|
Скачать 2.04 Mb.
|
^
1.Губський Ю.Г. Біологічна хімія. - Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. - С. 18-36.2. Практикум з біологічної хімії/ За ред.. проф.. Склярова О.Я. – Київ: Здоров’я, 2002. – С. 14 – 24, 33 – 46. 3.Тестовые задания по биологической химии/ Под ред.Б.Г.Борзенко. -Донецк, 2000. - С. 148- 202. 4.Лекции по биохимии. 5.Граф логической структуры (Приложение 1). 6.Инструкция к практическому занятию. Дополнительная литература 1.Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1998. - С. 19-74 2.Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1990. - С. 17-63 3.Николаев А.Я. Биологическая химия. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 1998.-С.9-52 После изучения вышеперечисленных вопросов для самопроверки усвоения материала по изучаемой теме Вам предлагается решить следующие целевые обучающие задачи. Правильность решения задач можно проверить, сопоставив их с эталонами ответов. ^ Задача 1. Белок, состоящий из четырех субъединиц, обработали b-меркаптоэтанолом, восстанавливающим дисульфидные связи, что привело к утрате им физико-химических свойств. С чем связано это явление? А. С потерей нативной структуры - денатурацией. В. С разрушением только четвертичной структуры. С. С утратой только третичной структуры. D . С распадом только вторичной структуры. E . С гидролизом пептидных связей. Задача 2. Задняя доля нейрогипофиза человека секретирует 2 нейтропептида: вазопрессин и окситоцин, имеющие сходный состав, но обладающие различным биологическим действием. Вазопрессин: цис-тир-фен-глн-асп-цис-про Антидиуретическое и сосудосужи- вающее действие Окситоцин: цис-тир-изолей-глн-асп-цис-про Сокращение гладкой мускулатуры Чем обусловлены значительные различия функции гормонов? А. Составом и последовательностью аминокислот В. Вторичной структурой С. Третичной структурой D. Изменением заряда Е. Растворимостью Задача 3. Больной 30 лет с обширными ожогами был доставлен в клинику. Из сыворотки крови был выделен аномальный белок (белок теплового шока). Каким методом можно идентифицировать первичную структуру этого белка? А. Химическим В. Ренгеноструктурного анализа С. Электронной микроскопии D. Электрофореза Е. Ультрацентрифугирования Правильность решения проверьте, сопоставив их с эталонами ответов. ^ 1 - А, 3 – А.Краткие методические рекомендации к проведению занятия В начале занятия проводятся тестовый контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция. Затем студенты приступают к выполнению лабораторной работы, используя при этом инструкцию. После выполнения лабораторной работы необходимо оформить протокол, сделать выводы к работе, которые проверяет и контролирует преподаватель. Проводится анализ самостоятельной работы студентов и коррекция. В конце занятия проходит итоговый контроль, подводятся итоги занятия. ^ Работа №1 «Количественное определение белка биуретовым методом» Принцип метода: Метод основан на способности пептидных связей белков образовывать с ионами Си+2 в щелочной среде соединение фиолетового цвета, интенсивность которого пропорциональна содержанию белков в растворе. ^ сыворотка крови, 3% раствор едкого натра, реактив Бенедикта, пипетки, пробирки, штативы, ФЭК. Ход работы: 1. В пробирку налейте 1 мл сыворотки крови. 2. Добавьте 1 мл 3% №аОН и 0,2 мл реактива Бенедикта. 3. Раствор в пробирке перемешайте и оставьте на 15 минут. 4. Через 15 минут раствор фотоколориметрируйте на ФЭКе при зеленом светофильтре. 5. В тетрадь запишите оптическую плотность (Е) раствора . 6. Концентрацию белка в г/л определите по калибровочной кривой. Нормальное содержание белка в сыворотке крови составляет 65-85 г/л. Калибровочная кривая: ![]() Е С (г/л) Результаты: ВЫВОД: ^ Используя цветные реакции, можно обнаружить присутствие белков в растворах и установить аминокислотный состав. Существует 2 типа цветных реакций:
^ Принцип метода: Метод основан на способности пептидных связей белков образовывать с ионами Си+2 в щелочной среде соединение фиолетового цвета, интенсивность которого пропорциональна содержанию белков в растворе. ^ пробирки, пипетки, штатив, растворы белков, 3% раствор едкого натра, реактив Бенедикта. Ход работы:
В первую налейте 1 мл раствора яичного альбумина. Во вторую налейте 1 мл раствора пепсина. В третью налейте 1 мл раствора амилазы.
Появление фиолетовой окраски в пробирках свидетельствует о наличии белка. ^ Принцип метода: ά – аминокислоты свободные , а также входящие в состав пептидов и белков при кипячении с водным раствором нингидрина дают комплексные соединения синего или сине-фиолетового цвета. ^ пробирки, пипетки, штатив, растворы белков, 0,5% раствор нингидрина. Ход работы:
В первую налейте 1 мл раствора яичного альбумина. Во вторую налейте 1 мл раствора пепсина. В третью налейте 1 мл раствора амилазы. 2. Во все пробирки добавьте по 0,5 мл 0,5% раствора нингидрина. 3. Осторожно прокипятите растворы в течение 1-2 минут и наблюдайте окраску. Появление розово-фиолетового окрашивания, переходящего со временем в синее, свидетельствует о присутствии ά – аминокислот. ^ Принцип метода: ароматические аминокислоты свободные, а также входящие в состав пептидов и белков при нагревании с азотной кислотой образуют нитросоединение желтого цвета, переходящего в оранжевый при добавлении щелочи. ^ пробирки, пипетки, штатив, растворы белков, концентрированная азотная кислота, 20% раствор едкого натра. Ход работы:
В первую налейте 1 мл раствора яичного альбумина. Во вторую налейте 1 мл раствора пепсина. В третью налейте 1 мл раствора амилазы. 2. Во все пробирки добавьте по 5 капель концентрированной азотной кислоты.
4. Охладите пробирки, добавьте по 0,5 мл 20% раствора NаОН и наблюдайте изменение окраски. При наличии ароматических аминокислот появляется желтое окрашивание, которое после охлаждения раствора и добавления раствора едкого натра переходит в оранжевое. Полученные результаты занесите в таблицу. Результаты реакций:
ВЫВОДЫ: Подпиись преподавателя: |