Кабинет лабораторных исследований «овум»
|
|
Скачать 1.14 Mb.
|
|
^ Иммуноферментный анализ (ИФА) относится к непрямым серологическим методам диагностики инфекций, он основан на определении специфических иммуноглобулинов различных классов. Метод позволяет выявлять инфицирование при восходящей и персистирующей инфекции, когда возбудителя нельзя обнаружить прямыми методами, а также позволяет оценить иммунный ответ организма и устанавливать стадию заболевания. В основе метода серологической диагностики лежит определение специфических антител, образовавшихся в процессе иммунного ответа на проникновение возбудителя заболевания (антигена). Принцип иммуноферментного анализа: на твердофазовом носителе (лунки полистиролового планшета) фиксируется антиген возбудителя инфекции, антитела к которому необходимо выявить. При добавлении сыворотки пациента, если в ней содержатся специфические антитела, происходит их связывание с образованием комплекса « антиген- антитело». Затем добавляется коньюгат (антивидовые антитела к иммуноглобулинам человека), содержащий ферментную метку, выявляемую с помощью субстратной смеси- появляется цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанных антител. Результат реакции оценивается на приборах спектрофотометрах с выводом цифровых данных, что исключает субъективность оценки. Различают антитела трех классов: иммуноглобулины M, G, A. Они накапливаются в сыворотке крови и секретах организма через разные промежутки времени от начала инфицирования. При первичном инфицировании первыми появляются иммуноглобулины класса М, которые выявляются методом ИФА с 5 дня от начала инфицирования по 5-6 неделю, затем они в течение нескольких недель или месяцев исчезают из кровотока. Период циркуляции варьирует в зависимости от инфекционного возбудителя, индивидуальных особенностей иммунитета организма. Также иммуноглобулины класса М могут вырабатываться при активации хронической инфекции. Иммуноглобулины класса G выявляются через 3-4 недели от начала первичного инфицирования или от момента обострения хронического заболевания и циркулируют в крови длительно, сохраняясь в течение нескольких месяцев или лет. Увеличение титров IgG в двух последовательно взятых пробах через 2 недели свидетельствует о текущей инфекции или реинфекции. Иммуноглобулинами класса G обеспечивается также постинфекционный или поствакцинальный иммунитет. В данных ситуациях уровни антител не изменяются в динамике, а остаются постоянными. Иммуноглобулины класса А выявляются через 2-4 недели от момента инфицирования или обострения хронического заболевания. 20% от общего пула циркулирует в сыворотке крови, 80% входит в состав секрета слизистых оболочек (их можно определить в семинальной или вагинальной жидкостях). Через 2 недели-2 месяца после эрадикации инфекционного агента иммуноглобулины класса А исчезают из кровотока, что является критерием излеченности. Если IgA не исчезают после проведенного лечения, то это указывает на хроническую или персистирующую инфекцию. У новорожденных и детей до 6 -9 месяцев IgG в крови имеют материнское происхождение, так как еще не могут синтезироваться в организме ребенка. В то же время IgМ синтезируются в организме плода с 14 недели развития, а материнские IgM не проникают через плаценту, поэтому определение специфических IgM в крови новорожденных свидетельствует о внутриутробном инфицировании. Серологические тесты не следует применять в качестве критерия излеченности, так как титр антител остается достаточно высоким в течение длительного времени даже после адекватной терапии. Интерпретация результатов при исследовании иммуноглобулинов:
(-)- отрицательный результат (+) – положительный результат В лаборатории «ОВУМ» интерпретация результатов исследования иммуноглобулинов проводится полуколичественным методом, путем определения УИС (уровня иммунного статуса), когда рассчитывается отношение между оптической плотностью образца сыворотки пациента и оптической плотностью Cut-off (критического значения калибровочной пробы). Образцы рассматриваются как: Положительные: если УИС > 1,1 Сомнительные: если УИС ± 10% от Cut-off (0,91-1,09) Отрицательные: если УИС < 0,9 Если результат исследования сомнителен, необходимо повторить анализ через 7-14 дней с новой порцией крови, при повторно сомнительном результате анализ считается отрицательным. Если результат исследования отрицательный, а есть подозрение на инфицирование, то возможна ситуация когда чувствительность реактивов ниже детектируемого уровня антител – это может быть когда образцы сыворотки взяты слишком рано после инфицирования. В последнем случае необходимо через 2-3 недели взять второй образец сыворотки и протестировать. ^ Для описания связывания антител с антигеном используют термин «авидность»- она характеризует прочность связи специфических антител с соответствующими антигенами. Антитела- молекулы иммуноглобулинов разных классов, которые по мере «созревания» иммунного ответа сменяют друг друга. -первыми в крови обнаруживаются IgМ. Они обеспечивают первичный гуморальный ответ, вырабатываются в ответ на проникновение возбудителя уже через несколько дней, обладают низкой специфичностью. - позже (через 2-3 недели) начинают обнаруживаться IgG, обладающие низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают антиген. Затем развитие иммунного процесса постепенно (это недели и месяцы) идет в сторону синтеза высокоавидных антител, которые более прочно связываются с антигенами. Таким образом, высокая авидность специфических IgG позволяет исключить недавнее первичное инфицирование. За счет высокоавидных антител IgG развивается быстрый вторичный иммунный ответ в случае повторного попадания возбудителя в организм. Поскольку при обнаружении специфических антител в сыворотке крови, необходимо дифференцировать первичную инфекцию от реинфекции или обострения хронического инфекционного процесса, рекомендуется определять авидность антител IgG. Если в крови обнаруживаются IgМ и IgG с низкой авидностью, то это свидительствует о первичной (недавней) инфекции. Если в крови обнаруживаются IgМ и IgG с высокой авидностью, то это свидительствует о повторном попадании возбудителя в организм или обострении (реактивации) заболевания. Если в крови только IgG с высокой авидностью, то это свидительствует о перенесенной инфекции в прошлом. ^ Выявление в исследуемой сыворотке антител с индексом авидности ниже 30-35% (у разных производителей реактивов) указывает на свежую первичную инфекцию обследованного пациента. Выявленный показатель авидности, равный или превышающий 40%, указывает на то, что в сыворотке содержатся анамнестические высоко-авидные антитела, свидетельствующие об инфекции в прошлом. Показатель авидности антител в интервале 31-39% может свидетельствовать о поздней стадии первичной инфекции или недавно перенесенной инфекции только при условии выявления антител в высокой концентрации. Показанием к назначению теста на авидность IgG- антител является выявление положительных результатов определения IgG и IgМ- антител с целью исключения или подтверждения вероятности первичного инфицирования, возможности дифференцировать его от периода реактивации или вторичного проникновения антигена в организм. Актуальным является назначение теста на авидность IgG- антител в диагностике TORCH- инфекций, что входит в обязательный алгоритм обследования беременных женщин. ^ TОRCH: Toxoplasmosis (токсоплазмоз), Rubella (краснуха), Cytomegalovirus (цитомегаловирусная инфекция), Herpes simplex virus (инфекция, вызываемая вирусом простого герпеса) и Other - другие инфекции (гепатиты, сифилис, хламидиоз, листериоз и др.). Актуальность проблемы обусловлена особенностями данных заболеваний: - пожизненная персистенция возбудителя в организме при отсутствии клинических проявлений заболевания, - широкая распространенность среди всех групп населения, - отсутствие характерной клинической симптоматики, - высокий риск развития патологии у плода или новорожденного в случае первичного инфицирования женщины во время беременности, - обострение латентной инфекции при ослаблении иммунитета (иммунокомпрометированные пациенты). Следовательно, можно выделить контингенты, относящиеся к группам риска: беременные, новорожденные при внутриутробном инфицировании, иммунокомпрометированные пациенты, в том числе ВИЧ-инфицированные, доноры