Пособие для врачей Иркутск, 2011 удк
|
|
Скачать 498.11 Kb.
|
|
^
Обычно методом электрофореза выделяют 5 - 6 стандартных фракций. В таблицу 2 сведены все данные о белковых фракциях, повышении и понижении уровня компонентов фракций при различных заболеваниях. Из числа указанных патологических состояний наиболее эффективно и экономически выгодно проводить диагностику парапротеинемических состояний.Связано это с тем, что капиллярный электрофорез не только дает сразу полную характеристику белкового спектра, но и проводит процедуру иммунофиксации. Электрофореграммы, характерные для большинства патологических состояний, полученные при использовании метода капиллярного электрофореза будут приведены в Приложении. Таблица 3 Диагностические характеристики белковых фракций
^ Впервые сообщение о методе иммунофиксационного электрофореза (IFE) было опубликовано Альпером и Джонсоном в 1969 году. Сам метод введен в практику клинических лабораторий Ричи и Смитом в 1976 году. Метод IFE основан на электрофоретическом разделении белков, следующим за добавлением специфической антисыворотки. Комплексы антиген-антитело, формирующиеся в результате узнавания иммунореактивных белков остаются в агарозном матриксе (иммунофиксация), а непрореагировавшие белки удаляются буферным раствором, в котором и происходит второй этап электрофореза. Метод вычитания в капиллярном электрофорезе используется для идентификации моноклональных компонентов сыворотки крови человека в целях диагностики моноклональных гаммапатий. IFE - это двухступенчатый процесс, использующий электрофорез протеинов на первом этапе и иммунопреципитацию на втором. В качестве адаптации этой методики для капиллярного электрофореза предложен метод, в котором моноклональные компоненты иммунофиксируются на гранулах сефорозы. Для проведения иммунофиксации, если она была показана в ходе первичного электрофореза сыворотки пациента, на борт анализатора фракций белков “ PARAGON CZE 2000” фирмы “ Beckman Coulter ” устанавливается блок, состоящий из 7-и секций, 6 из которых участвуют в анализе IFE. В 5-и лунках этого сектора содержатся гранулы сефарозы с фиксированными на них моноклональными антителами. Три из этих твердых носителей специфичны к тяжелым цепям (IgG, IgA и IgM), два — к легким цепям (каппа и лямбда). Одна лунка содержит сыворотку без моноклональных антител SPE вариант. Одна лунка пустая (все сектора для SPE анализа рассчитаны на 7 лунок, и сектор для IFE имеет аналогичную конфигурацию)(см. рисунок 7).  Рис.7. Сегменты для IFE в системе клинического капиллярного электрофореза Paragon CZE 2000
Автоматически сыворотка крови вводится в эти лунки для соответствующей экспозиции. После чего не связавшиеся с моноклональными антителами белковые фракции засасываются в капилляры, и проводится электрофорез в 6-и из них (см. рисунок 8).  Рис.8. Схема иммунофиксации метом иммуновычитания Результирующие количественные изменения, наблюдаемые на электрофореграмме (исчезновение определенного пика), позволяют установить моноклональный компонент, связанный антителами. Для качественной визуальной интерпретации электрофореграмм, полученных при иммунофиксации методом вычитания, не требуется никаких вычислений. Моноклональные компоненты могут быть определены визуально при сравнении электрофореграмм, полученных после экспозиции с моноклональными антителами и референсной электрофореграммы (SPE). Пример метода иммуновычитания приведен на рисунке 9. IFE методом вычитания является качественным, визуальным методом, поэтому референсные диапазоны отсутствуют.  Рис. 9. Пример электрофореграммы IFE
|
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям