Методические указания к практическим занятиям студентов II курса министерство здравоохранения украины
|
|
Скачать 0.57 Mb.
|
1 2
|
Модуль 3 Физиология висцеральных систем Физиология системы крови Методические указания к практическим занятиям студентов II курса  МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ Харьковский национальный медицинский университет Модуль 3 Физиология висцеральных систем Физиология системы крови Методические указания к практическим занятиям студентов 2 курса Утверждено ученым советом ХНМУ Протокол №13 от 21.12.2006г. Харьков ХНМУ 2008 г.  Физиология системы крови: Методические указания к практическим занятиям студентов 2 курса / Сост. В.Г. Самохвалов, Н.И. Пандикидис, Л.В. Чернобай, Л.А. Жубрикова, В.А. Шедания, Л.П. Бредихина Составители: В.Г. Самохвалов, Н.И. Пандикидис Л.В. Чернобай Л.А. Жубрикова В.А. Шедания Л.П. Бредихина Практическое занятие 1 Тема. Система крови. Исследование физико-химических свойств крови. Теоретические вопросы. Понятие о системе крови. Основные функции крови. Состав и объем крови у человека. Гематокритный показатель. Основные физиологические константы крови, механизмы их регуляции. Плазма, ее состав. Роль белков плазмы. Осмотическое и онкотическое давление. Регуляция постоянства осмотического давления. Кислотно – основное состояние крови, роль буферных систем в регуляции его постоянства. Гемолиз, его виды. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ); факторы, которые влияют на нее, понятие об эритроне, как физиологической системе; регуляция количества эритроцитов крови. Взятие крови для исследования. Для исследования кровь берут обычно из четвертого пальца левой руки (четвертый палец имеет самостоятельное синовиальное влагалище, что исключает возможность распространения инфекций); прокол делают на боковой поверхности пальца, где больше развита капиллярная сеть, и меньше нервных окончаний, поэтому уменьшается болевое воздействие. Забор крови проводят утром, натощак. Кожу пальца тщательно протирают ватным шариком , смоченным спиртом, делают укол стерильным копьем до упора. Первую выступившую каплю крови вытирают, она содержит случайные примеси и лимфу, из следующих капель, выступающих из места укола при легком надавливании, быстро набирают необходимое количество крови. Если из крови надо получить плазму, то заранее в пробирку для центрифугирования помещают вещества, препятствующие свертыванию крови (щавелевокислый калий, натрий, лимоннокислый натрий), тщательно перемешивают с кровью и центрифугируют. Для получения сыворотки из крови ее помещают в термостат при температуре 370С на полчаса – час, затем отделяют сыворотку от сгустка крови тонкой стеклянной палочкой. Общий клинический анализ крови. Анализ крови является одним из самых распространенных лабораторных исследований. Наиболее широко применяется общий клинический анализ, включающий исследования концентрации гемоглобина, подсчет числа эритроцитов, вычисление цветового показателя крови, подсчет числа лейкоцитов, исследование соотношения различных форм лейкоцитов и определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ ), (Табл.1). ^ Таблица1
^ -оценить функциональное состояние организма; -установить диагноз; -оценить тяжесть, стадию острого заболевания и его остроту; -составить прогноз течения патологического процесса; -контролировать эффективность применяемого лечения; Лабораторная работа 1 Определение объемного соотношения плазмы и форменных элементов (гематокритный показатель). Гематокритный показатель(ГП), или гематокрит , дает представление о соотношении между объемами плазмы и форменных элементов крови , главным образом , эритроцитов . Принято гематокритный показатель выражать как объем эритроцитов в процентах от общего объема крови. ^ Ознакомиться с принципом определения гематокрита. Сделать расчет гематокритной величины . Принцип определения. В качестве одного из методов определения гематокритного показателя применяют унифицированный метод микроцентрифугирования крови определенное время при постоянном числе оборотов центрифуги с последующим определением результата по специальной шкале. ^ Предварительно обработанный антикоагулянтом и высушенный капилляр заполняют кровью. Укупоривают капилляр и помещают в центрифугу, центрифугируют пять минут при 8000 обор.\мин.. Затем по отсчетной шкале определяют гематокрит . ^ Показатель гематокрита дает представление о гемоконцетрационных сдвигах. Отмечается снижение ГП, как правило, при анемии; выраженное повышение характерно для эритемии ,менее резкое увеличение наблюдается при симптоматических эритроцитозах. Гематокритный показатель используют для расчета показателей , отражающих различные характеристики эритроцитов: средний объем, средняя концентрация гемоглобина, а также для отдельных биохимических показателей. ^ Лабораторная работа 2 Изучение различных видов гемолиза. Гемолизом называется разрушение эритроцитов с выходом гемоглобина в плазму крови . ^ Выявление повреждающего действия различных веществ на структуру эритроцитов. Изучение механизмов гемолиза. Принцип определения. Качественное определение проявлений гемолиза. Выявления разных видов гемолиза . ^ В штатив ставят 4 пробирки , в каждую из которых наливают по 3 мл соответственно: физиологического раствора, дистиллированной воды, 0,1 раствора соляной кислоты , эфира или хлороформа; в 5–ую пробирку помещают цитратную кровь. Ее подготавливают, смешивая кровь с 5% раствором цитрата натрия, соотношение крови и реактива 4:1 . Во все 4 пробирки вносят пипеткой по 2 капли крови из 5-ой пробирки. Оставшуюся в 5-ой пробирки кровь помещают на 1 час в морозильную камеру холодильника, затем оттаивают ее в горячей воде . ^ Гемолизированная кровь, не выполняя своей основной дыхательная функции, оказывает вредное воздействие на организм. Выход гемоглобина в плазму при гемолизе эритроцитов приводит к изменению: а ) вязкости крови, б) онкотического давления плазмы крови ; в) нарушению кровоснабжения. ^ Лабораторная работа 3 Определение осмотической стойкости( резистентности )эритроцитов. Под осмотической стойкостью (резистентностью) эритроцитов подразумевается их способность противостоять понижающемуся осмотическому давлению. При различных заболеваниях резистентность может меняться, поэтому определение ее границ имеет диагностическое значение. ^ Определение изменений состояния эритроцитов при действии разного осмотического давления . Определение границ нормальной осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ) человека. ^ Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в гипотонических растворах. Ход определения. Чтобы определить ОРЭ в серию пробирок помещают по 3 мл растворов натрия хлорида, убывающей концентрации : 1- 0,9% , 2 - 0,85% ,3 – 0,80% и т.д. до 0,1% раствора. Затем в каждую из пробирок добавляют по 0,02 мл цитратной крови и оставляют при комнатной температуре . В течение первого часа отмечается состояние жидкостей . Окончательный результат учитывается через 2 часа . При этом определяют минимальную и максимальную ОРЭ . Минимальная граница ОРЭ – это такая концентрация (в %) натрия хлорида , при которой уже начинается гемолиз эритроцитов: жидкость в пробирке приобретает легкое окрашивание . В норме минимальная граница ОРЭ составляет 0,48 – 0,42 % .Максимальной границей ОРЭ считается такая концентрация (в %) натрия хлорида, при которой гемолизируются все эритроциты. В норме максимальная ОРЭ составляет 0,34 – 0,32 %. ^ Исследования проводят при подозрении на гемолитическую врожденную анемию или острую гемолитическую приобретенную анемию . В этих случаях наблюдается снижение ОРЭ , т.е. проявление гемолиза при более высокой концентрации (0,70-0,75%) хлорида натрия . Повышение ОРЭ характерно для гемоглобинопатий. ^ Лабораторная работа 4 Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Исследование СОЭ является одним из самых распространенных в лабораторной практике и относится к общему клиническому анализу крови. ^ Изучить метод определения СОЭ Т.П. Панченкова. Определить СОЭ в крови. Принцип определения. Смесь крови с цитратом натрия при стоянии разделяется на 2 слоя: нижний – форменные элементы ; верхний – плазма . Мерой СОЭ является величина столбика плазмы , выраженная в мм\ч. ^ Для определения СОЭ по методу Т.П. Панченкова применяют прибор Панченкова. Прибор представляет собой штатив , в котором в вертикальном положении размещаются специальные капилляры . Капилляры градуированы в миллиметрах и имеют отметки: -“О” находится на расстоянии 100 мм от нижнего края; “Р”- реактив , на уровне 50 мм. На уровне “О” имеется также отметка “К” – кровь. Капилляры промывают 5% раствором цитрата натрия. Затем набирают цитрат до отметки «Р» и помещают раствор в тигелек. Делают прокол пальца скарификатором, в капилляры двукратно набирают кровь до отметки “К” и помещают ее в тигелек с цитратом. Порции крови и цитрата смешивают , полученную смесь (соотношение крови и реактива составляет 4:1) набирают в капилляр до отметки “О” ,устанавливают капилляр в штатив строго вертикально на один час. Через час определяют сколько составляет высота вертикального столбика плазмы в капилляре. ^ Увеличение СОЭ наблюдается при воспалительных процессах, интоксикациях, острых и хронических инфекциях, после кровопотери, оперативных вмешательств, опухолях. Замедление СОЭ наблюдается при эритремии, симптоматических эритроцитозах. Анализ результатов и выводы. Контрольные вопросы
^ Тема. Физиология эритроцитов Теоретические вопросы Эритроциты, их строение, количество, функции. Гемоглобин, его структура, особенности, виды, соединения. Количество гемоглобина в крови. Критерии насыщения эритроцитов гемоглобином: средняя концентрация, цветовой показатель. ^ Определение количества эритроцитов в крови. Эритроциты – наиболее многочисленные форменные элементы крови. Их основное содержание составляет гемоглобин. ^ . Ознакомиться с методом подсчета количества эритроцитов в счетной камере и определить их количество в крови. Принцип определения. В качестве одного из унифицированных методов используют подсчет эритроцитов в счетной камере. Подсчет количества эритроцитов проводят под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной камеры и пересчитывают на 1л крови, исходя из объема квадратов и разведения крови. ^ Разводят кровь в 200 раз. Для этого в сухую пробирку отмеривают 4мл 3% раствора хлористого натрия. Кровь набирают капилляром (0.02 мл) и переносят в пробирку с раствором хлористого натрия. Пробирку осторожно встряхивают для перемешивания содержимого. Для подсчета эритроцитов берут каплю жидкости из пробирки и вносят под покровное стекло счетной камеры. Заполненную камеру помещают под микроскоп и с помощью малого увеличения производят подсчет эритроцитов в 5 больших квадратах сетки, разделенных в свою очередь на 16 малых, т.е, в 80 малых квадратах сетки (рис 1).  Рис. 1. Счетная камера Горяева Рекомендуется считать клетки в квадратах сетки, расположенных по диагонали. Для того, чтобы одни и те же эритроциты, лежащие на линиях, не попали в счет, принято для каждого квадрата, кроме элементов лежащих внутри квадрата считать элементы, расположенные на двух линиях (например, на левой и верхней). Порядок просмотра малых квадратов в большом квадрате – по зигзагу. Правило Егорова (рис 2).  Рис. 2. Подсчет эритроцитов в сетке по правилу Егорова. Расчет количества эритроцитов. Допустим, в 80 квадратиках определено количество эритроцитов равное Э, отсюда в одном квадратике их Э/80. Площадь малого квадратика:  = мм2. Высота слоя жидкости в камере 1/10мм, следовательно, объем квадратика равен 1/400*1/10=1/4000 мм3. В одном кубическом миллиметре 4000 таких квадратиков. Отсюда, чтобы узнать, сколько эритроцитов содержится в 1 мм3 крови, следует Э/80 умножить на 4000. Расчет количества эритроцитов в 1 литре крови, исходя из разведения крови, числа сосчитанных квадратиков, производят по формуле: ; гдех – число эритроцитов в 1л крови; Э – сумма эритроцитов, сосчитанных в 80 малых квадратиках; n – степень разведения(200). Клинико-физиологическое значение. Снижение числа эритроцитов в крови является одним из основных критериев анемии. Степень эритропении может варьировать при разных формах малокровия. Повышение количества эритроцитов – эритроцитоз, может быть обусловлен многими причинами. Абсолютные эритроцитозы сопутствуют обструктивным заболеваниям легких, порокам сердца, заболеваниям ЦНС. Относительные эритроцитозы связаны с нарушением гемоконцентрации и характеризуются нормальным объемом циркулирующих эритроцитов при снижении массы циркулирующей крови и массы циркулирующей плазмы. ^ Лабораторная работа 2 Определение количества гемоглобина в крови. Гемоглобин – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеинам и обеспечивающий ткани кислородом. ^ Ознакомиться с колориметрическим методом определения гемоглобина в крови. Определить количество гемоглобина в крови. Принцип определения. Присоединение к гему гемоглобина различных химических групп приводит к изменению окраски, на этом основано определение концентрации гемоглобина в крови. Наиболее простым и распространенным методом является колориметрия солянокислого гематина, на чем основан метод Сали. ^ . Количество гемоглобина в крови колориметрическим методом определяют с помощью гемометра Сали. Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штативе находиться три пробирки; две крайние заполнены и содержат стандартный раствор солянокислого гематина, средняя пробирка открыта и градуирована. В среднюю пробирку помещают 0,1 N раствор HCl до нижней кольцевой метки. Затем делают забор крови из пальца обычным способом с помощью стеклянного капилляра, который приложен к гемометру Сали (20мм3). Помещают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался не окрашенным. Не вынимая капилляр из пробирки, ополаскивают его соляной кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пробирки перемешивают, осторожно ударяя пальцем по дну пробирки, и оставляют стоять на 5-10 минут. За это время происходит образование солянокислого гематина. Если исследуемый раствор путем растворения довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в таких растворах будет одинаковой, количества веществ будет соотноситься как их объемы. Зная количество вещества в стандартном растворе (16,7г%, что принято за 100% гемоглобина), можно вычислить его содержание в исследуемом растворе. Поэтому к исследуемому раствору добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет этого раствора не будет одинаковым с цветом стандартного раствора. Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм- процентах. ^ . Снижение концентрации гемоглобина в крови является основным симптомом при острой кровопотере или анемии: гипопластической, гемолитической, В12 – дефицитной. Повышение концентрации гемоглобина в крови может наблюдаться при миелопролиферативных заболеваниях и при симпгоматических эритроцитозах. Вычислить относительное процентное содержание гемоглобина в исследуемой крови можно следующим образом. Допустим в крови – Аг% 16,7г% - 100% Аг % - х х=(100*А)/16,7, где х – относительное содержание гемоглобина. ^ Г  емоглобин взаимодействует с кислородом, образуя оксигемоглобин:Hb+O2 ↔HbO2 Окись углерода обладает большим сродством к гемоглобину, чем кислород: HbO2+CO↔HbCO+O2 Этим объясняется высокая токсичность окиси углерода. Тем не менее, поскольку эта реакция обратима, имеется возможность вытеснить СО, поместив больного в атмосферу, обогащенную кислородом. У здоровых людей гемоглобин в крови находиться, главным образом, в виде оксигемоглобина, карбогемоглобина и в небольшом количестве - метгемоглобина, карбоксигемоглобина. Гемоглобин и его производные представляют собой окрашенные соединения и обладают характерными спектрами поглощения в видимой области. (Рис. 3.)  Рис. 3. Спектр гемоглобина и его производных При спектральном анализе HbO2 имеет 2 полосы поглощения в зеленой (578) и желтой области (540). Полосы поглощения HbCO расположены сходным образом, но несколько сдвинуты в коротковолновую область. Hb дает одну широкую полосу поглощения (полосу Стокса – 554). Метгемоглобин (Мет Hb) дает полосу поглощения в красной области (637). ^ Лабораторная работа 3 Индексы эритроцитов. В клинической практике используют различные расчетные характеристики, отражающие физико-химические свойства эритроцитов. ^ Индекс отражает относительное содержание гемоглобина в эритроцитах. Расчитывают ЦП вычислением отношения частных, полученных от деления количества гемоглобина на количество эритроцитов в норме и в исследуемой крови по следующей формуле:  где - найденное количество гемоглобина - нормальное количество гемоглобина - найденное количество эритроцитов - нормальное количество эритроцитов.Если принять, что в норме в 100 мл крови со держится 16,7 % гемоглобина и 5 000 000 эрит роцитов в 1 мкл крови, то ЦП рассчитывают по формуле:  Цветовой показатель =  ;при сокращении:  В практической работе удобно пользоваться для подсчета цветового показателя пересчетными таблицами, а также номограммами. У здоровых цветовой показатель находится в пределах 0,85-1,05 ^ По величине цветового показателя принято делить анемии на гипохромные, нормохромные и гиперхромные. Гипохромные анемии (с цветовым показателем менее 0,85) широко распространены и наблюдаются прежде всего при дефиците железа, вызванном различными причинами. Особенно выраженной гипохромией (0,6—0,5 и ниже) характеризуются железодефицитные анемии, обусловленные хроническими кровопотерями.Менее выраженная гипохромия эритроцитов (0,7—0,8) наблюдается при железодефицитной анемии беременных, при инфекциях, опухолях. Повышение цветового показателя — гиперхромия — является характерным признаком В12-дефицитных и фолиеводефицитных анемий. Особенно выражена гиперхромия эритроцитов (1,2—1,3) при рецидиве анемии Аддисона — Бирмера. Нормохромные анемии наблюдаются при некоторых гемолитических формах малокровия, острых кровопотерях, лейкозах, сопутствуют циррозу печени. ^ . Показатель отражает абсолютное содержание гемоглобина в одном эритроците в пикограммах (пг). Определяют путем деления концентрации гемоглобина в 1 мкл крови на число эритроцитов в том же объеме. Пример: концентрация гемоглобина в крови равна 12 г/100 мл, количество эритроцитов в 1 мкл крови — 4 000 000 . 12 г % = 12000 мг/100 мл=12 мг в 1 мкл = 120000000 пг(  мг).Среднее содержание гемоглобина =  пг, т.е практически надо содержание гемоглобина в г/100 мл умножить на 10 и разделить на число миллионов эритроцитов в крови. Расчет показателя можно произвести по номограмме (по Мазону). В современных гематологических автоматах этот показатель (МСН) определяют расчетным путем. Нормальные величины составляют 24—33 пг.^ Снижение, отражает гипохромию и наблюдается при железодефицитных анемиях, повышение имеет место при макроцитарных и, особенно, мегалоцитарных анемиях. ^ Показатель отражает степень насыщения эритроцита гемоглобином в процентах. Вычисляют путем деления концентрации гемоглобина в г/100 мл на гематокритную величину и умножения на 100. Пример: концентрация гемоглобина 12 г/100 мл, гематокрит 40 об. %. Средняя концентрация гемоглобина (МСНС)2=  Можно легко рассчитать, используя номограмму по Мазону (рис.4). Показатель включен в программу современных гематологических автоматов. Нормальные величины МСНС колеблется в пределах 30—38 %. Величина наиболее константная, насыщения выше 38 % не бывает. ^ Снижение показателя отражает абсолютную гипохромию и является характерным для железодефицитных анемий. Чувствительность этого индекса эритроцитов при железодефицитных анемиях составляет 85 %. Снижение показателя выявлено так же при макроцитарных и особенно мегалоцитарных анемиях, когда объем эритроцитов, увеличен непропорционально более значительно по сравнению с увеличением насыщения эритроцитов гемоглобином. 1. МСН — Mean Corpuscular Hemoglobin. 2. МСНС — Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration. 3. MCV — Mean corpusculare Volume.  Рис. 4. Номограмма для вычисления индексов эритроцитов по Мазону Средний объем эритроцитов. Показатель является важным при диагностике различных форм малокровия. Вычисляют путем деления гематокритной величины на общее количество эритроцитов в крови. Средний объем эритроцитов (MCV)3 выражают в кубических микронах или кубических микрометрах. Пример: гематокрит — 40 об.% (или 0,40 мм3, или 400 000 000 мкм3); эритроциты 4 500 000 в 1 мкл;  Практически для вычисления показателя надо величину гематокрита разделить на число эритроцитов в миллионах и умножить на 10. Можно расчет вести по номограмме. В программе современных гематологических комплексов и автоматов этот параметр определяют либо кондуктометрически (отечественный гематологический комплекс КГ-2), либо расчетным путем. Нормальные величины составляют 75— 95 мкм3. ^ . Повышение показателя наблюдается при макроцитарных и мегалоцитарных анемиях, особо высокое значение отмечаеться при В12 – дефицитных анемиях. Снижение показателя отмечается при микроцитарных анемиях. Анализ результатов и выводы Контрольные вопросы 1. Сколько эритроцитов в 1л крови человека? 2. Каковы функции эритроцитов? 3. Какие особенности эритроцитов связаны с их функцией? 4. Каковы физиологические колебания количества эритроцитов? 5. Что такое эритрон? 6. Каково устройство счетной камеры и сетки Горяева? 7. Чем разводят кровь для подсчета эритроцитов, почему? 8. Во сколько раз разводят кровь для подсчета эритроцитов? 9. Сколько и каких квадратов сетки Горяева используют для подсчета эритроцитов? 10. В чем суть правила Егорова для подсчета форменных элементов крови? 11. Каково физиологическое значение гемоглобина в организме? 12. Какова структура гемоглобина, роль гема, глобина? 13. Как меняются формы гемоглобина в процессе онтогенеза, каковы особенности фетального гемоглобина? 14. Какие существуют производные гемоглобина? В чем отличие оксигемоглобина, метгемоглобина, карбгемоглобина, карбоксигемоглобина? 15. Каково нормальное содержание гемоглобина в крови (в г/л)? 16. Какие существуют количественные и качественные методы оценки гемоглобина в крови? 17. Каков характер спектров поглощения гемоглобина и его производных? 18. О чем свидетельствует цветной показатель крови? Как он рассчитывается? ^ Тема. Защитные функции крови. Физиология лейкоцитов. Группы крови. Теоретические вопросы. Лейкоциты, их количество, виды. Понятия о лейкоцитозе и лейкопении. Лейкоцитарная формула. Функции разных видов лейкоцитов. Регуляция количества лейкоцитов. Понятие об иммунитете, его виды. Группы крови: система АВ0, СДЕ и др. Методы определения групп крови. Физиологические основы переливания крови. Кровезаменители. ^ Подсчет количества лейкоцитов в крови. Лейкоциты – высокоспециализированные клетки, обладающие различными защитными функциями: участвуют в клеточном и гуморальном иммунитете, реализуют антимикробные, антитоксические, антителобразующие и другие важнейшие компоненты иммунологических реакций. Подсчет количества лейкоцитов входит в состав общего клинического анализа крови. ^ . Ознакомиться с методом подсчета количества лейкоцитов в счетной камере. Определить количество лейкоцитов в крови. Принцип определения. Один из методов подсчета лейкоцитов – это унифицированный метод подсчета в счетной камере. Подсчет количества лейкоцитов проводят под микроскопом в определенном количестве квадратов в счетной камере и пересчитывают на 1л крови, исходя из объемов квадратов и разведения крови. ^ . Разводят кровь в 20 раз. Для этого в сухую пробирку наливают 0,4 мл раствора 5% раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (для окраски ядер лейкоцитов). Кровь для анализа набирают из пальца в количестве 0,02 мл и осторожно помещают ее на дно пробирки с уксусной кислотой, промывая этим же раствором из верхнего слоя капилляр; тщательно перемешивают содержимое пробирки. Заполняют счетную камеру разведенной кровью. В горизонтальном положении камеру помещают под микроскоп и подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах с малым увеличением. Для большей точности счет лейкоцитов проводят по всей сетке в больших квадратах, начиная от верхнего угла сетки. Считают клетки, расположенные внутри квадрата и лежащие на любых двух сторонах. ^ . Его проводят, исходя из разведения крови(20), числа сосчитанных квадратов(100) и объема одного большого квадрата (1/250мкл, так как сторона квадрата 1/5мм, высота 1/10мм).  , гдех – число лейкоцитов в одном литре крови; В – сумма лейкоцитов в 100 больших квадратах; n – степень разведения крови (20). ^ . Увеличение количества лейкоцитов в крови – лейкоцитоз, уменьшение – лейкопения. О лейкоцитозе свидетельствует содержание лейкоцитов выше 9*109/л крови, о лейкопении – менее 4*109/л. Лейкоцитоз и ле йкопения могут иметь абсолютный или относительный характер. Лейкоцитоз наблюдается при воспалительных процессах, бактериальных инфекциях, интоксикациях, шоке, острых кровопотерях, коматозном состоянии, гемолитическом кризе, аллергических реакциях. Лейкопения наблюдается при гипотонических состояния, снижении общего тонуса, голодании. Лейкопения может быть следствием угнетающего действия некоторых токсинов на созревание и выселение лейкоцитов из кроветворных органов, что наблюдается при некоторых инфекционных заболеваниях – гриппе, кори, брюшном тифе, краснухе, инфекционном гепатите. Лейкопения может возникать в результате действия лекарственных средств – антибиотиков, сульфаниламидов, цитостатических препаратов. ^ Лабораторная работа 2 Определение группы крови человека по системе АВ0 при помощи стандартных сывороток. Деление крови людей на группы по системы АВ0 основано на наличии в эритроцитах человека групповых агглютиногенов (антигенов) А и В и в плазме крови агглютининов (антител) α и β. В зависимости от соотношения агглютиногенов и агглютининов в крови человека различают четыре группы крови системы АВ0. В клинической практике группы крови обозначаются буквенными и одновременно цифровыми символами: 0(I), A(II), B(III), AB(IV). ^ . Ознакомиться с методом определения группы крови по системе АВ0 при помощи стандартных сывороток крови. Определить групповую принадлежность крови человека. ^ . Группы крови определяют при помощи стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины. Ход определения. Группу крови определяют на специальных тарелках или планшетах, которые маркируются. Под обозначением сывороток помещается по одной капле стандартных сывороток I,II,III групп крови (примерно по 0,1мл); пипетки для каждой сыворотки строго индивидуализированы. Затем палец прокалывают скарификатором (допускается брать кровь из мочки уха или из вены) и маленькие капли крови (примерно 0,01мл; соотношение количества стандартной сыворотки и крови должно быть примерно 10:1) переносят в капли сыворотки отдельными стеклянными палочками. Перемешивают кровь с сыворотками до равномерного окрашивания, затем на 1-2 минуты оставляют и снова периодически помешивают в течении 5 минут. Реакция может быть положительной – наличие агглютинации, или отрицательной – отсутствие агглютинации. При положительной реакции в капле сыворотка полностью или почти полностью обесцвечивается, на этом фоне различаются комочки из склеенных эритроцитов. При отрицательной реакции капля сохраняет равномерный красный цвет без признаков агглютинации. ^ Группа крови устанавливается в зависимости от наличия агглютинации.
^ Определение групп крови по системе АВ0 с применением циликлонов анти-А и анти-В. Цепь работы. Определить группу крови по системе АВ0 с помощью моноклональных тест-реагентов анти-А и анти-В. ^ . Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови человека по системе АВ0. Определение группы крови включает выявление антигенов А и В в эритроцитах. Цоликлоны анти-А и анти-В содержат специфические иммунноглобулины класса М, направленные против группоспецифичных антигенов А и В человека ^ На белую фарфоровую тарелку нанести по одной капле тест-реагентов анти-А и анти-В под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови в соотношении 10:1. Смешивают кровь с реагентами. Наблюдение за ходом реакции проводят при легком покачивании тарелки в течение 2,5 минут. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья вплоть до одного большого агглютината. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация с тест-реагентами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 3-5 секунд. Наблюдение следует вести 2.5 минуты ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А и В. ^
В случае положительной реакции агглютинации эритроцитов с обоими тест-реагентами анти-А и анти-В необходимо провести дополнительное контрольное исследование данного образца крови с изотоническим раствором хлористого натрия. Для этого смешивают одну каплю изотонического раствора с маленькой каплей исследуемой крови в соотношении 10:1. Повторяют исследование наличия антигенов А и В в этой контрольной капле. При отсутствии агглютинации и в этом случае можно быть уверенным, что кровь принадлежит к группе АВ (IV). Тест-реагенты анти-А окрашены в розовый цвет, а анти В - в голубой. Оценка результатов агглютинации с тест-реагентами анти-А и анти-В (Цоликлоны) представлена в таблице 2, в которую также включены результаты определения агглютининов в сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов. Таблица 2
^ Лабораторная работа 4 Определение групп крови по системе Резус (С,Д,Е). В эритроцитах кроме агглютиногенов А и В может содержаться также агглютиноген Rh-фактор. Кровь, в которой, иметься Rh-фактор, называется положительной. К резус – положительной относиться 85% людей. ^ Выявить в исследуемой крови наличие или отсутствие антигена системы Резус-Д. Принцип определения. Определение наличия агглютиногена Rh-фактора в крови необходимо как и определение группы крови по системе АВ0. Наиболее удобным способом определения Rh-фактора является методика с использованием специфической изоиммунной анти-D сыворотки. ^ . На белую тарелку или планшету наноситься по капле антирезусной и контрольной сыворотки. Прокалывают палец скарификатором, в обе капли вносят кровь испытуемого. Через 5 минут наблюдают результат. ^ Лабораторная работа 5 Определение групп крови по системе Резус(СДЕ) с применением цоликлона анти – Д Цель работы. Выявить в исследуемой крови наличие или отсутствие Д антигена системы Резус (СДЕ) и определить ее резус – принадлежность. ^ . Моноклональные антитела Анти - D СУПЕР предназначены для выявления D – антигена системы. «Резус» в эритроцитах человека. Они применяются взамен или параллельно с изоиммунной анти – Д сывороткой. ^ . Определение Rh Д-антигена производиться в нативной крови, взятой из пальца. На пластину со смачиваемой поверхностью наносят большую каплю тест-реагента анти-Д СУПЕР. Рядом помещают маленькую каплю исследуемой крови (в соотношении 10:1). Смешивают кровь с реагентом. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10 секунд, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 секунд. Результаты реакции следует учитывать через 3 минуты. Пластину после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 секунд, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой реакции агглютинации. ^ . Заключение о присутствии Д- резус антигена в исследуемых эритроцитах делают при наличии реакции агглютинации. Такая кровь является резус – положительной. Отсутствие агглютинации эритроцитов в капле говорит о том, что в исследуемой крови нет антигена Д. Следовательно, такая кровь является резус - отрицательной. Для контроля специфичности тест-реагента в каждую серию исследований необходимо включать опыты со стандартными Д-положительными и Д-отрицательными эритроцитами. ^ В настоящее время переливание крови с учетом групповой принадлежности осуществляется только по принципу одноименной группы. В экстренных ситуациях возможно применение правила Оттенберга, которое основано на подборе крови таким образом, чтобы не допускать совмещение одноименных агглютиногенов донора и агглютининов реципиента(рис. 5.). В этих случаях порция вводимой крови ограничивается количеством 200мл.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1 2
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям