|
|
Скачать 0.65 Mb.
|
|
Полученные данные свидетельствуют о том, что данная тест-система может с успехом применяться для выявления урогенитальной хламидийной инфекции в популяциях с разным уровнем превалентности инфекции. Вместе с тем значимость ее положительных результатов выше в популяциях с высоким уровнем превалентности, к которым относятся так называемые «ядерные» группы населения, способствующие распространению инфекции (лица, занимающиеся коммерческим сексом, мужчины, имеющие секс с мужчинами, сексуально активные подростки). ^ Важным условием установления достоверного диагноза урогенитальной хламидийной инфекции является осуществление контроля качества лабораторных исследований и преемственность результатов диагностики, выполненных в разных лабораториях. К сожалению, многие из перечисленных методов (культуральный, метод ПИФ), обладая значительной долей субъективности, не позволяют обеспечить стандартизацию лабораторных исследований в рамках разных лабораторий, а также проводить внешний контроль качества. Это, в свою очередь, затрудняет оценку получаемой информации о заболеваемости урогенитальной хламидийной инфекцией и правомочности установленных диагнозов. Процесс государственного регулирования должен обеспечить гарантии качества и характеристик диагностических тестов. Несмотря на это, меньше половины стран во всем мире имеют регулирующую систему для in vitro диагностики инфекционных заболеваний, и еще меньше - требуют предоставить данные клинических испытаний. Не существует утвержденных международных протоколов для оценки диагностических тестов. Поставщики тест-систем могут говорить о высокой чувствительности и специфичности, при этом не существует требований предоставлять информацию об объеме выборки или доверительных интервалах. (30). Представлялось бы целесообразным ввести международную систему контроля и валидации тестов, основанных на амплификации нуклеиновых кислот – как наиболее востребованных при диагностике урогенитальной хламидийной инфекции. Необходимо помнить, что при каждом выделении ДНК и последующем исследовании образцов необходимо иметь внутренний положительный контроль, позволяющий выявить вещества, ингибирующие амплификацию, контроли качества пробоподготовки и отрицательный контроль. В идеале для внутри- и межлабораторного контроля качества ПЦР диагностики должны использоваться сертифицированные и разрешенные к медицинскому применению контрольные панели, содержащие закодированные образцы. Использование для осуществления контроля качества ПЦР-диагностики панелей образцов является стандартным способом проверки используемых тест-систем. Они являются индикаторами чувствительности, специфичности и воспроизводимости вне зависимости от используемых тест систем. Тест-системы Roche Amplicor, Becton Dickinson BDProbeTec и GenProbe Aptima прошли FDA контроль, но только для некоторых типов биологических образцов. Последующие исследования могут показать, что эти тест-системы пригодны и для других типов образцов, таких как влагалищные образцы, взятые самим пациентом, фарингеальные, ректальные или образцы, полученные из препуциального кармана или с поверхности полового члена. Настоятельно рекомендуется, если это возможно, для диагностики инфекции урогенитального тракта, вызванной C. trachomatis, использовать тест-системы, одобренные FDA . Если такой возможности нет и необходимо использовать тест-систему, не одобренную FDA, то в этой ситуации пригодность предложенного теста для диагностики рекомендуется подтверждать валидацией с использованием ранее валидированных тест-систем. Результаты недавно проведенной валидации МАНК ряда Российских производителей свидетельствуют о положительной перспективе развития производства и применения этих систем в стране (28, 31). Утвержденные ВОЗ, общепринятые в мировом сообществе, обязательные для применения критерии валидации диагностических тестов были опубликованы группой экспертов по диагностике ВОЗ/TDR (33). Американское Общество Микробиологии (ASM) в своем издании Cumitech 31 (34) выпустило протоколы минимальных требований для валидации нового или модифицированного теста. ^
ЗАКЛЮЧЕНИЕ Среди методов, позволяющих выявлять возбудителя урогенитальной хламидийной инфекции, его антигены, либо нуклеиновые кислоты, предпочтение в настоящее время отдается молекулярным методам исследования, обладающим наиболее высокой чувствительностью и специфичностью, дающим возможность исследовать биологический материал, полученный практически из любого очага, и возможность исследования материала, полученного неинвазивным способом (моча, соскобный материал, полученный из влагалища), в том числе и самими пациентами. Каждый из методов имеет свои преимущества и недостатки, которые обусловливают те или иные приоритеты применения метода для лабораторной диагностики урогенитальной хламидийной инфекции. При этом существенным моментом при поведении диагностики урогенитальной хламидийной инфекции, обеспечивающим ее эффективность, является выбор метода исследования, позволяющий выявлять возбудителя заболевания при получении материала из разных анатомических областей (таблицы 7,8). Одним из самых высокоспецифичных методов диагностики до сих пор считался культуральный метод с использованием культур клеток для выделения хламидий. Однако он имеет целый ряд существенных ограничений: строгое соблюдение условий получения материала и его доставки, позволяющих сохранять жизнеспособного возбудителя, значительная трудоемкость и необходимость наличия высококвалифицированного персонала, обеспечивающего корректное проведение исследований и их оценку. Все это препятствует широкому распространению данного метода в лабораториях, осуществляющих рутинную диагностику урогенитальной хламидийной инфекции. В современных условиях метод не рекомендуется для рутинного применения и может быть использован лишь в научно-исследовательских и референс-лабораториях для подтверждения диагноза урогенитальной хламидийной инфекции и в судебно-медицинской экспертизе, в особенности при расследовании случаев сексуального насилия над детьми. Среди иммунологических методов, выявляющих антигены хламидий, ПИФ в России применяется как скрининговый, при клинически выраженных формах урогенитальной хламидийной инфекции и исследовании образцов биологического материала, полученных из уретры, эндоцервикса, глотки, конъюнктивы. При исследовании ограниченного количества проб, наличии высококвалифицированного персонала, качественных оптических приборов (люминесцентного микроскопа), соблюдении режима работы люминесцентной лампы и наличии высококачественных реактивов (противохламидийных ФИТЦ-конъюгированных моноклональных антител) метод отличается быстротой и простотой проведения. Если перечисленные условия не соблюдаются, метод обладает недостаточно высокой чувствительностью и низкой специфичностью, в особенности при малых количествах элементарных телец в клиническом материале. Метод не подходит для исследования образцов, полученных неинвазивным способом. Отмеченные недостатки указывают на нецелесообразность широкого использования данного метода исследования в лабораториях, осуществляющихдиагностику урогенитальной хламидийной инфекции, в особенности при наличии в учреждениях ПЦР - лабораторий, располагающих высокочувствительными, специфичными и валидированными тест-системами. Второй иммунологический метод – ИФА, выявляющий антиген хламидий, также как ПИФ, может быть применен в качестве скринингового при урогенитальной хламидийной инфекции, сопровождающейся клинической симптоматикой. Метод имеет ряд достоинств (возможность автоматизации и одновременной обработки большого количества образцов, относительно невысокая стоимость). Вместе с тем, он имеет и ряд недостатков, существенно ограничивающих его использование для диагностики урогенитальной хламидийной инфекции. При проведении теста возможно получение ложноположительных результатов ввиду перекрестных реакций липополисахаридов хламидий с другими микроорганизмами; специфичность метода уступает специфичности молекулярно-биологических методов; метод может применяться только для материала, полученного инвазивным способом (соскоб цервикального канала шейки матки, уретры). Использование так называемых простых быстрых тестов для экспресс-диагностики хламидийной инфекции позволяет визуально производить учет результатов определения антигенов хламидий через 10-15 минут. Однако самым значимым ограничением их применения является низкая чувствительность, которая на настоящий момент не превышает 50-60%. Эти наборы могут в принципе быть использованы для скрининговых исследований. Однако при наличии соответствующей лабораторной службы и других методов диагностики они не рекомендуются для использования. Методы, не связанные с амплификацией нуклеиновых кислот (методы гибридизации), выявляющие генетический материал С. trachomatis, относительно просты в исполнении, автоматизированы, достаточно быстрые (2 часа), могут быть использованы для исследования большого количества образцов при осуществлении одновременной диагностики урогенитальной хламидийной инфекции и гонококковой инфекции. Однако в связи с относительно низкой чувствительностью они вытесняется методами, основанными на амплификации нуклеиновых кислот. Методы амплификации нуклеиновых кислот (МАНК), из которых самым распространенным является ПЦР, при соблюдении режима работы специализированной лаборатории и использовании тест-систем, прошедших процедуру валидации и сертификации, на настоящий момент могут быть рекомендованы в качестве основных методов диагностики урогенитальной хламидийной инфекции. Вместе с тем, чувствительность и специфичность этих методов при исследовании материала из прямой кишки, глотки и конъюнктивы окончательно не подтверждены. На рынке Российской Федерации присутствует значительное количество тест-систем, основанных как на классической ПЦР, так и на ПЦР в реальном времени, в том числе в мультиплексном формате, однако сравнительные исследования их чувствительности и специфичности представляют большую редкость (Шалепо; Шипицина). В этой связи перед лабораториями стоит задача по валидации используемых тест-систем. К числу недостатков МАНК относятся: высокая стоимость оборудования и реагентов, необходимость тщательного соблюдения режима работы лаборатории во избежание контаминации образцов. Как показывает обзор приведенных методов диагностики урогенитального хламидиоза, в настоящее время наблюдается значительный прогресс в этой области, обусловленный, прежде всего, бурным развитием молекулярных технологий. Таблица 7. ^
Таблица 8. ^
* Дополнительное исследование образцов, полученных из уретры женщин, может увеличить количество положительных проб по сравнению с исследованием только эндоцервикальных образцов. ** Должен использоваться только в референс-лабораториях для выделения и определения чувствительности к антибиотикам *** Первые 5-10 мл свободно выпущенной мочи
а) это необходимо для научно-исследовательских целей; б) это необходимо (редко) для судебно-медицинской экспертизы.
6. ЛИТЕРАТУРА
Domeika M, Hallén A, Karabanov L, Chudomirova K, Gruber F, Unzeitig V, Pöder A, Deak J, Jakobsone I, Lapinskaite G, Dajek Z, Akovbian V, Gomberg M, Khryanin A, Savitcheva A, Takac I, Glazkova L, Vinograd N, Nedeljkovic M. Chlamydia trachomatis infections in eastern Europe: legal aspects, epidemiology, diagnosis, and treatment. Sex Transm Infect. 2002 Apr;78(2):115-9. ^ Laboratory diagnosis of sexually transmitted infections in estonia in 2001-2002: shortcomings with impact on diagnostic quality and surveillance. Sex Transm Dis. 2005 Dec;32(12):759-64. Vagoras A, Butylkina R, Juseviciute V, Hallén A, Unemo M, Domeika M. Diagnosis of non-viral sexually transmitted infections in Lithuania and international recommendations. Euro Surveill. 2006 Jul;11(7):161-4. Domeika M, Litvinenko I, Smirnova T, Gaivaronskaya O, Savicheva A, Sokolovskiy E, Ballard RC, Unemo M. Laboratory diagnostics for non-viral sexually transmitted infections in St. Petersburg, Russia: current situation and hallmarks for improvements. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2008 Apr 9. [Epub ahead of print] Kohl KS, Markowitz LE, Koumans EH. Developments in the screening for Chlamydia trachomatis: a review. Obstet Gynecol Clin North Am. 2003 Dec;30(4):637-58. Review. Ripa T, Nilsson PA. A Chlamydia trachomatis strain with a 377-bp deletion in the cryptic plasmid causing false-negative nucleic acid amplification tests. Sex Transm Dis. 2007 May;34(5):255-6. Unemo M, Olcén P, Agné-Stadling I, Feldt A, Jurstrand M, Herrmann B, Persson K, Nilsson P, Ripa T, Fredlund H. Experiences with the new genetic variant of Chlamydia trachomatis in Orebro county, Sweden - proportion, characteristics and effective diagnostic solution in an emergent situation. Euro Surveill. 2007 Apr 1;12(4):E5-6. The web site www.chlamydiae.com contains extensive reviews of chlamydial infections and their diagnosis, hyperlinked to the original literature. 7. Резюме Настоящий Протокол разработанн в сотрудничестве с диагностической группой по ИППП, Международной сети специалистов (Нетворк) по сексуальному и репродуктивному здоровью и правам. Международная сеть специалистов является проектом, поддерживаемым Шведским агентством международного развития и кооперации. Руководитель проекта Марюс Домейка, Уппсальский университет, Восточно-европейский комитет Шведского общества охраны здоровья. |