2 Предмет и задачи токсикологии
|
|
Скачать 1.6 Mb.
|
^
2.2.1. Экспериментальные параметры токсикометрииИзучение любых вредных веществ предусматривает установление количественных показателей токсичности и опасности его, т. е. параметров токсикометрии. ТОКСИКОМЕТРИЯ – совокупность методов и приемов исследований для количественной оценки токсичности и опасности ядов. ОПАСНОСТЬ ВЕЩЕСТВА – это вероятность возникновения неблагоприятных для здоровья эффектов в реальных условиях производства или применения химических соединений. ТОКСИЧНОСТЬ – способность некоторых химических соединений и веществ биологической природы оказывать вредное действие на организм человека, животных и растений. Токсикометрия токсичных соединений включает большой объем исследований, обязательными из которых являются установление смертельных исходов, выявление и количественная характеристика кумулятивных свойств, изучение кожно-раздражающего, резорбтивного, сенсибилизирующего действия, хронического воздействия на организм с учетом отдаленных эффектов. Параметры (критерии) токсикометрии, которые определяются непосредственно в эксперименте, называются экспериментальными, или первичными. В качестве экспериментальных параметров используются следующие. CL50 – концентрация средняя смертельная – вызывает гибель 50 % подопытных животных (мыши, крысы) при ингаляционном воздействии в течение соответственно 2 и 4 ч и последующем 14-дневном сроке наблюдения (мг/м3, мг/л). DL50 – доза средняя смертельная – вызывает гибель 50 % подопытных животных при однократном введении в желудок, брюшную полость с последующим 14-дневным сроком наблюдения (мг/кг). DL0 (CL0) – доза (концентрация) максимально переносимая – наибольшее количество вредного вещества, введение которого в организм не вызывает гибели животных. DL100 (CL100) – доза (концентрация) абсолютно смертельная – наименьшее количество вредного вещества, вызывающее гибель 100 % подопытных животных. Limac int – порог острого интегрального действия – минимальная доза (концентрация), вызывающая изменения биологических показателей на уровне целостного организма, которые выходят за пределы приспособительных физиологических реакций. Lim ac sp – порог острого избирательного (специфического) действия – минимальная доза (концентрация), вызывающая изменения биологических функций отдельных органов и систем организма, которые выходят за пределы приспособительных физиологических реакций. Limch int – порог общетоксического хронического действия – минимальная доза (концентрация) вещества, при воздействии которой в течение 4 ч по пять раз в неделю на протяжении не менее 4 месяцев возникают изменения, выходящие за пределы физиологических приспособительных реакций, или скрытая (временно компенсированная) патология. Lim ch sp – порог отдаленных эффектов – минимальная доза (концентрация) вещества, вызывающая изменения биологических функций отдельных органов и систем организма, которые выходят за пределы приспособительных физиологических реакций в условиях хронического воздействия. Порог хронического действия служит наиболее важным параметром токсикометрии, позволяющим обосновать гигиенический регламент. Наиболее статистически значимы в характеристике токсичности ядов по смертельному эффекту CL50 и DL50. Степень токсичности – величина, обратная средней смертельной дозе (концентрации). Одним из ведущих факторов, обусловливающих развитие хронического отравления, является процесс кумуляции. Количественная оценка кумулятивных свойств вредных веществ в промышленной токсикологии осуществляется по величине коэффициента кумуляции. ^ – отношение суммарной дозы яда, вызывающей смертельный эффект у 50 % подопытных животных при многократном дробном введении, к величине дозы, вызывающей тот же эффект при однократном введении: Сcum = DL50 (n) / DL50, где DL50 (n) – суммарная средняя смертельная доза при n-кратном воздействии. Этот коэффициент – величина, обратная интенсивности кумуляции. Величина коэффициента кумуляции менее 1 свидетельствует о способности вещества к сверхкумуляции; от 1 до 3 – о выраженной, от 3 до 5 – о средней, более 5 – о слабой способности к кумуляции. ^ Полученные в острых опытах параметры токсичности (CL50, Limac int, Limac sp) позволяют рассчитывать зоны острого, хронического, специфического действия, которые дают возможность оценить опасность вещества. Опасность оценивается двумя группами количественных показателей: – критерии потенциальной опасности; – критерии реальной опасности. К потенциальным показателям относится коэффициент возможности ингаляционного отравления КВИО = С20 / CL50, где С20 – насыщенная концентрация вредных веществ в воздухе (летучесть) при температуре 20 0С, мг/м3. Чем выше насыщенная концентрация вещества при комнатной температуре и ниже средняя смертельная концентрация (значение КВИО больше), тем вероятнее возможность развития острого отравления. Это одна из основных закономерностей токсикометрии. Анализ оценки опасности различных промышленных ядов по величине КВИО показывает, что в ряде случаев малотоксичное, но высоколетучее вещество в условиях производства может оказаться более опасным в плане развития острого отравления, чем высокотоксичное, но малолетучее соединение. О реальной опасности развития острого отравления можно судить по величине зоны острого действия. ^ ac) – это отношение средней смертельной концентрации (дозы) к пороговой концентрации (дозе) при однократном воздействии Zac = CL50 / Limac. Она является интегральным показателем компенсаторных свойств организма, его способности к обезвреживанию и выведению из организма ядов и компенсации поврежденных функций. Чем меньше Zac, тем больше опасность развития острого отравления. Показателями реальной опасности развития хронической интоксикации являются значения зон хронического и биологического действия. ^ ch) – отношение пороговой концентрации (дозы) при однократном воздействии к пороговой концентрации (дозе) при хроническом воздействии Zch = Limaс / Lim ch. Величина Zch используется для характеристики опасности яда при хроническом воздействии. ^ ch. Зона хронического действия является показателем компенсаторных свойств организма на низкомолекулярном уровне. ^ biol) – отношение средней смертельной концентрации (дозы) к пороговой концентрации (дозе) при хроническом воздействии Zbiol = CL50/ Lim ch. ^ После определения параметров токсикометрии проводят обоснование коэффициента запаса. Величина его зависит от особенностей действия яда, адекватности и чувствительности показателей при определении Limch и пр. В обычных условиях коэффициент принимается в интервалах от 3 до 20. Величина коэффициента запаса возрастает при следующих обстоятельствах: – увеличении абсолютной токсичности; – увеличении КВИО; – уменьшении зоны острого действия; – увеличении кумулятивных свойств; – существенных (более 3 раз) различиях в видовой чувствительности; – выраженном кожно-резорбтивном действии. Межвидовые различия в чувствительности подопытных животных (не менее 4-х видов грызунов – мышей, морских свинок, крыс, кроликов) оцениваются по отношению DL50 для наиболее устойчивого вида животных к DL50 для наиболее чувствительного при одном и том же пути введения в организм. Наконец, имея коэффициент запаса, рассчитывают предельно допустимую концентрацию (ПДК) вредного вещества ПДК = Lim ch / k, где k – коэффициент запаса. С  оотношение между основными (первичными) и производными (вторичными) параметрами токсикометрии представлено на схеме, показанной на рис. 32. Рис. 32. Соотношение между основными и производными параметрами ^ Параметры токсикометрии лежат в основе классификации вредных веществ по степени опасности. Как указывалось выше, промышленные яды в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 подразделяются на четыре класса. Принадлежность химических веществ к соответствующему классу опасности определяется величинами семи показателей (табл. 8). ^ Классификация не распространяется на пестициды. Классификация пестицидов по степени опасности предложена Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в 1979 году. Она основана на принципе определения DL50 для крыс при оральном и кожно-резорбтивном воздействии химических веществ в твердом и жидком состоянии (табл. 9). Критерии токсичности используются для гигиенической классификации пестицидов и по другим признакам. ^ выделяют: – сильнодействующие ядовитые вещества (DL50ж < 50 мг/кг); – высокотоксичные (DL50ж от 50 до 200 мг/кг); – средней токсичности (DL50ж от 200 до 1000 мг/кг); – малотоксичные (DL50ж > 1000 мг/кг). Таблица 8 Классификация производственных вредных веществ по степени опасности
^ , определяемого по величине отношения DL50 при накожном нанесении к величине DL50 при введении внутрь, все пестициды подразделяют на три группы: – резковыраженная (DL50ж < 50 мг/кг, кожно-оральный коэффициент меньше 3); – выраженная (DL50ж от 50 до 2000 мг/кг, кожно-оральный коэффициент от 3 до 10); – слабовыраженная (DL50ж > 2000 мг/кг, кожно-оральный коэффициент больше 10). ^ в зависимости от коэффициента кумуляции Сcum пестициды делятся на четыре группы: – сверхкумуляция (Сcum < 1); – выраженная (Сcum = 1…3); – умеренная (Сcum = 3…5); – слабовыраженная (Сcum > 5). Таблица 9 Классификация пестицидов по степени опасности, предложенная ВОЗ
По степени летучести при хроническом воздействии на лабораторных животных пестициды подразделяются на три группы: – резковыраженная (насыщенная концентрация больше или равна токсической); – выраженная (насыщенная концентрация больше пороговой); – маловыраженная (насыщенная концентрация оказывает околопороговое действие). ^ Принципы гигиенического нормирования Санитарно-гигиеническое нормирование – это деятельность по установлению нормативов предельно допустимых воздействий человека на природу. Под воздействием понимается антропогенная деятельность, связанная с реализацией экономических, культурных и других интересов человека, вносящая изменения в природную среду. Предельно допустимый уровень (ПДУ) или предельно допустимая концентрация (ПДК) – это максимальное значение фактора, которое, воздействуя на человека (изолированно или в сочетании с другими факторами), не вызывает у него и его потомства биологических изменений, даже скрытых и временно компенсированных, в том числе изменений реактивности, адаптационно-компенсаторных возможностей, иммунологических реакций, нарушений физиологических циклов, а также психологических нарушений (снижения интеллектуальных и эмоциональных способностей, умственной работоспособности). ПДК и ПДУ устанавливают для производственной и окружающей среды. При их принятии руководствуются следующими принципами: – приоритет медицинских и биологических показаний к установлению санитарных регламентов перед прочими подходами (технической достижимостью, экономическими требованиями); – пороговость действия неблагоприятных факторов (в том числе химических соединений с мутагенным или канцерогенным эффектом действия, ионизирующего излучения); – опережение разработки и внедрения профилактических мероприятий по сравнению с появлением опасного и вредного фактора. Нормирование содержания вредных веществ Для ограничения воздействия вредных веществ применяют гигиеническое нормирование их содержания в различных средах. При установлении ПДК в воздухе рабочей зоны или в воздушном бассейне населенных пунктов ориентируются на токсикологический показатель или рефлекторную реакцию организма. В связи с тем, что требование полного отсутствия промышленных ядов в зоне дыхания работающих часто невыполнимо, особую значимость приобретает гигиеническая регламентация содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны (ГОСТ 12.1.005.- 88, СН 2.2.4/2.1.8.548 - 96). Такая регламентация осуществляется в три этапа: 1) обоснование ориентировочно безопасного уровня воздействия (ОБУВ); 2) обоснование ПДК; 3) корректировка ПДК с учетом условий труда работающих и состояния их здоровья. Ориентировочно безопасный уровень воздействия устанавливается временно, на период, предшествующий проектированию производства. Значение ОБУВ определяется путем расчета по физико-химическим свойствам или путем интерполяций и экстраполяций в гомологических рядах соединений либо по показателям острой токсичности. ОБУВ должны пересматриваться через два года после их утверждения. ОБУВ не устанавливаются: – для веществ, опасных в плане развития отдаленных и необратимых эффектов; – для веществ, подлежащих широкому внедрению в практику. Для санитарной оценки воздушной среды используются следующие показатели: ПДКР.З – предельно допустимая концентрация вредного вещества в воздухе рабочей зоны, мг/м3. Эта концентрация не должна вызывать у работающих при ежедневном вдыхании в пределах 8 ч в течение всего рабочего стажа заболеваний или отклонений в состоянии здоровья, обнаруживаемых современными методами исследований непосредственно в процессе работы или в отдаленные сроки. Рабочей зоной считается пространство, высотой до 2 м над уровнем пола или площадки, на которой находятся места постоянного или временного пребывания рабочих. До недавнего времени ПДК химических веществ оценивали как максимально разовые. Превышение их даже в течение короткого времени запрещалось. В последнее время для веществ, обладающих кумулятивными свойствами, введена вторая величина – среднесменная концентрация. Это средняя концентрация, полученная путем непрерывного или прерывистого отбора проб воздуха при суммарном времени не менее 75 % продолжительности рабочей смены, или средневзвешенная концентрация в течение смены в зоне дыхания работающих на местах постоянного или временного их пребывания. Для веществ, обладающих кожно-резорбтивным действием, обосновывается предельно допустимый уровень загрязнения кожи (мг/см2) в соответствии с ГН 2.2.5.563-96. Содержание вредных веществ в атмосферном воздухе населенных пунктов также регламентируется ПДК, при этом нормируется среднесуточная и максимально разовая величина. Предельно допустимые концентрации вредных веществ в воздухе населенных мест – это максимальные концентрации, отнесенные к определенному периоду осреднения (30 мин, 24 ч, 1 месяц, 1 год) и не оказывающие при регламентированной вероятности их проявления ни прямого, ни косвенного вредного воздействия на организм человека, включая отдаленные последствия для настоящего и последующих поколений, не снижающие работоспособности человека и не ухудшающие его самочувствия. ПДК для атмосферного воздуха ниже, чем для рабочей зоны. Это объясняется тем, что на предприятии в течение рабочего дня работают практически здоровые люди, а в населенных пунктах круглосуточно находятся не только взрослые, но и дети, пожилые и больные люди, беременные и кормящие женщины. ^ МР – наиболее высокая из числа 30-минутных концентраций, зарегистрированных в данной точке за определенный период времени. В основу установления ПДКМР положен принцип предотвращения рефлекторных реакций у человека. ^ СС – средняя из числа концентраций, выявленных в течение суток или отбираемая непрерывно в течение 24 ч. В основу определения среднесуточной концентрации положен принцип предотвращения общетоксического действия на организм. Если порог токсического действия для вещества оказывается менее чувствительным, то решающим в обосновании ПДК является порог рефлекторного действия как наиболее чувствительный. В подобных случаях ПДКМР > ПДКСС. Если же порог рефлекторного действия менее чувствителен, чем порог токсического действия, то принимают ПДКМР = ПДКСС. Для веществ, у которых порог рефлекторного действия отсутствует, устанавливается только ПДКСС. ^ рек, озер и водохранилищ проводят в соответствии с «Санитарными правилами и нормами охраны поверхностных вод от загрязнения» № 4630–88. При этом рассматриваются водоемы двух категорий: I – хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения, II – рыбохозяйственного назначения. При нормировании качества воды ПДК устанавливается по лимитирующему признаку вредности ЛПВ. ЛПВ – признак вредного действия вещества, который характеризуется наименьшей пороговой концентрацией. ЛПВ для водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения используют трех видов: санитарно-токсикологический, общесанитарный и органолептический; для водоемов рыбохозяйственного назначения используют еще два вида ЛПВ: токсикологический и рыбохозяйственный. Санитарное состояние водоема отвечает требованиям норм при выполнении следующего соотношения: ∑ Сim / ПДКi ≤ 1, где Сim – концентрация вещества i-го ЛПВ в расчетном створе водоема; ПДКi – предельно допустимая концентрация i-го вещества. Для водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения проверяют выполнение трех, а для водоемов рыбохозяйственного назначения – пяти неравенств. При этом каждое вещество можно учитывать только в одном неравенстве. Гигиенические требования к качеству питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения указаны в санитарных правилах и нормах СанПиН 2.1.4.559–96 и СанПиН 2.1.4.544–96. Нормирование химического загрязнения почв осуществляется по предельно допустимым концентрациям (ПДКП). ПДКП – концетрация вещества (мг/кг) в пахотном слое почвы, которая не должна вызывать прямого или косвенного отрицательного влияния на соприкасающиеся с почвой среды и здоровье человека, а также на самоочищающую способность почвы. По своей величине ПДКП значительно отличается от принятых допустимых концентраций для воды и воздуха. Это отличие объясняется тем, что поступление вредных веществ в организм человека непосредственно из почвы происходит в исключительных случаях в незначительных количествах, в основном через контактирующие с почвой среды (воздух, воду, растения). Различают четыре разновидности ПДКП в зависимости от пути миграции химических веществ в сопредельные среды: ТВ – транслокационный показатель, характеризующий переход химического вещества из почвы через корневую систему в зеленую массу и плоды растений; МА – миграционный воздушный показатель, характеризующий переход химического вещества в атмосферу; МВ – миграционный водный показатель, характеризующий переход химического вещества из почвы в подземные грунтовые воды и водные источники; ОС – общесанитарный показатель, характеризующий влияние химического вещества на самоочищающую способность почвы и микробиоценоз. В случае примения новых химических соединений, для которых отсутствуют ПДКП, рассчитывают временные допустимые концентрации ВДКП = 1,23 + 0,48 lg ПДКПР, где ПДКПР – предельно допустимая концентрация для продуктов питания (овощных и плодовых культур), мг/кг. ^ В зависимости от цели токсиикометрические исследования проводятся по-разному, но для решения задач гигиенической регламентации методические приемы, условия проведения и оценка результатов унифицированы. Исследование токсичности веществ начинается с изучения смертельных эффектов в острых опытах. Проникновение веществ в организм осуществляется при вдыхании (ингаляционный путь), введении в желудок, нанесении на кожные покровы и слизистые оболочки. Для изучения сравнительной токсичности соединение вводится внутрибрюшинно. В опытах на животных (белые крысы массой 180–240 г, белые мыши массой 18–29 г) определяют концентрацию (дозу), вызывающую гибель 50 % стандартной группы подопытных животных. CL50 и DL50 являются статистическими величинами со средней ошибкой и доверительными интервалами. В связи с этим в каждой группе количество животных должно быть не менее 6, желательно обоего пола и двух видов. Токсичность вводимого вещества в известной степени зависит от ряда факторов (концентрации и объема вводимого вещества, рН, температуры окружающей среды и др.). Поэтому каждый путь поступления соединений в организм требует определенных условий. При оценке степени токсичности при энтеральном пути поступления наиболее часто вещество вводится непосредственно в желудок с помощью металлических или пластмассовых зондов. Введение соединений производится через 3 ч после кормления, вводимый объем не должен превышать для мышей 1 мл, для крыс – 5 мл. Кормление животных осуществляется через 3 ч после введения вещества. Изучаемое соединение вводится в чистом виде. Если это невозможно, то используются растворители. Обычно такие вещества вводятся в водных растворах, плохо растворимые соединения – в растительном масле, в виде суспензии в 1–2 %-м растворе крахмала. Следует помнить, что острая токсичность может существенно меняться в зависимости от используемого растворителя. Поэтому используемый растворитель обязательно вводится контрольной группе животных. Поступление вредных химических веществ через дыхательные пути в производственных условиях играет ведущую роль в возникновении профессиональных заболеваний (отравлений). В лабораторных условиях используются два способа ингаляционного воздействия на лабораторных животных химическими веществами – статический и динамический. ^ используется для ориентировочных оценок степени токсичности летучих веществ при создании постоянной концентрации в замкнутом пространстве (специальные камеры или эксикаторы). Срок экспозиции для мышей – 2 ч, для крыс, морских свинок, кроликов – 4 ч. Основными недостатками данного метода являются быстрое накопление в невентилируемом пространстве углекислого газа, трудности в поддержании концентрации в камере на расчетном уровне. ^ позволяет обеспечить непрерывную подачу вещества в камеру, что создает условия для поддержания концентрации соединения на относительно постоянном уровне и обеспечивает необходимый воздухообмен. Наряду с определением параметров токсикометрии на смертельном уровне, позволяющем определить токсичность и опасность вещества, установить видовую и половую чувствительность, большое прикладное значение имеют такие параметры острой токсичности, как пороги вредного воздействия при однократном поступлении по интегральным (неспецифическим) и специфическим показателям (Limac int и Lim ac sp). Определение порога острого действия при однократном воздействии по изменению интегральных показателей проводится с использованием не менее 12 мелких лабораторных животных на одну концентрацию (дозу), как правило, применяется не менее трех концентраций. Оценка функционального состояния экспериментальных животных проводится через 4 ч после затравки, а затем на 2-й, 4-й и 8-й день опыта. При этом учитываются максимальные отклонения величины исследуемого показателя. Определение порога вредного действия по большинству специфических показателей регламентируется методическими указаниями, утвержденными Минздравом России. В производственных условиях наряду с энтеральным и ингаляционным путями возможно поступление химических веществ через кожные покровы – перкутантный путь. В практическом плане большое значение имеет определение кожно-резорбтивного и раздражающего действия. Предварительная оценка кожно-резорбтивного действия производится на мелких лабораторных животных путем погружения хвоста на 2/3 длины в исследуемый раствор. Экспозиция для белых мышей – 2 ч, крыс – 4 ч. При отсутствии симптомов интоксикации аппликации веществ продолжаются в течение 10 дней с последующим наблюдением на протяжении 3-х недель. При наличии резорбтивного действия производится количественная оценка степени токсичности. С этой целью животные фиксируются на специальном станке и на заранее выстриженный участок кожи наносят исследуемое соединение в определенной дозе. В зависимости от поставленной задачи при исследовании кожно-резорбтивного действия могут быть определены средняя смертельная концентрация или величина порога. Исследование местного раздражающего действия при аппликации на кожу проводится на двух видах экспериментальных животных. Используются кролики и морские свинки светлой масти. Количество животных – не менее 10 особей в группе. Участок аппликации составляет для кроликов 7 9 см, для морских свинок 5 5 см. За два дня до эксперимента тщательно выстригают участки шерсти по обе стороны от позвоночника, оставляя шерстяной покров между участками шириной 2 см. Правый бок служит для аппликации, левый – для контроля. На время экспозиции животных фиксируют для исключения слизывания вещества с кожи. Время экспозиции – 4 ч. Исследуемое вещество наносится на кожу из расчета 20 мг/см2. Как правило, соединение наносят на кожу в чистом виде. Если это невозможно, то используют дистиллированную воду или модельную среду, имитирующую состав потовой жидкости. Оставшееся после окончания эксперимента вещество удаляется теплой водой с мылом. Реакцию кожи регистрируют через 1 и 15 ч после однократной аппликации. Функциональные нарушения кожи характеризуются появлением выраженных в разной степени эритемы, отека, трещин, изъязвлений, а также изменением температуры кожи. Степень выраженности раздражающего действия вещества на кожные покровы определяют по классификации, включающей 11 классов (0 – отсутствие действия, 10 – растворы вещества слабее 5 % вызывают некроз). Исследование местного действия вещества на слизистую оболочку глаза проводится при закапывании в конъюктивальный мешок 1 капли соединения. Твердые вещества вносят в количестве 50 мг (дисперсность частиц до 10 мкм). В дальнейшем в течение двух часов наблюдают за прозрачностью роговицы и слизистой оболочки. Развитие помутнения роговицы, острое воспаление слизистой оболочки с последующим рубцеванием век свидетельствует о наличии у вещества резко выраженного раздражающего эффекта. В условиях подострого (на протяжении месяца) эксперимента проводят исследования, направленные на выявление наиболее чувствительных к воздействию токсичных веществ органов и систем экспериментальных животных. Это позволяет более адекватно подойти к выбору концентраций при проведении хронического эксперимента. Опасность токсичных веществ для человека в значительной мере предопределяется их способностью к кумуляции, поэтому изучение кумуляции является обязательным условием при гигиеническом регламентировании химических соединений. Наиболее распространенные в промышленной токсикологии методы оценки кумуляции основаны на определении усредненного суммарного количества вещества, полученного животным до появления определенного эффекта в подостром опыте, и сопоставлении этого количества с однократной средней эффективной дозой. В настоящее время в токсикологии принято несколько методов оценки кумуляции. С помощью метода, предложенного Каганом, животным ежедневно вводят вещество в долях от установленной DL50 (1/5, 1/10, 1/20, 1/200). Данный метод позволяет прогнозировать опасность развития хронического отравления. Опыт по развернутой схеме продолжается 4 месяца. Более быстрым является тест «субхронической интоксикации». Тест проводится в течение 24 дней. Первоначально ежедневная доза, составляющая 0,1 от установленной ранее DL50, вводится в течение первых четырех дней. На пятые сутки дозу повышают в 1,5 раза и вводят еще в течение четырех дней и так далее. Затем определяют Сcum. Более полная информация о кумулятивной активности соединений, развитии хронической интоксикации при воздействии химических веществ может быть получена при постановке длительных экспериментов. Целью хронического (5-месячного эксперимента) является изучение характера влияния на организм вредных веществ и установление Lim ch. Исследование хронического действия проводится на одинаковых по количеству опытных группах с соответствующим контролем. Опыты проводят на белых крысах, а при выраженных межвидовых различиях и на более чувствительном виде животных. Воздействие соединением осуществляется 4 ч в день 5 раз в неделю на протяжении четырех месяцев; пятый месяц – период восстановления. Как правило, проводится исследование трех концентраций с установлением пороговой и недействующей. В зависимости от типа действия вещества применяют комплекс функциональных, биохимических, морфологических и других показателей. Каждый показатель исследуют не менее чем на 12 животных. Оценка состояния экспериментальных животных проводится в динамике: первое обследование – через 2 недели, далее – ежемесячно. ^ В процессе токсикологических исследований проводится всесторонняя оценка функционального состояния животных с использованием современных методов, позволяющих судить об изменениях в организме в целом с помощью интегральных неспецифических показателей и особенностей изменений в организме, характерных для конкретного соединения или класса веществ (с помощью специфических показателей). К интегральным показателям относятся масса тела, потребление кислорода, мышечная работоспособность, поведенческие реакции, иммунологическая реактивность и др. Примерами специфических показателей являются определение в периферической крови метгемоглобина при воздействии нитросоединений, нарушения порфиринового обмена при отравлении парами свинца. Определение специфических показателей в ряде случаев требует специального оборудования и значительного времени, поэтому наиболее широко применяются интегральные показатели. Практически ни один токсикологческий эксперимент не проводится без изучения функционального состояния нервной системы. Используется большой набор методов изучения поведения, в основу которых заложены пищевые, оборонительные, ориентировочно-поисковые рефлексы. Методологической основой изучения сложных форм поведения является учение о функциональной системе, нарушение целостности которой приводит к изменению поведенческого акта. Предпочтение в экспериментальной токсикологии должно быть отдано таким методическим приемам, которые предполагают привлечение различных «классических рефлексов». Одной из наиболее распространенных методик, позволяющих оценить функциональное состояние ЦНС, является определение у животных способности к суммации подпороговых импульсов. Метод заключается в определении минимальной величины напряжения электрического тока, вызывающей сокращение межфаланговых мышц задних лап, которые фиксируются на электродах. В качестве несложного, но информативного интегрального показателя функционального состояния ЦНС используется спонтанно-двигательная активность. Для изучения этого показателя применяют различного рода актографы, позволяющие регистрировать двигательную активность животных, помещенных в специальный пенал, за определенный промежуток времени (1 – 10 мин.). Для определения двигательной активности, координации движений и эмоциональной реактивности используют следующие методы: метод определения «вертикальной двигательной активности в ограниченном пространстве», основанный на подсчете количества вставаний на задние лапы животных, помещенных в емкость, за 1 мин; метод «открытой площадки», использующий норковый рефлекс – животное помещают в центр горизонтальной площадки, на которой равномерно расположены 16 отверстий, и в течение 3 мин визуально или в автоматическом режиме регистрируют количество заглядываний в отверстия – норки. Наряду с перечисленными широко используют методы «вращающегося конуса», «открытого поля», лабиринтный метод и др. В зависимости от специфического действия исследуемого вещества и цели токсикологического эксперимента исследование функции ЦНС проводится либо по полной схеме, либо на различных стадиях формирования положительных или отрицательных условных рефлексов. Основные механизмы реакции ЦНС на действие токсичных веществ заключаются в изменении латентного периода реакции, нарушении соотношения уровней положительных условных рефлексов и процессов внутреннего торможения. Для выявления компенсированных изменений и модифицированной реактивности организма на начальных стадиях интоксикации используются различные функциональные нагрузки: исследование рефлексов на фоне повышенной возбудимости к пище, управление внешним торможением, длительная дифференциация, изменение последовательности раздражителей. Характер и интенсивность патологического процесса при воздействии токсичных веществ на животных зависит от типа их высшей нервной деятельности (ВНД). У животных с сильным уравновешенным типом ВНД с большой подвижностью нервных процессов развитие интоксикации носит более благоприятный характер. Применение любого метода условных рефлексов ограничено из-за высокой пластичности ВНД и из-за трудности экстраполяции на человека результатов, полученных на животных. Тем не менее, Комитет экспертов ВОЗ рекомендует эти методы как высокочувствительные и надежные для исследования изменений, происходящих в ЦНС под действием токсичных веществ. Для оценки мышечной работоспособности как одного из ведущих интегральных показателей используют большой набор тестов: удержание на шесте, бег в третбане, плавание, удержание груза и др. Для изучения изменения мышечной работоспособности у мелких лабораторных животных часто используют третбан. С помощью этого прибора можно точно учесть расстояние, пройденное за определенное время. С целью изучения мышечной работоспособности при выполнении динамической работы оценивают длительность плавания животных. Время плавания учитывают с момента помещения животного в воду до момента, когда оно тонет. При использовании данного метода должны соблюдаться определенные условия: температура воды – 38–39 оС, подвешивание к хвосту дополнительного груза, составляющего 5 % отлично массы тела животного. Результаты экспериментальных исследований систематизируются и подвергаются статистической обработке. |
||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
 |
1 Содержание и задачи предмета Предмет и задачи патологии |
|
Экзамен Форма проведения: традиционная вопросы для подготовки к экзамену понятие медицинской и клинической Понятие медицинской и клинической психологии. Предмет и задачи клинической психологии |
|
1. Предмет психиатрии задачи, отрасли Задачи: изуч-е происх-я и сущности псих заб-й, их клин проявл-й, лечения и проф-ки + првед-е экспертиз... |
|
I. Предмет и задачи эпизоотологии. Вопросы: Каковы основные задачи эпизоотологии? |
|
1. Предмет и задачи наркологии |
|
1. Предмет и задачи наркологии |
|
1. Предмет и задачи наркологии |
|
1 Предмет и задачи нейропси |
|
Тема предмет и задачи фармакологии |
|
1. Предмет и задачи общей психофизиологии |
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям