|
|
Скачать 1.29 Mb.
|
|
Занятие 16 ^ Цель занятия: контроль усвоения вопросов пройденного раздела “Биохимия липидов”. Контрольные вопросы
Занятие 17 Итоговое (зачетное) за семестр
Занятие 18 Переваривание и всасывание белков. Анализ желудочного сока. Цель занятия: сформировать представления о пищевой ценности белков, молекулярных механизмах их переваривания и всасывания в желудочно-кишечном тракте, путях формирования пула свободных аминокислот тканей и жидкостей организма. Освоить методы определения кислотности и патологических компонентов желудочного сока. Исходный уровень знаний и навыков Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
Задачи
а) тре; б) гомоцистеин; в) фолиевая кислота; г) цис; д) креатин; е) холин?
а) лиз; б) фен; в) тир; г) тре; д) про; е) вал?
а) тре; б) сер; в) глу; г) гли; д) мет; е) цис?
а) в животных гликопротеидах содержатся редкие углеводы; б) в них больше содержится сер и гли; в) животные белки больше адсорбируют микроэлементов; г) среднее содержание три и лиз в животных белках выше; д) отличаются более высокой усвояемостью; е) животные белки больше адсорбируют витаминов группы B?
а) тре; б) тир; в) фен; г) ала; д) сер; е) глу; ж) лиз; з) цис; и) вал?
а) энтерокиназа; б) карбоксипептидаза; в) гистидин аммиак-лиаза; г) пепсин; д) химотрипсин; е) трипсин; ж) эластаза ; з) амилаза; к) карбангидраза?
а) этанол; б) пищевые жиры; в) глюкоза; г) белок; д) секретин; е) NaCl?
а) повышенное образование ацетилхолина; б) пониженное образование и ускоренный гидролиз ацетилхолина; в) торможение декарбоксилазных реакций; г) снижение активности ферментов -окисления; д) нарушение транспорта O2; е) усиленная секреция электролитов?
а) фосфорилирование проферментов; б) ограниченный протеолиз; в) гидроксилирование; г) оптимум pH; д) формирование оптимальной среды электролитов; е) активацию кофакторами?
^ Лабораторная работа № 1. Количественное определение общей кислотности, общей, свободной и связанной соляной кислоты в одной пробе желудочного сока ^ Основан на титровании желудочного содержимого раствором 0,1н NaOH в присутствии индикаторов с различными зонами перехода. Кислотность желудочного сока выражают количеством миллимоль едкого натра, нейтрализующего 1 л желудочного сока. ^ “общая кислотность” желудочного сока – это сумма всех кислот желудочного содержимого; “свободная соляная кислота” – свободная минеральная HCl; “связанная соляная кислота” – кислореагирующие соли (хлориды) белков и других слабых оснований; “общая соляная кислота” – сумма свободной и связанной HCl. ^ Свободная соляная кислота оттитровывается раствором 0,1н NaOH в присутствии индикатора диметиламиноазобензола, имеющего зону перехода окраски от красной до оранжевой при pH 3,0. Слабые же кислоты (молочная, уксусная кислота, кислые фосфаты и связанная соляная кислота) при pH 2,9–4,0 находятся в растворе в недиссоциированном состоянии и в реакцию со щелочью не вступают. ^ К 10 мл желудочного сока добавить 1–2 капли спиртового раствора диметиламиноазобензола и титровать раствором 0,1н NaOH до появления оранжевой окраски. Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока. Так как затраченное на титрование количество едкого натра эквивалентно количеству соляной кислоты в пробе желудочного сока, то количество соляной кислоты в 1 л желудочного сока (в моль/л) составит a 0,1 1000 X = (1) b
^ Титрование общей кислотности желудочного сока проводится раствором 0,1н NaOH в присутствии индикатора фенолфталеина с зоной перехода окраски в пределах pH 8,2–10,0. При pH ниже 8,2 он бесцветный, а при pH выше 10,0 – красный. ^ К 10 мл профильтрованного желудочного сока добавить 1–2 капли раствора фенолфталеина и титровать 0,1н раствора NaOH до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока. ^ Ход работы. Отмерить в колбочки по 10 мл желудочного сока и добавить по 1-2 капли диметиламиноазобензола и фенолфталеина. Титровать 0,1н раствором NaOH до появления оранжевого окрашивания (первая отметка количества израсходованного 0,1н раствора NaOH). Затем продолжить титрования до лимонно-желтого цвета (вторая отметка) и, наконец, до розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин (третья отметка). ^ Первая отметка соответствует количеству свободной соляной кислоты, третья – общей кислотности. Вторая отметка используется для расчета количества общей соляной кислоты. Среднее арифметическое между вторым и третьим пунктом соответствует общей соляной кислоте. Количество связанной соляной кислоты вычисляется как разница между общей и свободной соляной кислотой. Например, при титровании 0,1н раствором едкого натра затрачено титрованного раствора (с начала титрования): до первой отметки (оранжевый цвет) – 3,3 мл, до второй (лимонно-желтый цвет) – 4,6, до третьей (розовый цвет) – 5,6 мл. Среднее между второй и третьей отметкой – (4,6 + 5,6)/2 = 5,1 мл. Произвести расчет содержания свободной соляной кислоты, общей соляной кислоты, общей кислотности на 1000 мл желудочного сока по формуле (1). Этот способ расчета неприменим при наличии молочной кислоты в желудке. Поэтому в пробах желудочного сока, содержащего молочную кислоту, ограничиться вычислением свободной соляной кислоты и общей кислотности. Норма. Показатели кислотности профильтрованного желудочного содержимого взрослого человека после стандартного пробного завтрака составляют:
Полученные данные вносятся в таблицу:
^ При различных заболеваниях желудка кислотность может быть повышенной, пониженной и нулевой. При язвенной болезни желудка или гиперацидном гастрите наблюдается гиперхлоргидрия – увеличение содержания свободной соляной кислоты и общей кислотности. При гипоацидном гастрите или раке желудка отмечается гипохлоргидрия – уменьшение количества свободной соляной кислоты и общей кислотности. При раке желудка, хроническом атрофическом гастрите отмечается полное отсутствие соляной кислоты и значительное снижение общей кислотности – ахлоргидрия. При злокачественном малокровии, раке желудка наблюдается полное отсутствие соляной кислоты и пепсина – ахилия. Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку. Лабораторная работа № 2.^ � а) Обнаружение молочной кислоты по реакции Уффельмана. Принцип метода. При взаимодействии фенолята железа, имеющего фиолетовый цвет, с лактатом образуется лактат железа желто-зеленого цвета. ^ К 20 каплям раствора фенола добавить 1-2 капли раствора хлорного железа. Получается раствор фенолята железа фиолетового цвета. В пробирку с фенолятом железа прилить по каплям желудочный сок (нормальный и сок, содержащий молочную кислоту). В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска переходит в желто-зеленую вследствие образования лактата железа. При одновременном присутствии соляной кислоты жидкость обесцвечивается. Это объясняется тем, что сильная соляная кислота полностью разрушает комплекс железа с фенолом, а также вытесняет более слабую молочную кислоту из ее соли; вследствие этого реакция на присутствие молочной кислоты отрицательная. ^ Органические кислоты (молочная, уксусная, масляная и др.) имеют обычно микробное происхождение и появляются в желудочном содержимом в результате ахлоргидрии и последующего сбраживания компонентов пищи. Наличие органических кислот в желудочном содержимом натощак часто встречается при атрофических гастритах и раке желудка. Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку. б) Бензидиновая проба на кровь. Принцип метода. Гемоглобин обладает каталазной активностью и разлагает пероксид водорода с образованием молекулярного кислорода, который окисляет бензидин или другой краситель. При этом происходит изменение окраски с бесцветной на темно-синюю. ^ В пробирку с 1 мл желудочного сока добавляют 4-5 капель 0,2 %-го спиртового раствора бензидина и 5 капель 1 %-го раствора пероксида водорода. При наличии в желудочном соке крови в результате окисления бензидина развивается синее окрашивание. Полученные данные вносятся в таблицу:
Примечание – Если результаты какой-либо работы являются отрицательными, то в соответствующей графе ставится прочерк. ^ Кровь появляется в желудочном содержимом при изъязвлении стенок желудка при язвенной болезни, эрозивном, язвенном гастрите, ожогах слизистой желудка и раке желудка. Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку. Рекомендуемая литература Основная
Дополнительная
Занятие 19 Тканевый обмен аминокислот. Обезвреживание продуктов обмена ^ сформировать представления об основных путях метаболизма свободных аминокислот в тканях. Изучить механизмы и значение реакций детоксикации аммиака в норме и при патологии. Освоить методику определения концентрации мочевины в сыворотке крови и моче. Исходный уровень знаний и навыков Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
а) гидроксилирование (про, лиз, фен). Механизм микросомального окисления (роль аскорбата, NADPH, цитохрома P450 и др.), примеры, биологическое значение; б) разрыв (механизм, биологическое значение); в) метилирование и др.
а) декарбоксилирование (на примере гис, тир, трп, глу) – механизм, ферменты, биологическая роль; б) восстановление – ферменты, биологическая роль.
а) виды дезаминирования (окислительное, восстановительное, гидролитическое, внутримолекулярное), их медико-биологическое значение; б) прямое окислительное дезаминирование – механизм, ферменты, коферменты, биологическое значение; в) реакции переаминирования – ферменты, коферменты, биологическое значение; г) непрямое окислительное дезаминирование – механизм, ферменты, коферменты, биологическое значение.
а) восстановительное аминирование; б) образование амидов (глн и асн); в) аммониогенез; в) биосинтез мочевины, реакции, ферменты, локализация, биологическая роль цикла синтеза мочевины (ЦСМ). Энергетическая емкость ЦСМ. Связь ЦСМ с ЦТК и обменом аминокислот. Роль ЦСМ в регуляции КОС.
Задачи 1 В какие из соединений превращаются при окислении сер, ала и цистеин: а) -кетоглутарат; б) пируват; в) фумарат; г) сукцинат; д) цитрат; е) ни в одно из указанных? 2 Биосинтез мочевины наиболее активен в: а) почке; б) скелетной мышце; в) печени; г) тонком кишечнике; д) мозге; е) миокарде? 3 Аммоний в моче образуется: а) под действием глутаминазы на глутамин; б) при окислении аминокислот L-аминооксидазо; в) при окислении аминов аминооксидазо; г) дезаминированием аспартата аспартатаммиаклиазо; д) под действием аспарагиназы на аспараги; е) из карбамоилфосфата в условиях ацидоза? 4 Коэнзимы, участвующие в реакциях трансаминирования, образуются из витаминов: а) PP; б) B6; в) B2; г) B1; д) B12; е) U? 5 Какие аминокислоты являются одновременно кето- и глюкогенными: а) лей; б) вал; в) арг; г) гис; д) лиз; е) ала? 6 Через какие интермедиаты арг, гис, про вступают в ЦТК? а) цитрат; б) сукцинат; в) фумарат; г) пируват; д) оксалоацетат; е) кетоглутарат? 7 Какие ферменты участвуют в ЦСМ: а) глутаминаза; б) уреаза; в) аргининсукцинатлиаза; г) ацетилорнитиназа; д) аргиназа; е) аспартатаммиаклиаза? 8 Прямым донором азота мочевины являются: а) орнитин; б) мет; в) асп; г) глу; д) креатинин; е) глн? 9 Биосинтез глюкозы из асп включает реакции: а) дефосфорилирования; б) гидролиза; в) гидроксилирования; г) дезаминирования; д) трансаминирования; е) оксидо-редукции; ж) изомеризации; з) карбоксилирования? 10 Какие из соединений могут образоваться из ала при трансаминировании: а) -кетоглутарат; б) глу; в) асп; г) ацетил-КоА; д) пируват; е) глн? 11 Глутаминазная активность почек при ацидозе: а) возрастает; б) снижается; в) не изменяется? 12 Объясните механизм участия ЦСМ в реакциях КОС при ацидозе: а) активируется для удаления аммиака; б) активируется для удаления кислот; в) тормозится для сохранения HCO3-; г) уменьшает потерю воды; д) обеспечивает регенерацию асп; е) все вместе. 13 Кетогенные аминокислоты: а) дают положительную реакцию на кето-группу; б) участвуют в реакциях кетогенеза; в) снижают содержание кетоновых тел в крови; г) увеличивают содержание кетоновых тел в крови; д) активируют цикл Кребса; е) активируют протеолиз; ж) превращаются в кетокислоты; з) ингибируют протеолиз; и) являются заменимыми; к) являются незаменимыми? 14 Глутамат, доставляемый кровью в ткань мозга, превращается там в глутамин, который можно обнаружить в оттекающей от мозга крови. Каков смысл этого метаболического превращения? 15 Объясните антигипоксический, защитный эффект глутамата, назначаемого при истощении, утомлении, интоксикации и др. экстремальных ситуациях. 16 Альбумин сыворотки крови здорового человека составляет 56 % от уровня общего белка, величина последнего – 74,2 г/л. Определите величину белкового коэффициента и объясните его клинико-диагностическое значение. Лабораторная работа.^ � Принцип метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа комплекс красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию мочевины. ^ Обращаться с осторожностью, т. к. реактив 2 содержит ядовитое вещество тиосемикарбазид, а в рабочем растворе содержится серная кислота. ^ . Осуществляется в соответствии с таблицей 1. Таблица 1
Эталонную пробу обрабатывают точно так же, используя вместо 0,01 мл сыворотки крови 0,01 мл эталонного раствора мочевины (реактива 1). Содержимое пробирок тщательно перемешивают, пробирки закрывают алюминиевой фольгой и помещают точно (!) на 10 мин в кипящую баню. Затем пробирки быстро охлаждают в токе холодной воды и не позднее (!) 15 мин после охлаждения, измеряют оптическую плотность пробы (A1) и эталона (A2) против контрольного раствора (реактив 2) в кювете 10 мм при длине волны 490–540 нм (зеленый светофильтр). Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1 : 100, а результат умножается на коэффициент разведения. ^ 2,5–8,3 ммоль/л. Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку. Предупреждение. При содержании мочевины в пробе свыше 23 ммоль/л пробу следует развести дистиллированной водой, анализ провести повторно, а полученный результат умножить на коэффициент разведения. При определении мочевины в гемолитических или липемических сыворотках пробу необходимо депротеинировать 5 %-ным раствором ТХУ. Для этого в пробирке смешивают 0,1 мл пробы с 1 мл раствора ТХУ и центрифугируют. Точно так же разбавляют и эталонный раствор мочевины. Для собственно анализа отмеривают 0,1 мл надосадочной жидкости. Далее определение проводят как при анализе без депротеинирования. Таким же способом можно анализировать цельную кровь. ^ На долю мочевины приходится половина остаточного азота крови, именно та часть, которая в наибольшей степени задерживается в крови при нарушении функции почек. При патологии почек уровень мочевины в крови нарастает гораздо быстрее, чем остальных компонентов остаточного азота. К тому же определение уровня мочевины в крови технически проще осуществимо, чем остаточного азота. В связи с этим уровень ее в крови, прежде всего, характеризует экскреторную функцию почек. Повышение содержания мочевины в крови отмечается у больных с другими патологическими состояниями – рефлекторной анурией, обструкцией (камни и злокачественные новообразования) в мочевыводящих путях, усиленным распадом белка (острая желтая атрофия печени, тяжелые инфекционные заболевания, обширные травмы и др.). Верхняя граница содержания мочевины в сыворотке крови зависит от характера питания. При приеме белков в сутки свыше 2,5 г/кг веса уровень мочевины может возрастать до 10 ммоль/л. Снижение уровня мочевины в крови наблюдается редко и отмечается обычно при дефиците белка в рационе. При беременности также возможно снижение концентрации мочевины в крови ниже 3,33 ммоль/л. Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||