|
Скачать 0.77 Mb.
|
Иммуноферментный анализ крови при заболеваниях ЖКТ Основные компоненты ИФА Преимущества ИФА Условия для проведения ИФА Приготовление сыворотки. Условия транспортировки. |
^
Большое значение в практике дифференциальной диагностики заболеваний ПС имеют в настоящее время иммунологические методы исследования, в частности, иммуноферментный анализ (ИФА) сыворотки и других биологических жидкостей организма. Его можно отнести по типу исследования и сбору биологического материала к биохимическому анализу. В отличие от ИФА сыворотки крови, ИФА кала будет требовать определенной процедуры сбора биологического материала, рекомендованной в инструкции к тест-системе. ^ аналит – определяемое вещество (антиген или антитело); лиганд – вещество, избирательно связывающееся с аналитом (антиген или антитело); метка – легкоопределяемое соединение, добавляемое в аналитическую систему для измерения количества аналита. ^ высокая чувствительность, позволяющая определять концентрации до 0,05 нг/мл, минимальные объемы исследуемого материала, стабильность при хранении всех ингредиентов, простота проведения реакции, наличие как инструментального, так и визуального учета, возможность автоматизации всех этапов реакции, относительно низкая стоимостью диагностических наборов. Рентабельность выполнения исследований методом ИФА должна рассматриваться как организационный момент, который не имеет отношения к эффективности и специфичности метода, о котором идет речь. При выборе фирмы-поставщика цена не должна быть приоритетом. Желательно наличие в комплектации тест-систем 1-3 уровнями контроля качества, совместимость с международными контрольными материалами, стабильность реагентов после открытия набора. Естественно, необходимо уделять особое внимание срокам годности наборов. ^
^
^
Иммуноблоттинг (иммуноблот) – высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод, подтверждающий диагноз для пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов, полученных в т.ч. при помощи РПГА или ИФА. Этот метод выявления антител к отдельным антигенам возбудителя основан на постановке ИФА на нитроцеллюлозных мембранах, на которые в виде отдельных полос нанесены специфические белки, разделенные гель-электрофорезом. Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности получаемых результатов. Исследование гормонов, характеризующих функцию инкреторного аппарата ЖКТ и поджелудочной железы (ПЖЖ), играет важную роль в диагностике гастроэнтеропанкреатических эндокринных опухолей (ГЭПЭО). Основными ГЭПЭО являются инсулинома, гастринома (синдром Золлингера-Эллисона), глюкагонома, ВИПома (синдром Вернера-Моррисона), опухоли, обуславливающие развитие карциноидного синдрома и гормон-неактивные эндокринные опухоли (опухоли, происходящие из эндокринных клеток, но лишенных возможности секретировать тот или иной гормон). Атрофический гастрит антрального отдела желудка, например, увеличивает риск развития рака, по сравнению с нормальной слизистой желудка, в 90 раз при снижении синтеза гастрина-17. Это в свою очередь снижает выработку внутреннего фактора и усвоение витамина В12. Оценку гастрина-17 рекомендуется проводить при получении положительного результата на наличие инфекции Helicobacter pylori (НР). НР считается причиной хронического гастрита, нелекарственного язвенного дуоденита и этиологическим стимулом MALT- лимфомы и карценомы желудка. Желательно проведение анализа на НР методом ИФА, в котором в качестве субстрата для выработки антител тест-системы были использованы только патогенные штаммы НР. В случае использования для диагностики НР в качестве субстрата лизата всех штаммов НР есть риск получения ложноположительного ответа о патологическом состоянии слизистой желудка, вызванном инфицированием НР. Иммуноблот к НР является очень перспективным серологическим методом диагностики и позволяет профильно выявлять антитела к высокоиммуногенным и высокоспецифичным штаммам. Для диагностики НР может быть использован и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР на ДНК HP – является прямым методом как для диагностики, так и для оценки эффективности эрадикации через 2 недели по окончании курса лечения. Материал для исследования – биоптат слизистой желудка. В таблице 3 представлены гормоны ЖКТ, клетки, их продуцирующие, основное место действия и характер их действия. Эти гормоны определяются в современной лабораторной диагностике методом ИФА. Таблица 3 Гормоны желудочно-кишечного тракта
Имеющиеся в арсенале лабораторной диагностики тест-системы для определения содержания гормонов при диагностике секреторной деятельности ЖКТ методом ИФА в сыворотке крови можно найти на сайте www.biochemmack.ru (названия гормонов указаны в таблице 3). |