и реципиенты органов и тканей. Особенно важным в диагностике ToRCH инфекций является дифференцировка первичного инфицирования. Так, например, частота внутриутробного инфицирования плода в случае первичной инфекции во время беременности превышает 50-60%. Традиционные методы, используемые для серологической диагностики острой фазы вирусных, бактериальных и паразитарных инфекций, в данном случае имеют ряд ограничений. Причиной этого является атипичная динамика антителообразования, когда наличие иммуноглобулинов класса М (IgM) не является достоверным и достаточным признаком для определения стадии заболевания. Было доказано, что их можно выявить в сыворотке периферической крови спустя месяцы или даже годы после наступления сероконверсии (так называемые хронические IgM). Кроме того, выявление IgM может дать ложнопозитивные результаты, например, вследствие вторичной инфекции (экзогенная реинфекция или эндогенная реактивация инфекции). Было показано, что специфические IgA также могут присутствовать в сыворотке периферической крови через 2-3,5 года с момента зарегистрированной сероконверсии. Это затрудняет дифференциальную диагностику первичной инфекции от реинфекции или реактивации инфекционного процесса. ^ , основанная на определении титра специфических иммуноглобулинов класса G (IgG), может быть полезной при дифференциации активного периода болезни от перенесенной в прошлом и уже неактивной инфекции. Однако этот метод имеет ряд ограничений: - не позволяет дифференцировать первичную и реинфекцию; - у пациентов с реактивацией хронического процесса не всегда наблюдается достоверный рост уровня IgG; Поэтому для установления точного времени инфицирования и разграничения первичной инфекции, реинфекции и реактивации инфекционного процесса в 1988г. был предложен тест на определение авидности IgG антител. На первом этапе обследования проводится определение специфических антител класса M и G к определенной инфекции: 1. В случае обоих положительных результатов - IgM и IgG -необходимо определение авидности IgG. Низкие значения авидности будут свидетельствовать о первичной недавней инфекции, что создает риск инфицирования плода и развития врожденной патологии. При выявлении высокоавидных антител констатируется давнее инфицирование вирусом, повторное попадании возбудителя в организм или обострение (реактивация) заболевания. 2. Наличие только антител класса IgG свидетельствует лишь о том, что женщина инфицирована. Следовательно, необходимо дифференцировать стадию инфекционного процесса, определив авидность IgG антител. Низкие значения авидности будут означать первичную (недавнюю) инфекцию, что создает риск инфицирования плода и развития врожденной патологии. В этом случае рекомендуется пренатальная диагностика врожденной инфекциb. Пренатальная диагностика включает в себя исследование амниотической жидкости и ПЦР. По величине вирусной нагрузки судят о вероятности внутриутробного инфицирования и развития заболевания плода. Наличие высокоавидных антител свидетельствует, что инфицирование произошло давно, женщина имеет иммунитет к вирусу и риск инфицирования плода минимален. 3. При обнаружении только антител класса IgM возможны 2 варианта: - либо это самое начало инфекции, когда IgG антитела еще не образовались в достаточном титре для их обнаружения - либо инфекции нет, а циркулирующие IgM являются неспецифическими По рекомендациям ВОЗ, при однократном обнаружении лишь положительного результата IgМ диагноз устанавливаться не может, так как специфичность данного теста составляет только 85%. Так, результаты положительного определения IgМ к вирусу краснухи могут быть обусловлены перекрестными реакциями при инфекциях, вызванных другими вирусами, например, вирусом Эпштейна-Барра , парвовирусом В19, вирусом кори, цитомегаловирусом. Также IgМ могут достаточно длительно, около 1-1,5 лет циркулировать после вакцинации. IgМ могут появляться у некоторых пациентов и при вторичной инфекции. Повторное обследование женщины через 2-3 недели поможет определить ход дальнейших действий. Нарастание титров IgM или появление IgG- антител свидетельствует о первичной инфекции, что является наиболее неблагоприятным для развития беременности. Если же IgG не определяются и во втором исследовании, то женщина считается неиммунной и нуждается в периодическом скрининге на ToRCH инфекции 1 раз в 3 месяца. 4. При отсутствии антител обоих классов к ToRCH инфекциям женщина не имеет иммунитета против возбудителей, следовательно, относится к группе риска возникновения первичной инфекции и должна периодически (1 раз в 3 месяца) обследоваться в течение беременности. Качество диагностики позволяет улучшить ^ ПЦР- диагностика в количественной модификации с целью определения ДНК цитомегаловируса и вируса простого герпеса в крови беременной используется как маркер возможного инфицирования плода, причем при концентрациях вируса более 103 коп/мл инфицирование более вероятно, риск инфицирования увеличивается при возрастании вирусной нагрузки. Обнаружение ДНК цитомегаловируса и вируса простого герпеса в крови свидетельствует о манифестной инфекции, при этом антенатальное инфицирование плода наблюдается в 60% случаев. Определение ЦМВ в слюне и моче с целью диагностики возможного инфицирования плода менее информативно, чем в крови. Определение в крови у беременных женщин вируса краснухи имеет ценность в качестве маркера возможного инфицирования плода. При этом, если положительный результат ПЦР подтверждает диагноз, то отрицательный не исключает инфицирование. Если известны сроки возможного инфицирования, более информативно определение вируса краснухи в слюне, где он выявляется в высоких концентрациях за 5 дней до и 6-9 дней после появления высыпаний. Для диагностики токсоплазмоза методом ПЦР- анализа определяется ДНК возбудителя в крови, ликворе, лимфоузлах , биоптатах. Использование материала урогенитальных соскобов нецелесообразно. ^ Взятие крови для исследования иммуноглобулинов производится натощак (исключить прием пищи за 8 часов до исследования) из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в специальную вакуумную систему типа «Vacuett®». ^ Контроль лечения представляет собой комплекс мер по определению эффективности проведенной терапии и исключению возможного повторного инфицирования пациента. Критерии эффективности лечения могут быть клиническими и лабораторными. Субъективные ощущения пациента в ходе и, особенно, в конце лечения важны, но не являются решающими. Исчезновение клинических симптомов не может считаться основным критерием выздоровления, а лишь свидетельствует, что лечение проводится правильно. При этом, сохранение каких-либо симптомов у пациента не означает, что проведенное лечение не эффективно. Такие симптомы могут иметь «следовой» характер или преувеличиваться негативным эмоциональным состоянием пациента. Наиболее важным и единственным свидетельством выздоровления больного является эрадикация возбудителя. Важным является вопрос о сроках выполнения контрольных лабораторных исследований после окончания лечения. Считается, что сразу после окончания лечения контрольные исследования проводить не следует, поскольку возможны ложноположительные результаты. Так, при проведении контрольного ПЦР- исследования фрагменты нуклеиновых кислот нежизнеспособных бактерий могут определяться ещё в течение 1-2 месяцев после проведенного лечения, так как ПЦР выявляет только небольшую часть генома микроорганизма и, следовательно, не является критерием его жизнеспособности. За данный период времени происходит замена десквамирующихся контаминированных возбудителем эпителиоцитов на новые интактные клетки уретрального эпителия. С этой точки зрения оптимальным считается применять в качестве контроля излеченности исследование культуральным методом или реакцией НАСБА. В отличие от ПИФ и ПЦР, которыми микроорганизмы определяются без учета их жизнеспособности, культуральный метод и реакция НАСБА позволяют выявлять жизнеспособного возбудителя. На практике, после истечения соответствующего выжидательного периода рекомендуется обследовать пациента теми же лабораторными методами, которыми были обнаружены маркеры инфекции. Применять диагностические методы, которыми возбудитель не был выявлен до начала лечения, не следует. Также не следует в качестве критерия излеченности применять серологические тесты, так как титр антител остается достаточно высоким в течение длительного времени даже после адекватной терапии. ^ Качество диагностики урогенитальных заболеваний во многом зависит от лечащего врача. Он должен быть профессионалом в области инфекций, передаваемых половым путем. Даже на этапе диагностики перед ним стоят серьезные задачи: - индивидуально выбрать объем обследования; - из множества существующих методов исследования выбрать оптимальный или их комбинацию; - в зависимости от конкретной ситуации выбрать место взятия материала (мочеиспускательный канал, шейка матки, влагалище, глотка, прямая кишка, конъюнктива); - не ошибиться со временем взятия материала (исследование в инкубационном периоде, а также в течение 3-4 недель после приема антибиотиков, может оказаться недостоверным); - правильно взять материал для исследования. Полученные результаты исследований должны интерпретироваться индивидуально. Всегда надо помнить о том, что возможны ложно-положительные и ложно-отрицательные результаты. ^ Важным является разработка алгоритма обследования пациентов с целью совершенствования, как этиологической, так и топической диагностики ИППП, что позволит установить правильный диагноз в кратчайшие сроки, улучшить результаты лечения и, тем самым, избежать развития осложнений и неблагоприятных последствий. Профилактика бесплодия, акушерской и неонатальной заболеваемости может быть достигнута с помощью своевременной диагностики ИППП посредством планового комплексного лабораторного обследования, включающего скрининговое морфологическое исследование урогенитальных мазков, с последующей этиологической верификацией методами молекулярной диагностики и серологии. В мировой практике накоплен огромный опыт, свидетельствующий о необходимости комплексности при клинико-лабораторном обследовании пациентов, так как использование разноплановых методологий (микроскопия, культуральный метод, ПЦР-анализ, серологические исследования), которые дополняют и подтверждают друг друга, повышает достоверность диагноза и нивелирует технические ошибки методов исследования. При установлении диагноза необходимо выбирать оптимальные методы обследования, учитывать порог чувствительности, специфичности и воспроизводимости методов, особенности забора и хранения биопроб, особенности постановки реакции. При выборе метода обследования необходимо учитывать клиническую форму заболевания, характер течения (острое, подострое, хроническое), цель обследования (лабораторное подтверждение диагноза или скрининговое обследование группы риска). Формулировать диагноз необходимо только по совокупности полученных результатов обследования. В представленных алгоритмах для удобства интерпретации и этапности обследования мы разделили методы на скрининговые (отборочные, результаты этих тестов в большинстве случаев требуют подтверждения другими высокочувствительными и высокоспецифичными методами) и подтверждающие. ^ - Микроскопия урогенитальных мазков. Исследование позволяет определить наличие воспалительных изменений (по количеству лейкоцитов), оценить качественное и количественное содержание микрофлоры. При инфицировании нейссерией гонореи специфическим признаком является обнаружение в мазке внутриклеточных (в нейтрофильных лейкоцитах ) Грам (-) бобовидных диплококков, располагающихся взаимно перпендикулярно. Чувствительность и специфичность морфологического метода находится на уровне 30-50%. Проведение микроскопического исследования регламентировано приказами МЗ СССР № 936 от 1984г и №1540 от1985г, совместно с культуральным методом. ^ - ПЦР- исследование – позволяет определить специфический участок ДНК нейссерии гонореи в исследуемом материале, используется для диагностики гонореи при стертых формах инфекции, при хронических процессах. Чувствительность и специфичность метода приближается к 100%. Метод может применяться и при скрининговых исследованиях для групп с высоким риском заражения. При проведении количественного ПЦР анализа в формате «Real- Time», возможно определение бактериальной нагрузки в очаге поражения. - реакция НАСБА - альтернативный амплификационный тест. НАСБА выявляет молекулы рибосомальных РНК бактерий и обладает максимальной чувствительностью и специфичностью. НАСБА в отличие от ПЦР- анализа выявляет присутствие лишь живых возбудителей инфекции. - ^ � позволяет проводить видовую идентификацию возбудителя, выявить наличие жизнеспособных микроорганизмов в исследуемом материале, определить чувствительность гонококка к антибиотикам. Специфичность метода- 100%, но чувствительность, из-за несоблюдения в большинстве случаев оптимальных условий культивирования (среды самостоятельного изготовления, тесты идентификации не соответствуют классике, отсутствуют контрольные штаммы)- составляет только 85%. Диагностическая чувствительность регламентированных в РФ методах микроскопии и культуральной диагностики уступает современным молекулярно- биологическим тестам, в частности ПЦР- анализу. Трихомониаз Скрининговый метод: - ^ . Исследование позволяет определить наличие воспалительных изменений (по количеству лейкоцитов) и оценить качественное и количественное содержание микрофлоры. Морфологическая диагностика основана на обнаружении трихомонад в мазках. В окрашенных препаратах трихомонады представляют из себя округлые, овальные или неправильной формы микроорганизмы с четко выраженными контурами, вытянутым, эксцентрично расположенным ядром и ячеистой цитоплазмой. Чувствительность метода 50-70 %. Проведение микроскопического исследования регламентировано приказами МЗ СССР № 936 от 1984г и №1540 от1985г, совместно с культуральным методом. ^ - ПЦР- исследование -определение специфического участка ДНК трихомонас вагиналис в исследуемом материале, используется как дополнительный тест для диагностики трихомониаза. Может применяться для диагностики трихомониаза при микст- инфекциях, при стертых формах инфекции, при хронических процессах. Чувствительность метода 95-98 %, специфичность приближается к 100%. Метод может применяться при скрининговых исследованиях. - реакция НАСБА - альтернативный амплификационный тест. НАСБА выявляет молекулы рибосомальных РНК трихомонад и обладает максимальной чувствительностью и специфичностью. НАСБА, в отличие от ПЦР- анализа, выявляет присутствие лишь живых возбудителей инфекции. - ^ с видовой идентификацией возбудителя позволяет выявить наличие жизнеспособных микроорганизмов в исследуемом материале, определить чувствительность к антимикробным препаратам. Чувствительность метода 90 %, специфичность приближается к 100%. Хламидиоз Скрининговый метод: - ^ . Исследование позволяет определить наличие воспалительных изменений (по количеству лейкоцитов) и оценить качественное и количественное содержание микрофлоры. Характерным является обнаружение цитоплазматических включений в клетках эпителия при окраске мазка по Гимзе (телец Гельбедштедтера- Провачека). Чувствительность данного метода для обнаружения хламидиоза низкая- 20-40%, поэтому этот метод практически не используется в диагностике. ^ - ПЦР - исследование - определение специфического участка ДНК хламидии трахоматис в исследуемом материале (чувствительность и специфичность метода приближается к 100%, предел обнаружения - 10 микробных тел в пробе). Метод может применяться при скрининговых исследованиях. Материалом для исследования могут быть любые клинические образцы, содержащие клетки, пораженные возбудителем. При использовании метода ПЦР «в реальном времени» возможно проводить не только качественную, но и количественную оценку наличия возбудителя в исследуемой пробе, также метод позволяет анализировать до 6 патогенных микроорганизмов в одной пробирке. Регистрация результатов анализа происходит автоматизировано специальным прибором- флуоресцентным детектором, поэтому метод лишен субъективизма. - реакция НАСБА - определяет молекулы рибосомальных РНК бактерий, обладает максимальной чувствительностью и выявляет присутствие лишь живых возбудителей. НАСБА не уступает по чувствительности и специфичности ПЦР- анализу. При необходимости, можно с помощью данной реакции подтвердить результаты ПЦР- анализа. - ^ –определение антител в динамике с учетом нарастания или снижения титров (исследования парных сывороток с интервалом в 2–3 недели). Ценность этого метода высока при хронических мало- и бессимптомных формах хламидийной инфекции органов малого таза, когда невозможно определение возбудителя прямыми методами исследования. - ПИФ- выявление антигенов хламидий в пораженных клетках (Чувствительность ПИФ составляет 50-80%, предел обнаружения - 105 микробных тел, специфичность 85%). Метод ПИФ обладаем большой долей субъективизма и зависит от квалификации врача. - ^ позволяет проводить выявление жизнеспособных хламидий в исследуемом материале, определение чувствительности к антибиотикам (чувствительность метода 80-90%, специфичность приближается к 100%). Оптимальным считается комплексный подход к диагностике хламидиоза. Для получения достоверного результата необходимо применение 2-х методов исследования, наилучшим является сочетание прямого метода исследования- ПЦР в количественной модификации, и серологического метода - ИФА. Сейчас широко распространены серотипы хламидии трахоматис, которые могут долгое время протекать с минимальными клиническими и иммунологическими проявлениями, приводя к развитию восходящей инфекции с поражением органов малого таза. В связи с этим, прямое выявление возбудителя методом ПЦР является достаточным основанием для назначения антибактериальной терапии, вне зависимости от выраженности клинических проявлений. Микоплазмозы Скрининговые методы: - ^ Исследование позволяет определить наличие воспалительных изменений (по количеству лейкоцитов) и оценить качественное и количественное содержание микрофлоры. - ^ определение различных классов специфических антител. Чувствительность данного метода небольшая из-за слабой иммуногенности данных видов микроорганизмов. Диагностическую ценность данный вид исследования представляет только применяясь совместно с подтверждающими методами. Применение метода ПИФ нецелесообразно из-за низкой информативности и субъективности метода. ^ - ПЦР- анализ. Применяя качественную модификацию ПЦР- анализа можно установить вид микроорганизма, при проведении количественного ПЦР- анализа (Real-time) можно оценить не только наличие микроорганизма в пробе, но и определить микробную нагрузку - количественное содержание ДНК возбудителя в пробе. Клинически значимой концентрацией для условно- патогенных микоплазм считается 103-104 коп/мл. Пороговым уровнем для диагностики M. genitalium считается концентрация 10³ коп/мл, менее этой концентрации бактериальная нагрузка считается низкой, больше - высокой. - Культуральное исследование позволяет выявлять жизнеспособных микроогранизмов в исследуемом материале, проводить определение чувствительности к антибиотикам, но применяется редко из-за сложных условий культивирования данных микроорганизмов. ^ Скрининговый метод: - Микроскопия урогенитальных мазков. Исследование позволяет определить наличие воспалительных изменений (по количеству лейкоцитов) и оценить качественное и количественное содержание микрофлоры. Характерным признаком является выявление «ключевых» клеток - клеток плоского эпителия, покрытых (усыпанных) Грамвариабельной или Грам (-) палочковой или коккобациллярной флорой. Чувствительности метода– 93%, специфичность- 70%. ^ - ПЦР- анализ. Только учет количественных соотношений различных видов микроорганизмов влагалищной микрофлоры может характеризовать состояние вагинального микроценоза и степень его нарушения. Применяя качественную модификацию ПЦР- анализа можно установить виды микроорганизмов, вызывающих бактериальный вагиноз (микрофлора представлена условнопатогенными анаэробными микроорганизмами, такими как гарднереллы, микоплазмы, мобилункус, бактероиды, фузобактерии, пептококки, атопобиум и др) , при проведении количественного ПЦР- анализа (Real-time) можно оценить не только наличие ДНК микроорганизма в пробе, но и оценить микробную нагрузку - количественное содержание ДНК возбудителя в пробе. В норме концентрация гарднереллы вагиналис составляет 103-105коп/мл вагинального отделяемого. При развитии бактериального вагиноза гарднереллы определяются в концентрациях 108-1010 коп/мл. - ^ –применяется чаще в научных целях из-за технической сложности метода, необходимости создания анаэробных условий культивирования. |
отлично
4
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям