Методические указания к лабораторным работам и контрольные вопросы и задачи для студентов II курса агротехнического факультета специальности «Зоотехния» Петрозаводск
|
|
Скачать 1.05 Mb.
|
|
^
в сыворотке крови Ход работы. После качественной реакции сыворотку крови разводят дистиллированной Н2О: при содержании 30-50 мг% делают разведения 1:3, 1:4, 1:5 и 1:6. Для этого берут 4 пробирки, в которые приливают по 0,1 мл сыворотки крови, в первую пробирку прибавляют 0,3, во вторую – 0,4, в третью – 0,5 и четвертую – 0,6 мл дистиллированной Н2О. Затем проводят качественную реакцию выявления кетоновых тел с нитропруссидом натрия на кафеле или предметном стекле так же, как в пункте 1, только прибавляют не цельную, а разведенную сыворотку крови. В пробе с наибольшим разведением, дающим положительную реакцию, содержится 10 мг% кетоновых тел. Умножая результат на степень разведения, получают содержание кетоновых тел в неразведенной пробе. Кетоновые тела в свежеполученном молоке и моче определяют так же, как и в сыворотке крови (пункт 1). Следует помнить, что тест более чем в 3 раза чувствительнее при определении ацетоуксусной кислоты, чем ацетона. Из всех кетоновых тел в сыворотке крови человека ацетоуксусная кислота является преобладающей, однако в крови здоровых коров 70-90% кетоновых тел составляет -оксимасляная кислота, в молоке на ее долю приходится 87-92%. Результаты: Общие выводы по работе: Вопросы для тестового контроля
^ РАБОТА 15. КОЛИЧЕСТВЕНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ Цель работы: ознакомиться с одним из распространенных методов количественного определения белка в сыворотке крови. Задачи:
^ Белки в щелочной среде реагируют с сульфатом меди с образованием комплексных соединений, окрашенных в сине-фиолетовый или красно-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в растворе. ^ 1. Построение калибровочной кривой Готовят семь рабочих стандартных растворов белка разведением основного стандартного раствора (содержит 4 мг белка в 1 мл) дистиллированной водой, как указано в таблице. Для приготовления контрольной пробы в пробирку наливают 2 мл дистиллированной воды. Таблица
Во все рабочие стандартные растворы и контроль добавляют по 2,5 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 минут для развития окраски. Окрашенные стандартные растворы колориметрируют на ФЭКе против контроля в кюветах на 5 мм с зеленым светофильтром (длина волны 540 нм). Полученные значения оптической плотности используют для построения калибровочной кривой. ^ Исследуемую сыворотку крови разбавляют дистиллированной водой в 40 раз (1 мл цельной сыворотки смешивают с 39 мл Н2О). К 2 мл разбавленной сыворотки добавляют 2,5 мл биуретового реак-тива и после перемешивания оставляют при комнатной температуре на 30 минут, а затем колориметрируют. Измерение оптической плотности производят так же, как при построении калибровочной кривой (используют тот же контроль, что и для построения калибровочной кривой). Содержание белка в пробе определяют по калибровочной кривой. Результаты: 1. Калибровочная кривая
где А – количество белка в пробе, определенное по калибровочной кривой, А/2 – количество белка (мг) в 1 мл разбавленной в 40 раз сыворотки крови, 100 – для пересчета на 100 мл сыворотки (для выражения показателя в мг%), 1000 – для перевода единиц в г%. В сыворотке крови здорового человека содержится 6,5-8 г% белка. Общие выводы по работе: Вопросы для тестового контроля
^ Вопросы для тестового контроля
РАБОТА 16. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПО МЕТОДУ ВААРДА Цель работы: ознакомиться с титриметрическим методом определения кальция в сыворотке крови. Задачи:
Изменение содержания кальция в сыворотке крови служит диагностическим тестом при эндокринных и неврологических заболеваниях и болезнях, вызванных недостатком некоторых витаминов (например, витамина D). В норме содержание кальция в сыворотке крови человека составляет 9-11 мг%. ^ Кальций, находящийся в сыворотке в виде водорастворимых солей, переводится в осадок в результате реакции:  Осадок растворяется в серной кислоте:  Освободившуюся щавелевую кислоту титруют раствором марганцевокислого калия: 5H2C2O4 + 2 KMnO4 + 3H2SO4 2MnSO4 + K2SO4 + 8H2O + 10CO2. Из приведенных уравнений следует, что по количеству марганцевокислого калия, пошедшего на окисление щавелевой кислоты, можно рассчитать исходное количество кальция. ^ В одну центрифужную пробирку вносят 1 мл сыворотки крови (опытная проба), а в другую – 1 мл дистиллированной воды (контрольная проба). В обе пробирки добавляют по 1 мл 4%-го раствора щавелевокислого аммония, пробы перемешивают, оставляют на 30 минут при комнатной температуре и центрифугируют со скоростью 3000 об./мин в течение 10 минут. Надосадочную жидкость сливают, в пробирки добавляют по 4 мл 2%-го раствора NH4OH и содержимое перемешивают стеклянной палочкой. Пробы центрифугируют в течение 10 минут. Надосадочную жидкость сливают, в пробирки добавляют по 2 мл 1 н раствора H2SO4 и содержимое перемешивают стеклянной палочкой. Не вынимая палочки, пробирки погружают в кипящую водяную баню до растворения осадка. Раствор титруют горячим, помешивая палочкой, 0,01 н раствором KMnO4 до появления бледно-розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 минуты. Содержимое кальция в сыворотке крови рассчитывают по уравнению: Х = 0,2 . (а - б) . 100, где Х – содержимое кальция в сыворотке крови в мг%; а – количество 0,01 н раствора KMnO4, пошедшее на титрование опытной пробы; б – количество 0,01 н раствора KMnO4, пошедшее на титрование контрольной пробы; 0,2 – количество кальция (в мг), эквивалентное 1 мл 0,01 н раствора KMnO4, согласно уравнениям реакций. Общие выводы по работе: ^ В КРОВИ Цель работы: ознакомиться с колориметрическим методом определения неорганического фосфора в крови. Задачи:
Неорганический фосфор биологических жидкостей входит в состав солей фосфорной кислоты. Основное назначение солей фосфорной кислоты в биологических жидкостях и в первую очередь в крови – создание в них буферной системы. Довольно часто в диагностических целях в клинических лабораториях в крови пациентов определяют содержание неорганического фосфора. В норме в крови содержание неорганического фосфора составляет 2,5-5 мг%. ^ Неорганический фосфат взаимодействует с молибдатом аммония в присутствии восстановителей (например, гидрохинона и сернистокислого натрия) с образованием окрашенного комплексного соединения (молибденовой сини). Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации неорганического фосфата. ^ 1. Построение калибровочной кривой а) В пять пробирок вносят по 1 мл стандартного раствора фосфора, содержащего соответственно 5, 10, 15, 20 и 25 мкг/мл. В контрольную пробирку вносят по 1 мл дистиллированной воды. б) Во все пробы добавляют по 4 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 20%-го раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл молибденового реактива и 0,5 мл 1%-го раствора гидрохинона. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут, после чего во все пробы добавляют по 2 мл карбонатсульфитного раствора и по 1,5 мл дистиллированной воды; перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 минут. Пробы колориметрируют с зеленым светофильтром в кюветах с толщиной слоя 10 мм против контрольной пробы. Внимание! Колориметрированию могут помешать образующиеся в процессе реакции пузырьки углекислого газа, поэтому перед измерением их необходимо осторожно снять со стенок кювет с помощью пастеровской пипетки и быстро измерить оптическую плотность растворов. ^ В центрифужную пробирку вносят 3 мл дистиллированной воды, 1 мл крови и 1 мл 20%-го раствора трихлоруксусной кислоты, смесь перемешивают и оставляют на 10 минут (для осаждения белков). Затем пробы центрифугируют 5 минут при 1500 об./мин и 1 мл надосадочной жидкости отбирают в другую пробирку. Для приготовления контрольной пробы в другую пробирку вносят 1 мл дистиллированной воды. Далее в обе пробирки приливают реактивы в той же последовательности, как описано в пункте б) при построении калибровочной кривой. Расчет: концентрацию фосфора в пробе определяют по калибровочной кривой и рассчитывают его содержание в крови в мг% по формуле: Х = (А 5 100) / 1000 = А / 2 (мг%), где А – количество фосфора в пробе, определенное по калибровочной кривой; А 5 – количество фосфора в 1 мл крови; 100 – для пересчета количества фосфора в 100 мл крови; 1000 – для перевода мкг в мг. Результаты:
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям