Пособие предназначено для врачей клинической лабораторной диагностики и врачей других специальностей. Рецензенты: Доктор медицинских наук, профессор Ю. В. Котловский Доктор биологических наук, профессор И. М. Устьянцева
|
|
Скачать 1.94 Mb.
|
|
^
Лабораторная диагностика имеет определяющее значение для установления причины инфекционного заболевания. Лабораторные исследования позволяют достоверно выяснить, каким именно возбудителем вызвано инфекционное заболевание, определить вирусную нагрузку, проследить иммунный ответ организма, правильно и своевременно назначить лечение, определить тяжесть течения болезни, проконтролировать эффективность лекарственной терапии. При выборе метода для определения микроорганизмов, вызвавших инфекционный процесс, врачу-клиницисту надо хорошо ориентироваться в возможностях того или иного метода исследования, с тем, чтобы выбрать оптимальный подход (микробиологический, генодиагностичекий или иммунологический) для лабораторного исследования. Комплексное обследование пациента различными лабораторными методами дает возможность врачу-клиницисту получать более полную информацию, как о наличии инфекционного агента, так и об иммунном статусе. Это позволяет более точно ставить диагноз, назначать соответствующее этиотропное лечение и вести последующий контроль терапии. Условно все методы диагностики инфекций можно разделить (Табл. 3) на две большие группы: прямые методы (выявления возбудителя) и непрямые (выявление эффекта). Прямое обнаружение возбудителя в клиническом материале является бесспорным доказательством инфекции и основанием для постановки этиологического диагноза. Таблица 3 Классификация лабораторных методов в зависимости от изучаемых объектов Прямые методыНепрямые методыМикробиологическийВыявления антителВыявления антигенаИнструментальныйМикроскопияГистологическийГенодиагностика (ПЦР)
Достоинства. Возможность изучения целого ряда клинически важных фенотипических свойств микроорганизмов. Микробиологический метод по-прежнему является «золотым стандартом». Такие микроорганизмы, как грампозитивные кокки (Staphylococcus spp, Streptococcus.spp), грамнегативные кокки (Neisseria spp), грампозитивные палочки (Corynebacterium spp), грамнегативные палочки (Heamophilus spp, Pseudomonas spp), грибы (Candida spp), бактерии кишечной группы (Escherichia coli, Proteus spp. и др.) выявляются с помощью традиционных, доступных и достаточно легко воспроизводимых микробиологических и микроскопических методов. Недостатки. «Некультивируемость» микроорганизмов, отсутствие адекватных сред или невозможность подбора условий культивирования для определенных микроорганизмов (вирусы и некоторые бактерии), длительность анализа, отсутствие высокопроизводительной техники идентификации и определения антибиотикорезистентности микроорганизмов, низкий уровень материальной базы бактериологических лабораторий. Ряд микроорганизмов, вызывающих воспалительные процессы в организме человека, таких как микобактерии туберкулеза, хламидии, микоплазмы, уреаплазмы можно выявить только с помощью очень трудоемких и дорогостоящих методов микробиологического исследования. Возбудителей с высокой антигенной изменчивостью или паразитирующих внутри клетки также трудно обнаружить классическими лабораторными методами. Наконец, разнообразные вирусы, например, вирус папилломы человека (HPV), герпес вирусы (VG), цитомегаловирус (CMV), вирус Эпштейна-Барр (EBV) не могут быть выявлены с помощью микробиологических методов. Для их диагностики ПЦР-метод является оптимальным выбором. Уровень развития микробиологической диагностики РФ остается одним из самых низких среди Европейских стран.
Этот метод, прежде всего позволяет объективно выявлять реакцию организма человека в ответ на контакт с инфекционными агентами, выражающуюся в выработке специфических антител, обнаруживать специфический клеточный ответ, антитела IgG, IgM, IgA, а также антигены некоторых микроорганизмов. Достоинства. Быстрота анализа, низкая стоимость, возможность стандартизации и автоматизации, достаточно высокая воспроизводимость результатов, высокая пропускная способность. Для определения некоторых микроорганизмов, например, Rubella virus иммунологический подход предпочтительнее других. Недостатки. Непредсказуемая специфичность, необходимость в дублях при постановке реакции, необходимость наблюдения за титром антител в динамике для уточнения остроты процесса, низкая аналитическая чувствительность, поздняя сероконверсия, особенно актуальная для прямых методов ИФА «серологическое окно», перекрестные результаты ИФА у пациентов с циррозом печени, болезнями соединительной ткани, аутоиммунными заболеваниями, беременных и пожилых, а также (для косвенных методов ИФА) перекрестные результаты ИФА на антитела к другим микроорганизмам, ложноположительная реакция в случае циркуляции антител класса IgG у детей, рожденных от инфицированных матерей, вакцинации и при аутоиммунных заболеваниях.
Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), прямое выявление как корпускулярных, так и растворимых антигенов при люминесцентной микроскопии. Метод является скрининговым, так как его чувствительность и специфичность при использовании моноклональных антител, содержащихся в качественных импортных наборах, может составлять 60 % и 80 % соответственно. ПИФ недостаточно чувствительна для определения малых количеств элементарных телец, возможны как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты, поэтому этот метод предлагается использовать только как ориентировочный.
Для установления точного диагноза заболеваний, вызываемых различными инфекционными агентами, все чаще применяются современные методы молекулярной биологии. Достоинства:
Недостатки:
Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что лишь опосредованно свидетельствует о наличии инфекции. При этом выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции. У метода ПЦР существует ряд особенностей, большинство из которых являются несомненными достоинствами этого метода.
Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это обусловливает универсальность процедуры постановки ПЦР при исследовании любых биологических объектов и дает возможность диагностировать несколько возбудителей из одной биопробы, кроме того, в качестве исследуемого материала могут использоваться различные биологические образцы. Наконец, вне зависимости от объекта и области применения ПЦР (клиническая медицина, криминалистика, ветеринария, генетика, молекулярная биология) для его проведения используется стандартный комплект приборов.
Важное свойство ПЦР – ее высокая специфичность. Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от иммунологических методов анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами. Выделяют аналитическую и диагностическую специфичность. Диагностическая специфичность – число отрицательных реакций при тестировании материала образцов от больных контрольной группы (лица с подтвержденным отсутствием инфекции). Аналитическая специфичность оценивается по числу совпадений результатов с референс тест-системой, предоставляемой ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Чем специфичнее данный метод исследования, тем реже он дает "ложно-положительные" результаты. Ложноположительные результаты исследования могут привести к неправильному диагнозу и назначению ненужных и, возможно, ухудшающих качество жизни пациента диагностических и лечебных процедур.
ПЦР отличается чрезвычайно высокой чувствительностью. Теоретически для осуществления реакции достаточно всего одной копии искомой ДНК (РНК) - последовательности в исследуемом материале. Аналитическая чувствительность набора это предел измерения данного ПЦР-диагностикума. Определяется в копиях ДНК или РНК на мл биологической пробы или в геномных эквивалентах ГЭ/мл. Диагностическая чувствительность – число положительных реакций при тестировании образцов от больных опытной группы с подтвержденным диагнозом. Метод ПЦР позволяет выявлять единичные клетки бактерий или вирусов. Аналитическая чувствительность ПЦР-анализа составляет 1–100 клеток в пробе, в то время как чувствительность иммунологических и микроскопических тестов – 103–105 клеток. Это позволяет использовать ПЦР, когда серологические и бактериологические исследования не дают положительного результата вследствие крайне низкого микробного титра например, при количественной (концентрация) оценке содержания НК в биологической пробе, при контроле инфекционной безопасности донорской крови и органов, диагностике хронических и латентных инфекций. Некоторые тест-системы допускают осуществление одновременного определения нескольких инфекций в одной реакции амплификации, если для определяемых инфекций совпадают программы проведения реакции. Следует отметить, что в этом случае чувствительность реакции уменьшается пропорционально разбавлению. Поэтому, рекомендуется одновременно определять не более трех инфекций за одну реакцию. Чувствительность методов исследования приобретает особенно большое значение в случаях, когда требуется исключить наличие особо опасного инфекционного заболевания. Чем чувствительнее данный метод исследования, тем реже он дает "ложноотрицательные" результаты. Ложноотрицательными называют результаты, не позволяющие выявить имеющееся у пациентов заболевание. Сравнительная оценка диагностической чувствительности различных методов, проведенная в нескольких зарубежных исследовательских центрах, показала, что экспресс-тесты имеют чувствительность 40–60%, ИФА – 50–70%, прямая иммунофлюоресценция (ПИФ) – 55–75%, культуральное исследование – 60–80%, а ПЦР – 90–100%.
Скорость и высокая производительность (возможность параллельного анализа большого количества образцов) являются бесспорными преимуществами данного метода. Для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени. Преимущество ПЦР в скорости получения результата по сравнению с культуральными методами особенно заметно при исследовании медленнорастущих микроорганизмов, при идентификации возбудителей с высокой антигенной изменчивостью или паразитирующих внутри клетки, при определении лекарственной устойчивости у штаммов микобактерий туберкулеза. Унифицированный метод обработки биоматериала и детекции продуктов реакции и автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ в течение рабочего дня. ПЦР позволяет осуществить определение возбудителя инфекции или дефектного гена в организме еще до развития заболевания. Например, при инфекциях в инкубационном периоде (серонегативной фазе) или при латентном характере заболевания. Кроме того, возможно проведение ПЦР в архивном (фиксированном) материале или биологических остатках, что важно для идентификации личности или отцовства. Проведение анализа возможно в минимальном объеме пробы (до нескольких микролитров), что крайне важно в неонтологии, судебной медицине, клинической генетике и т.п. Возможность одновременной диагностики нескольких возбудителей заболеваний или аномальных генов в одной пробе без ущерба для чувствительности или специфичности результата.
Комплексное обследование пациента различными лабораторными методами дает возможность врачу-клиницисту получать более полную информацию, как о наличии инфекционного агента, так и об иммунном статусе. Это позволяет более точно ставить диагноз, назначать соответствующее этиотропное лечение и вести последующий контроль терапии.
Материалом для ПЦР могут быть соскобы эпителиальных клеток, кровь и ее компоненты, костный мозг, плевральная, синовиальная и спинномозговая жидкости, моча и ее клеточный осадок, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, слюна, плевральный выпот, сперма, секрет простаты, желудочный сок, слезная жидкость, выделения молочных желез, смывы и другие биологические жидкости, биоптаты, секционный (аутопсийный) материалы, отделяемое везикул, фиксированные или парафинированные ткани. Биологическим материалом для ПЦР-диагностики может служить бактериальная культура, сточные воды, почва, продукты питания, корма.
Забор крови рекомендуется проводить с использованием вакуумных систем. Внедрение таких систем позволяет стандартизировать манипуляции с кровью, положительно сказывается на всех этапах лабораторного исследования и в целом переводит работу лаборатории на иной, более высокий уровень качества. Их использование гарантирует защиту персонала от инфицирования, сокращается время, затрачиваемое на процедуру забора крови, значительно реже сопровождается гемолизом, сохранить стерильность проб крови и позволяет герметично транспортировать пробы крови. Венепункцию рекомендуется выполнять натощак из локтевой вены в специальную вакуумную пробирку с антикоагулянтом, после чего пробирка переворачивается для перемешивания несколько раз. Пробирки с кровью хранят в холодильнике при +4°С – +8°С. Максимальный срок хранения крови – 1 сутки (не замораживать!). В случае необходимости длительного хранения необходимо отобрать 1 мл сыворотки или плазмы крови и хранить ее при температуре -16о-20о С не более 2 недель. Характеристика вакуумных систем, используемых для ПЦР-диагностики:
У мужчин материалом для скрининга на ИППП служат соскобы из уретры, осадки клеток первой порции утренней мочи, помещенные в 300 мкл транспортной среды, секреты предстательной железы. Достаточно информативным является исследование у мужчин методом полимеразной цепной реакции осадка первой порции утренней мочи. У детей материал берут с наружного отверстия уретры, осадки клеток первой порции утренней мочи, мазки с конъюнктивы. Для скрининга на ИППП у женщин исследуют соскоб (мазок) из уретры, цервикального канала, нижнего свода влагалища, осадки клеток первой порции утренней мочи, которые помещаются в транспортную среду. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на герпетическую группу). В некоторых случаях для диагностики можно использовать образцы выделений из влагалища, в том числе взятые тампоном самостоятельно без посещения кабинета забора клинического материала. Забор материала у девочек производится со слизистой оболочки преддверия влагалища, с наружного отверстия уретры, осадки клеток первой порции утренней мочи, мазки с конъюнктивы.
Причинами ингибирования ПЦР-реакции могут быть:
Забор материала производится рабочей частью стерильного одноразового аппликатора. Слегка проводят им 1–2 раза по слизистой в местах предполагаемой локализации инфекционного агента. После забора материала аппликатор помещают в стерильную одноразовую пробирку с транспортной средой. Тщательно перемешивают, остатки жидкости на зонде отжимают о стенки пробирки, аппликатор извлекают (выбрасывают в контейнер с дезинфицирующим раствором) или отрезают, оставляя рабочую часть в пробирке с транспортной жидкости. Приготовленную таким образом пробу передают в лабораторию. Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.
Первая порция утренней мочи в количестве 10 мл собирается в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора. Использование домашней посуды вместо специальных контейнеров и пробирок приводит к контаминации проб, получению заведомо ложных результатов и невозможности стандартизации. Максимальный срок хранения отобранного материала одни сутки в холодильнике при температуре +4°С.
Мокроту собирают утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10-15 мл после проведенного инструктажа по забору материала в домашних условиях, либо в ЛПУ под контролем медперсонала. Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.
Забор материала производится одноразовым шприцом в количестве 1 мл. Отобранный материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа “Эппендорф”. Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.
Секрет простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям стандартным способом с использованием стерильного (одноразового) инструментария в количестве 0,1–1,0 мл в стерильные разовые пробирки с плотно закрывающимися крышками.
Кусочки органов или ткани объемом примерно 2–3 мм3 помещают в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1.5 мл. Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.
С помощью лабораторных данных 60–80% всех медицинских решений клиницисты принимают по результатам клинико-лабораторных исследований. Лабораторные данные позволяют врачу увереннее проводить разработку плана обследования и лечения пациента, вести наблюдение за эффективностью терапии.
Использование метода ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний как бактериальной, так и вирусной природы имеет иногда большое значение для решения многих проблем микробиологии и эпидемиологии, способствует развитию фундаментальных исследований в области изучения хронических и малоизученных инфекционных и наследственных заболеваний. На сегодняшний день практически нет инфекционного агента, которого нельзя было бы выявить с помощью ПЦР (Табл. 4). Особое место в этом ряду занимают вирусные инфекционные агенты и микобактерии туберкулеза. ПЦР открывает поистине фантастические возможности анализа генома человека – выявления дефектных генов, определяющих наследственную предрасположенность к заболеваниям. Таблица 4 Локализация возбудителей и диагностическое значение ПЦР Показания к проведению ПЦР-исследованияМатериал для исследованияВозбудительВирусный гепатитКровь, биоптаты печениВирусы гепатитов В, С, D, GКонтроль крови и препаратов из нее в трансфузиологии и трансплантологииКровьВирусы гепатитов В, С, D, G, ВИЧ, герпеса, ЦМВЦервицит, эндометритЦервикальный соскоб, аспират из полости маткиСhlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealiticum, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Gardnerella vaginalis, Candida albicans Вирус простого герпеса I, II типовСальпингит, периаппендицитЦервикальный соскоб, биоптаты, полученные при лапароскопииБактериальный вагиноз, вагинит, вульвовагинит у девочекЭпителиальный соскоб из влагалищаУретрит, простатитСоскоб из уретры, моча, сок простатыЭпидидимитСпермаПроктитСоскоб из прямой кишкиБесплодие, невынашивание беременности, эктопическая беременностьЦервикальный соскобСиндром РейтераЭпителиальный соскоб из уретры и конъюнктивыГерпетические поражения гениталий, слизистых оболочек, кожных покровов и др.Эпителиальный соскоб с пораженного участка, кровьВирус простого герпеса I, II, VI типов, вирус Эпштейн-Барра, вирус Варицелла ЗостерКандиломатозЭпителиальный соскоб с пораженного участкаПапилломавирус (HPV)Пневмония новорожденных, рецидивирующие хронические заболевания верхних отделов дыхательной системыЭпителиальный соскоб с задней стенки глотки, бронхоальвеолярный лаваж, мокротаСhlamydia trachomatis, Сhlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma hominis, Mycobacterium tuberculosisКонъюнктивит (в том числе у новорожденных)Эпителиальный соскоб из конъюнктивыСhlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Вирус простого герпесаЦитомегаловирусная инфекция (в том числе внутриутробная у новорожденных)Кровь, моча, слюна, амниотическая жидкость, биоптатыЦитомегаловирус Туберкулез легкихМокрота, бронхоальвеолярный лаважMycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovisТуберкулез мочеполовых и др. органовМоча, соскоб с пораженного участкаЯзва желудка, гастрит, дуоденитБиоптат слизистойHelicobacter pylori Особенности вирусной природы заболевания обуславливают определенные трудности их диагностики, лечения и профилактики. Весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов. В настоящее время известно как минимум пять вирусов, способность которых вызывать поражение печени, доказана. Это вирусы гепатита А, В, С, D, Е. Существуют и другие вирусы, поражающие печень, однако при этом печеночная ткань не является местом первичной репликации вируса и поражения гепатоцитов. К таким вирусам относятся: цитомегаловирус (CMV), вирус простого герпеса (ВПГ), вирус Эпштейна-Барр (EBV) и многие флавивирусы, переносимые членистоногими например, вирус, вызывающий лихорадку Денге и желтую лихорадку. Этиологическая роль HGV и вируса TTV в развитии хронического гепатита сомнительна. Их способность специфически поражать гепатоциты подвергается сомнению, т.к. в литературе описаны только отдельные случаи вызванного ими гепатита, в то время как частота бессимптомного носительства этих вирусов в популяции очень высока. Наибольшую угрозу для здоровья населения представляют вирусные гепатиты с парентеральным путем передачи HCV, HВV, НDV. Эти инфекции характеризуются тяжелым клиническим течением, являясь частой причиной хронического гепатита. Установлено, что длительное персистирование этих вирусов в гепатоцитах является решающим фактором их малигнизации. Для надежного доказательства вирусного гепатита, в т.ч. “молчащих” форм инфекции, для оценки эффективности терапии применяются молекулярно-биологические методы, обладающие высокой дискриминативной способностью, направленные на поиск специфичных молекулярных маркеров.
Для гепатитов HАV и HЕV не характерно развитие хронического (протекающего больше 6 мес.) заболевания печени. Вирусы гепатита А и Е передаются фекально-оральным путем и чаще всего обнаруживаются в местах с плохими санитарными условиями. РНК вируса гепатита HАV появляется в крови больного гепатитом А гораздо раньше, чем антитела (anti-HAV IgM). Для диагностики вирусного гепатита А традиционно используются ИФА тест-системы (для выявления антител к вирусу гепатита А класса IgM). Иммуноглобулины класса IgM сохраняются после перенесенного заболевания в течение нескольких месяцев (до года), что может приводить к гипердиагностике HAV при развитии в этот период поражения печени другой этиологии. Использование тест систем для выявления РНК HАV в плазме крови больных позволяет наиболее точно установить этиологию заболевания и его острую фазу и правильно интерпретировать данные серологических исследований. Кроме того, метод ПЦР позволяет эффективно выявлять HАV в концентратах проб воды из эпидемических очагов заболевания.
Особую ценность представляет ПЦР для обнаружения вирусов гепатита В, позволяя:
В качестве дополнительных маркеров для объяснения тяжелой ВГВ-инфекции стали применяться отличительные данные по генотипу возбудителя инфекции: наличие характерных мутационных замен, вставок и делеций в геноме инфицирующих штаммов ВГВ у больного. Для гепатита В известно по меньшей мере восемь генотипов (A–H). Считается, что вероятность развития гепатоцеллюлярной карциномы при поражении печени различных генотипов гепатита В может быть различной. С этой точки зрения наиболее опасным генотипом HBV вируса считается генотип С, который ассоциирован с продолжительностью заболевания и тяжестью печеночных изменений.
Возбудитель HDV является уникальным среди всех вирусов гепатита, а также самым вирулентным. Как вирус он неполноценен, т.к. не может реплицироваться и инфицировать человека, не зараженного вирусом гепатита В. Чтобы репродуцироваться в организме человека, вирусу гепатита D необходима внешняя оболочка вируса гепатита В (HВV). HDV состоит из РНК, внутреннего антигена (HDAg) и внешней оболочки, состоящей из HBsAg. HDV встречается только у улиц, инфицированных возбудителем гепатита В. Вирус гепатита HDV, так же как и вирус гепатита В, передается через кровь и жидкости организма. Симптомы гепатита HDV идентичны с проявлениями других форм вирусных гепатитов и включают в себя желтуху, лихорадку, недомогание, темную мочу и тошноту. Несмотря на то, что симптомы сходны, заболевание гепатитом HDV протекает в более тяжелой форме, чем заболевание только гепатитом В. Основной особенностью патогенеза HDV-инфекции является ведущая роль HDV по сравнению с HBV. При этом активная репликация HDV чаще приводит к подавлению репродукции HBV. Существуют два типа инфицирования: коинфицирование и суперинфицирование вирусом гепатита HDV. Коинфицирование происходит, если пациент одновременно инфицируется вирусом гепатита HDV и вирусом гепатита HBV. Суперинфицирование происходит, если больной с хроническим инфицированием вирусом гепатита HBV заражается вирусом гепатита HDV. У таких пациентов, как правило, наблюдается внезапное ухудшение состояния при заболевании печени. У пациентов с гепатитом HBV, которые инфицируются вирусом гепатита HDV, течение хронического гепатита становится более агрессивным и наблюдается очень высокий уровень цирроза и развития терминальных стадии заболеваний печени, что делает такое суперинфицирование чрезвычайно опасным.
Инфицирование гепатитом С является одной из основных причин развития хронических (до 85%) диффузных заболеваний печени и гепатоцеллюлярной карциномы (первичного рака печени). Отличительной особенностью ВГС является многолетнее латентное или малосимптомное течение по типу так называемой медленной вирусной инфекции. В таких случаях заболевание большей частью долго остается нераспознанным и диагностируется на далеко зашедших клинических стадиях, в том числе на фоне развития цирроза печени и первичной гепатоцеллюлярной карциномы. В настоящее время наиболее распространенным методом лабораторной диагностики гепатита HСV является иммуноферментный анализ, направленный на выявления специфических антител в сыворотке крови. При использовании тест-систем даже 3-го поколения, считающихся наиболее чувствительными и специфичными, не всегда удается своевременно поставить диагноз. В большинстве случаев это связано с существованием «серологического окна». Этот период может продолжаться от 3 недель до 6 месяцев. Кроме того, наличие антител к вирусу гепатита HСV не свидетельствует о наличии заболевания. Тест-систем для выявления антигенов вируса гепатита HСV в настоящее время в практическом здравоохранении нет. Одним из основных маркеров активности патологического процесса является репликация вируса, для доказательства которой необходимо выявление самого вируса или его компонентов. РНК HCV обнаруживаются в сыворотке крови уже в течение первой недели после инфицирования Учитывая неуклонный рост заболеваемости вирусным гепатитом HCV, проблема этиологической диагностики этого заболевания становится все более актуальной. ПЦР играет ведущую роль в диагностике гепатита С, позволяя:
В настоящее время успешно реализуются количественные методы ПЦР-анализа. Хорошим прогностическим признаком при назначении терапии является низкий уровень виремии – менее 30000 ME/мл. Количественный ПЦР-тест является информативным параметром отклика пациента на терапию (Рис. 6).  Рис. 6. Преимущества выявления HCV количественным метода ПЦР в реальном времени перед качественным методом При проводимой терапии понижение вирусной нагрузки является явным маркером того, что пациент хорошо реагирует на выбранные лекарственные препараты и их дозу. В случае, когда в течение трех месяцев не происходит значимого уменьшения уровня вирусной нагрузки (в 100 и более раз), обычно рекомендуется изменение дозы или смена препарата и схемы лечения. В связи с этим важно постоянно контролировать ход лечения. Количественное определение РНК вируса гепатита С в плазме крови во время лечения является необходимым исследованием и позволяет врачам выбрать оптимальную схему лечения для каждого пациента.
В пульмонологии методы ДНК-анализа применяется для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, рецидивирующих хронических бронхитов, туберкулеза легких. Обнаружение микобактерий туберкулезного комплекса в клинических образцах является одним из основных диагностических подходов во фтизиатрии. В настоящее время классические методы выявления возбудителя по своей эффективности уже не удовлетворяют клиницистов. Быстрый метод бактериоскопии обладает низкой чувствительностью: для обнаружения микобактерий туберкулеза необходимо, чтобы 1 мл материала содержал не менее 100 тыс. микробных клеток. Люминесцентная микроскопия увеличивает чувствительность бактериоскопии на 10-30%. Чувствительность бактериологического посева значительно выше – 20-100 микробных клеток, однако, исследование занимает длительное время – один – три месяца. Морфологическая диагностика сложна, так как требует получения биоптата из пораженного органа, либо заставляет идти на диагностическую операцию. В связи с этим микобактерии туберкулеза выявляют в среднем лишь у 50-60% больных активным туберкулезом. Методы диагностики с использованием серологических тестов – ИФА, РИА, РПГА, латекс-агглютинация и др. - имеют сомнительное диагностическое значение вследствие их низкой чувствительности и специфичности. Антитела к микобактериям в том или ином количестве присутствуют в крови не только больных, но и здоровых инфицированных людей. Титры антител в сыворотке крови больных активным туберкулезом и титры антител у людей с неактивным туберкулёзом зависят от состояния иммунной системы пациента и особенностями течения болезни связанной с давностью инфицирования или тяжестью заболевания. Кроме того, бактерии могут находиться в мембранной упаковке (в фагосоме), в которой антигенные детерминанты микобактерий скрыты от иммунной системы и на фоне тотальной вакцинации населения БЦЖ имеют сомнительное диагностическое значение. Поэтому все большее значение приобретают альтернативные и дополнительные методы. Совершенствуются методы культивирования микобактерий. Примером может служить радиометрический метод с использованием системы BACTEC, сокращающий время бактериологического исследования туберкулеза до 10-20 дней. Для эффективного выявления M.tuberculosis в клинических образцах применяется метод полимеразной цепной реакции. Метод ПЦР позволяет дифференцировать виды бактерий, что облегчит диагностику атипичных случаев туберкулеза (микобактериозы), часто имеющих сходную с туберкулезом клинико-рентгенологическую картину. ПЦР имеет несомненное преимущество, поскольку не дает неспецифических реакций. Метод ПЦР сочетает в себе высокую чувствительность, которая не уступает культуральному методу и равна 2-50 копий генома, и высокую оперативность (время проведения анализа - 6-8 часов). В настоящее время разработаны и появились на рынке ПЦР-наборы для определения устойчивости микобактерий к противотуберкулезным препаратам и для дифференциальной диагностики микобактерий. Молекулярно-биологическим методам исследования туберкулеза придается важная роль в повышении эффективности выявления и дифференциальной диагностики туберкулеза, контроле диспансерных больных, улучшении системы эпиднадзора за туберкулезом Частой причиной атипичных пневмоний, рецидивирующих хронических бронхитов являются микоплазмы, хламидии и вирусные агенты. Диагностика этих возбудителей традиционными методами микроскопии и бакпосева неэффективна. ПЦР позволяет не только диагностировать хламидиозы и микоплазмозы, но и проводить видовую идентификацию возбудителя (С. pneumoniae, C. trachomatis, M. hominis, M. Pneumoniae и др.).
Наиболее эффективно и экономически обосновано использование метода в урогинекологической практике для выявления ВПЧ, хламидиоза, микоплазмозов, хронической гонореи, герпеса, гарднереллеза. В гинекологии ПЦР-анализы – обязательная диагностическая процедура, входящая в профиль обследований различных женских заболеваний, в первую очередь, для диагностики широкого спектра заболеваний передающихся половым путем (ЗППП). Так методами ПЦР может быть диагностировано большинство инфекций, передаваемых половым путем (ИППП). (Табл. 5) Таблица 5 Возбудители урогенитальных инфекций Патогенные микроорганизмы – возбудители ИПППУсловно-патогенные микроорганизмы урогенитального трактаTreponema pallidumMycoplasma homnisNeisseria gonorrhoeaeUreaplasma urealyticumChlamydia trachomatisUreaplasma parvumMycoplasma genitaliumGardnerella vaginalisTrichomonas vaginalisCandida spp.Вирусы герпеса (HSV 1,2)Другие микроорганизмы, ассоциированные с бактериальным вагинозомВирусы папилломы человека (HPV)Большинство вышеперечисленных инфекций протекает со схожей симптоматикой и может приобретать затяжное, хроническое течение, что приводит к развитию осложнений (воспалительные заболевания органов малого таза, нарушение репродуктивной функции, осложнения в процессе беременности и др.). Воспалительный процесс урогенитального тракта может протекать с участием нескольких возбудителей. При этом этиологические агенты, вызвавшие инфекционный процесс, могут быть выявлены только на основании прямых лабораторных методов.
Уретрит – воспалительное заболевание мочеиспускательного канала. За развитием уретрита стоят патогенные микроорганизмы, возбудители ИППП – гонококки, хламидии, трихомонады, вирусы простого герпеса 1 и 2 типов, а также условно-патогенная флора. Традиционно при диагностике уретрита используются мазки, полученные из дистального отдела уретры, где чаще всего локализован воспалительный процесс. В тоже время, инфекция может распространяться на верхние отделы уретры, недоступные для получения с помощью стандартной процедуры. В этом случае исследование первой порции мочи с помощью высокочувствительного метода амплификации нуклеиновых кислот может способствовать выявлению возбудителя и установлению этиологии инфекции. Цервицит - воспаление слизистой оболочки шейки матки. Инфекционный цервицит чаще возникает при заболеваниях, передающихся половым путём. Его могут вызывать хламидии (Chlamydia trachomatis), гонококки (Neisseria gonorrhoeae), ВПГ, трихомонады (Trichomonas vaginalis), реже - другие микроорганизмы. ^ – инфекционный невоспалительный синдром различной этиологии, обусловленный резким снижением перекись-продуцирующих лактобактерий и замещением их кокко-бациллярной микроаэрофильной (G.vaginalis) и анаэробной (Bacteroides spp., Prevotella spp., Mobiluncus spp., Atopobium vaginae и др.) флорой. БВ не относится к ИППП, а является проявлением дисбиоза влагалищного биотопа. Маркерами бактериального вагиноза является снижение лактофлоры и увеличение Gardnerella vaginalis. Лактобактерии формируют своеобразный барьер на пути распространения патогенных микробов. Проблемы патологического состояния шейки матки привлекает к себе большое внимание врачей-гинекологов ввиду высокой распространенности и трудности диагностики. ^ – широко распространенная и очень вариабельная группа вирусов, обладающих онкогенным потенциалом. Вирусы папилломы передаются только при тесном контакте с инфицированным или пораженным эпителием. Клетками-мишенями для ВПЧ являются эпителиоидные клетки кожи и слизистой оболочки. Вирусы могут оказывать на эпителий продуктивное и трансформирующее воздействие. При продуктивном воздействии возникают доброкачественные новообразования, при трансформирующем – дисплазии тяжелой степени, прогрессирующее развитие которых приводит к раку. Среди генитальных типов особенно актуальными являются типы вируса, обладающие высокой трансформирующей активностью по отношению к эпителиальной клетке и способные провоцировать развитие злокачественных новообразований, в том числе, рака шейки матки. Не каждая инфицированная женщина заболевает раком. По литературным данным до 90% случаев инфицирования ВПЧ заканчиваются спонтанным выздоровлением, однако в 10% случаях развивается персистирующая инфекция, которая и запускает механизмы злокачественной трансформации эпителиальных клеток. Интеграцией вирусной ДНК в геном клетки хозяина и ее опухолевая трансформация чаще возникает при ослаблении иммунной системы, при взаимодействии ВПЧ с другими канцерогенными или инфекционными агентами (вирус простого герпеса 2 типа, Ch. trachomatis, цитомегаловирусы и др.). В последние годы получены новые данные на молекулярном уровне, подтверждающие онкогенность вируса папилломы. Установлено, что белки Е6 и Е7, кодируемые HPV, способны вызывать клеточную трансформацию. Показано, что белок Е7 взаимодействует с клеточным белком р53, супрессором трансформации клеток, и вызывает его деградацию, что открывает путь к перерождению инфицированной вирусом клетки, неконтролируемому делению измененных клеток и приводит к образованию обширных участков пораженного эпителия шейки матки. Наличие белка Е7 в цервикальных пробах может рассматриваться как однозначное свидетельство начавшегося процесса малигнизации эпителиальных клеток, содержащих интегрированную копию генома ВПЧ. Прогнозы по поводу онкогенной трансформации при инфицировании вирусом зависят от типа вируса и физического состояния его ДНК. Лабораторная диагностика папилломовирусной инфекции, направленная на раннее выявление носительства вируса, является важным инструментом, позволяющим контролировать распространение инфекции и своевременно назначать комплексные лечебно-профилактические мероприятия, предупреждающие развитие онкологических осложнений. Однако использование этого метода приводит к некоторой гипердиагностике, т.к. примерно в 80% случаев инфицирование ВПЧ имеет кратковременный характер и заканчивается спонтанным выздоровлением и элиминацией вируса. В связи с этим, положительный результат при лабораторном исследовании на ДНК ВПЧ не позволяет в большинстве случаев прогнозировать развитие цервикального рака. Вирус папилломы человека подразделяется на две большие группы. Первая вызывает образование папиллом. Вторая ассоциируется с предопухолевыми заболеваниями и раком шейки матки. Поэтому при наличии фоновых заболеваний шейки матки и присутствии вируса папилломы человека высокого канцерогенного типа повышается вероятность опухолевых заболеваний шейки матки. В таком случае необходимо ежегодное профилактическое обследование, включающее кольпоскопию и онкоцитологическое исследование соскоба с шейки матки. Кроме того, необходимо проведение лечения, направленного на укрепление общего и местного иммунитета и нормализацию микрофлоры влагалища. ПЦР диагностика хламидийной, микоплазменной и герпесвирусной инфекций является актуальной для акушерско-гинекологической практики, неонатологии, педиатрии, урологии, венерологии, нефрологии, пульмонологии, офтальмологии, неврологии. Материалом для вышеперечисленных возбудителей могут служить аспираты, носоглоточные смывы, соскобы из зева, моча, мазки из уретры, вагины и цервикального канала, соскобы клеток конъюнктивы и спинномозговая жидкость. ^ вызывает урогенитальную хламидийную инфекцию. Первоначальным очагом инфекции чаще всего является слизистая уретры у мужчин и канала шейки матки у женщин. Кроме того, Ch.trachomatis может поражать и другие слизистые, покрытые цилиндрическим эпителием (прямая кишка, конъюнктива глаза и глотка). Ch.trachomatis могут обнаруживаться в синовиальной жидкости. Для женщин хламидийная инфекция представляет наибольшую угрозу из-за слабо выраженной симптоматики и связанными с этим поздней диагностикой и несвоевременным назначением лечения. Ch.trachomatis может являться одной из причин развития вторичного бесплодия у женщин. Показано, что выделяемый хламидиями при хроническом течении заболевания белок теплового шока, сходный по своему аминокислотному составу с человеческим, способен вызывать аутоиммунные процессы в области органов малого таза и развитие бесплодия. Кроме того, Ch.trachomatis может привести к появлению антиспермальных антител, что является еще одной причиной бесплодия. У новорожденных от матерей, больных урогенитальным хламидиозом, может развиваться хламидийный конъюнктивит, уретрит, вульвовагинит, артрит и поражения других органов. Гонорея – инфекционное заболевание, передаваемое половым путем, возбудителем которого является гонококк (Neisseria gonorrhoeae). В большинстве случаев заражение происходит при половом контакте. Как правило, источником заражения бывают женщины, т.к. у них заболевание может протекать бессимптомно и трудно диагностируется. Бытовой способ заражения заражение (через белье, полотенце, мочалку, посуду, воду в бассейне) встречается крайне редко, т.к. гонококковая инфекция не может существовать вне организма человека и, кроме того, бытовой способ заражения не дает возможности необходимому количеству гонококков попасть в организм. Все половые партнеры больного гонореей должны пройти обследование, а в случае необходимости, и лечение. Отсутствие каких-либо симптомов венерической болезни еще не означает, что ее нет. Подтвердить отсутствие гонококковой инфекции можно только лабораторно. Без соответствующего лечения возможны серьезные поражения органов малого таза. Заражение новорожденного возможно от больной матери в процессе родов. У детей, зараженных во время родов, гонококком поражаются глаза, что может приводить к слепоте. Трихомониаз – заболевание мочеполового тракта, возбудителем которого является трихомонада (Trichomonas vaginalis). В последнее время трихомониаз получил широкое распространение. Чаще всего им заболевают женщины детородного возраста от 16 до 35 лет. Большой процент больных составляют лица, страдающие другими венерическими заболеваниями и часто меняющие половых партнеров. Заражение трихомониазом происходит в основном половым путем, бытовым путем заразиться практически невозможно. Однако в сперме, моче и воде возбудитель остается жизнеспособным в течение 24 часов. У больных или у тех, кто перенес эту инфекцию, вырабатываются сывороточные и секреторные антитела, которые указывают на возбудителя, но иммунитета на трихомонадную инфекцию не развивается. Диагностика трихомониаза осуществляется на основании клинических признаков и лабораторных исследований. Для получения более точного результата применяется сразу несколько методов, а материал для изучения берется из различных очагов воспаления. ^ . Герпетическое поражение половых органов является одним из наиболее распространенных заболеваний в сфере клинической вирусологии. Вирус герпеса I типа практически идентичен вирусу герпеса II типа. Разница между ними заключается в строении поверхностных белков – гликопротеидов (gC, gG). Вирусы герпеса человека передаются при контакте через кожу, слизистые оболочки, гениталии, глаза и легкие. Вирус простого герпеса I типа обычно вызывает поражения, локализованные в верхней части тела (губы, лицо, руки, туловище). ВПГ-II поражает, как правило, область гениталий. Однако в последние годы многие клиницисты наблюдают стирание границ в отношении анатомического тропизма вирусов, что проявляется в обнаружении ВПГ-II при поражении слизистых полости рта и ВПГ-I при поражении гениталий. Генитальный герпес характеризуется рецидивирующим течением и невозможностью полного исцеления. Клинически проявляющийся у матери генитальный герпес является источником инфицирования плода во время родов и вызывает развитие неонатального герпеса. Возможен и трансплацентарный путь передачи инфекции. В этом случае развивается генерализованная форма с тяжелыми поражениями не только кожных покровов, но и внутренних органов: печени, селезенки, надпочечников, головного мозга. До недавнего времени большинство методов лабораторной диагностики герпетических инфекций являлись серологическими. Однако эти методы имеют лишь относительную диагностическую ценность и не позволяют с достаточной степенью достоверности установить этиологию той или иной формы болезни. Учитывая, что симптоматика герпеса может быть схожа с симптоматикой других инфекций, передающихся половым путем, одной из главных задач является идентификация заболевания. Материалом для исследования может служить содержимое везикул, взятое из очага поражения, пробы из уретры или цервикального канала, кровь или слюна.
ПЦР используют для сравнения так называемых «генетических отпечатков пальцев». Метод геномной идентификации личности основан на том, что в ДНК человека имеются полиморфные локусы, часто имеющие 8–10 аллелей. Определение набора этих аллелей для нескольких полиморфных локусов (7–15) у конкретного индивида позволяет получить для него своего рода "геномную карту", характерную только для этого человека. Необходим образец генетического материала с места преступления: кровь, слюна, сперма, волосы и т. п. Его сравнивают с генетическим материалом подозреваемого. Достаточно совсем малого количества ДНК, теоретически – одной копии. ДНК расщепляют на фрагменты, затем амплифицируют с помощью ПЦР. Фрагменты разделяют с помощью гель-электрофореза. Полученную картину расположения полос ДНК и называют генетическим отпечатком пальцев (англ. genetic fingerprint). Этот прием используется при анализе экологических проблем, когда требуется знать точный характер родственных связей в популяции. Например, использование генетического фингерпринта может позволить оценить число основателей достаточно молодой популяции. Благодаря этому приему стало возможно исследовать характер взаимоотношений между поколениями: происходит ли преимущественно конкуренция между предками и их прямыми потомками, или наоборот, усиленное расселение на далекие расстояния делают такую конкуренцию менее вероятной. Тот же метод можно применить, слегка модифицировав его, для установления эволюционного родства среди организмов.
В генотипе каждого ребенка присутствуют аллели, унаследованные от биологических родителей. В основе метода геномной идентификации личности лежит изучение аллелей, уникально наследуемых ребенком от биологических родителей (ряд не сцепленных между собой полиморфных локусов, представленные в геноме человека дискретным числом тандемно повторяющихся единиц ДНК-последовательности VNTR, Variable Number of Tandem Repeat). У каждого человека клетки крови и различных тканей (костей, слюны, кожи, зубов, спермы и т.д.) содержат абсолютно одинаковую ДНК, которая остается постоянной на протяжении всей жизни, не подвергаясь изменениям. При проведении полимеразной цепной реакции (ПЦР) по исходной матрице ДНК происходит высокоспецифичная амплификация аллелей исследуемых локусов. Электрофоретическое разделение амплифицированных фрагментов ДНК позволяет идентифицировать аллели полиморфных локусов. (Рис. 7)  Рис. 7. Результаты электрофореза ДНК-фрагментов, амплифицированных с помощью ПЦР. (1) – отец, (2) – ребенок, (3) – мать. Ребенок унаследовал некоторые генетические особенности родителей Только результат анализа ДНК позволяет окончательно дать заключение о достоверности отцовства. Точность данного метода определяется характером и количеством анализируемых полиморфных локусов.
Известно, что большинство лекарств действуют не на всех пациентов, для которых они предназначены, а лишь на 30–70 % от их числа. Кроме того, многие лекарства оказываются токсичными или аллергенными для части пациентов. Причины этого – отчасти в индивидуальных различиях в восприимчивости и метаболизме лекарств и их производных. Персонализация применения лекарственных средств на основе генетических исследований является наиболее перспективным направлением в молекулярной биологии. В будущем индивидуальную генетическую информацию будут использовать при подборе оптимальных профилактических мер и методов лечения и принятии других важных решений, касающихся состояния здоровья человека. Изучением влияния генетических особенностей на развитие фармакологического ответа у пациентов при применении тех или иных лекарственных средств занимается раздел клинической фармакологии, называемый клинической фармакогенетикой. Клиническая фармакогенетика активно развивается и уже вплотную подошла к внедрению в реальную клиническую практику, в т.ч. в России. В США одобрено для применения несколько фармакогенетических тестов:
Ряд компаний занимается разработкой препаратов, действующих с учетом половых и расовых различий. Примером такого является аспирин, который предотвращает инфаркт миокарда исключительно у мужчин. Разрабатывается препарат для лечения рака легких, который оказывает более выраженное влияние на женщин. Существует препарат, предназначенный для лечения людей определенной расы. Препарат BiDil применяют для лечения сердечной недостаточности у пациентов с черным цветом кожи.
Клонирование генов – используется, в частности, для исследования генов, вызывающих наследственные болезни. В результате генно-инженерных манипуляций можно получить большое количество продукта данного гена. ПЦР используется для того, чтобы амплифицировать кДНК, которую затем вставляют в вектор – фрагмент ДНК, переносящий чужеродный ген в тот же самый или другой, удобный для выращивания, организм. В качестве векторов используют, например, плазмиды или вирусную ДНК. (Рис. 8).Вставку генов в чужеродный организм обычно используют для получения продукта этого гена – РНК или белка. Таким образом, в промышленных количествах получают многие белки для использования в медицине, сельском хозяйстве и др.  Рис. 8. Клонирование гена с использованием плазмиды. (1) – хромосомная ДНК организма A; (2) – ПЦР; (3 ) – множество копий гена организма А; (4) – вставка гена в плазмиду; (5) – плазмида с геном организма А; (6) – введение плазмиды в организм В; (7) – умножение количества копий гена организма А в организме В. Молекулярное клонирование явилось движущей силой биотехнологической революции. Применение этого метода сделало возможным идентификацию, локализацию и описание генов, создание генетических карт и секвенирование целых геномов, проведение параллелей между генами и характеристиками организма и определение молекулярных основ этих характеристик. Примерами использования этого подхода является идентификация генов муковисцидоза, болезни Хантингтона и нейрофиброматоза и др. В последнее время активно развиваются ДНК-технологии, которые позволяют не только определять признак, но и одновременно определять точечные мутации или полиморфизм в известных участках генома, быстро получать разнообразную информацию о геноме, экспрессии и мутациях генов, используя большое количество олигонуклеотидных проб в ДНК-чипе. Эти технологии предоставляют большую информацию исследователям и врачам, что, несомненно, важно для диагностики и лечения заболевания.
До недавнего времени диагностика и прогноз в онкологии основывались в основном на оценке косвенных показателей, позволяющих составлять лишь наиболее общую классификацию гистологических и морфологических подтипов. Одновременный анализ экспрессии и характеристика множества генов открывает беспрецедентные возможности формирования молекулярного портрета опухоли, благодаря развитию технологии биологических микрочипов. Микрочипы представляют бесценную информацию о патогенезе заболевания, его прогрессии, восприимчивости к терапии. Получаемый при этом массив информации может стать основой для уточнения классификации опухолей, совершенствования ранней диагностики и разработки инновационных подходов к терапии рака.
Проблема вирусной безопасности препаратов донорской крови приобретает особую актуальность в связи с эпидемической ситуацией, сложившейся в отношении вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции. Вероятность вирусной контаминации многих сотен литров плазмы в результате попадания одной или нескольких доз плазмы от доноров в серонегативном периоде становится весьма значительной. Инкубационный период острого гепатита С длится от 6 до 12 и более недель. Время появления anti-HCV различно: в одних случаях – через 2–4 недель после начала гепатита, в других – через месяцы после повышения уровня аминотрансфераз. У ряда больных с самоограничивающимся течением инфекции anti-HCV никогда не появляются, возможно, вследствие низкой концентрации циркулирующих вирусных антигенов. При этом в сыворотке у них выявляется HCV РНК методом ПЦР. У больных с посттрансфузионным отсутствием РНК HCV кратковременное выявление anti-HCV непосредственно после трансфузии может быть обусловлено пассивным переносом anti-HCV от донора. Выявление HCV РНК с помощью ПЦР может подтвердить наличие виремии при отрицательных результатах исследования anti-HCV методом ИФА. HCV РНК появляется в крови гораздо раньше других маркеров, и обнаружить ее можно через несколько дней после инфицирования. В большинстве развитых европейских стран, с 1997 года в Нидерландах и Австралии, на известной фирме «ИММУНО», введено дополнительное генотестирование всех пулов плазмы и продуктов ее переработки. Все препараты, получаемые из этой плазмы, имеют сертификат «ПЦР-качество». Генотестирование пулов плазмы и продуктов ее переработки проводится не взамен ИФА, а параллельно. Возможность генотестирования плазмы крови на вирусы не одного донора, а минипула, в котором объединены аликвоты плазмы от нескольких десятков или сотен доноров, доказана многими крупными банками крови Европы. Такое дополнительное генотестирование серонегативной крови в минипулах значительно снижает затраты, ускоряет получение результатов и реально увеличивает вирусную безопасность донорской крови и ее компонентов. При использовании крови и препаратов из нее для переливания новорожденным, больным СПИДом, лицам с пересаженными органами, получающим иммунодепрессивную терапию, необходим дополнительный контроль донорской крови на вирусы герпеса и цитомегалии. Наиболее эффективным методом анализа крови на присутствие этих возбудителей является метод ПЦР. Клиническое значение наиболее актуальных ПЦР исследований, которые выполняются в Иркутском диагностическом центре, а также правила взятия материала для этих исследований более подробно представлены в Приложении. |
отлично
1
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям