоящее время приобретает характер социальной, затрагивая не только физическое здоровье женщины, но и её сексуальную жизнь, приводит к нарушению её детородной функции и трудоспособности. Актуальным является разработка алгоритмов диагностики инфекций мочевых путей у женщин предъявляющих жалобы на дизурические явления или без клинических проявлений с профилактической целью. Обследование пациенток должно включать кроме применяющихся в обычной практике общего анализа мочи и посева мочи следующие этапы:
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
отлично
4
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям