^
Форма и содержание данной инструкции перед введением будет пересматриваться группой технических экспертов
1. Введение:
Когда и кем были составлены инструкции, используемые определения,
дата открытия лаборатории 1 уровня.
Качество
Преданность качеству
Принадлежность к лабораторной сети и программе контроля качества
Обязательство выполнять обязанности лаборатории 1 уровня:
-
Обязанности:
Выполнение процедур стандартным способом
Обязательная отчетность
Обязательное выполнение процедур, связанных с программой контроля качества:
Выполнение внутреннего контроля качества, участие во внешнем контроле качества
Имя ответственного лица за контроль качества
-
Подпись:
Заведующего лабораторией
Заведующего клиническим отделением
Главного врача поликлиника
Гарантия доступности инструкций с дополнениями для всего персонала
3. Область (участок) работы
-
Обязательство лаборатории, выполнение тестов
Название отделения, из которого могут поступать образцы:
Имя и телефон заведующего отделением
Сотрудничающие лаборатории:
Лаборатории, куда могут направлять образцы
Лаборатории, откуда можно получать образцы
Имя и телефон заведующего клиническим отделением, вышеуказанных лабораторий
Организация отправки и получения образцов
4 Персонал и организация
Общее:
Организация: органограмма, описывающая лабораторию, как часть организации здравоохранения
Названия отделений
Количество человек в отделении
Описание внутренней организации ТБ службы, включая ответственных лиц требующееся образование и содержание/задачи/обязанности
2. Имена врачей и участок работы
5. Ресурсы
-
Инструкция, по источникам ресурсов, доступных для ZN микроскопии.
Получены в рамках проекта
Другие.
^
Описание кабинета для сбора мокроты
Имя, функции и образование медсестры, ответственной за сбор мокроты
7. Безопасность
Ежедневный обзор правил безопасности
Гарантия, что весь персонал прошел обучения по мерам безопасности.
Направление к месту, где задокументированы все меры безопасности
^
Описание получения образцов
Когда, где и как хранить образцы
Как избавляться от использованных образцов
Как и где хранить стекла
^
Лицо, ответственное за уход за микроскопами , ежедневно, ежемесячно
10. Лабораторные информационные системы
Описание учета результатов
Требования для квартального отчета
Лицо ответственное за отчетность
11. СОП
Наличия СОП в лаборатории и гарантия ознакомления всего вовлеченного персонала. (Проект СОП представлен в дополнении IV)
^
Инструкции по организации внутреннего контроля; процедур, ответственных, как и где содержать учет
^
Микроскопическое исследование мазка
Использование и уход
^
Формат для СОП:
СОП для киевской лабораторной сети по борьбе с туберкулезом:
^
Название
Исследование мокроты в лабораториях 1 уровня
|
^
|
Подпись уполномоченного лица:
|
KLN: Киевская сеть лабораторий по борьбе с туберкулезом
MS I: Микроскопия на 1 уровне
001/ SOP nr 1
|
^ лаборант и выше
|
Цель
Данные стандартные оперативные процедуры описывают исследование мокроты методом микроскопии в лабораториях 1 уровня лабораторной сети программы борьбы с туберкулезом, в г. Киеве. Большинство описанных процедур представлены в методическом руководстве ВОЗ Лабораторная служба в программах борьбы с туберкулезом II. Адаптация выполнена в тесном сотрудничестве с Группой Управления Лабораторной Сетью. Описанные процедуры также согласованы с Приказом №45.
|
^ Тестирование можно выполнять в периферийных лабораториях, так называемых, лабораториях 1 уровня.
Когда: У большинства пациентов с туберкулезом легких имеются симптомы со стороны органов дыхания, поэтому бактериоскопическое исследование мокроты у людей, обращающихся в медицинские учреждения с подобными симптомами, является наиболее эффективным способом выявления заболевания. Бактериоскопическое исследование мокроты проводится также для оценки эффективности проводимой терапии, и для констатации излечения или неудачи в лечении.
Образцы мокроты будут исследовать, когда пациент обращается с жалобами подозрительными на туберкулез или по результату рентгена. Три образца мокроты, утренний и образец, взятый сразу на месте, будут микроскопически проанализированы для диагностики легочного ТБ. Детали относительно сбора мокроты, будут описываться в разделе Стандартные операционные процедуры (СОП) по работе с мокротой.
|
^ означает нанесение небольшого кол-ва мокроты на микроскопическое стекло, затем жаровая фиксация и окрашивание для микроскопического исследования.
^ термин, использующийся для мокроты, которая подвергалась деконтеминационной обработке (например: кислота, NaOH, хлор, кипячение sodium bicarbonate) для нейтрализации бактерий и пропорционального уменьшения микобактерий, сокращения осадка после центрифугирования. В результате, чем больше осадка исследуется на микроскопическом слайде с меньшим фоном, тем больше снижается ограничение выявления.
Деконтеминация (термин используется в лабораториях, где проводятся культуральные исследования) образца означает нейтрализацию большинства бактерий и некоторых микобактерий (как можно меньше) путем добавления NaOH или серной, чтобы микобактерии могли расти из образцов без зароста другими бактериями.
В случае, когда образец мокроты не используется для посева, можно использовать сильную деконтеминационную процедуру, которая убивает микобактерии, такую как as отбеливающая комбинация гидроокиси (гидрата окиси) натрия. Данная комбинация убивает все микобактерии втечении 15 минут, аналогично методу кипячения, использующемуся в настоящее время.
|
^ :
Лаборант ответственный за приготовление, кодирование, окрашивание и чтение стекол. Врач лаборант проверяет положительные стекла для подтверждения и отчетности и проверяет определенный процент отрицательных стекол для контроля качества.
|
6. Методика
Микобактерия туберкулеза это кислотоустойчивая бактерия, это означает, что они сохраняют первичную окраску даже после обработки сильным кислотным раствором. Образец мокроты наносится на микроскопическое стекло. Присутствие туберкулезных бактерий в мокроте можно увидеть под микроскопом после применения кислотоустойчивого окрашивания методом Циля Нильсена. Окрашивание методом Циля Нильсена состоит из трехэтапной процедуры:
1. Окрашивание с помощью карбол фуксина, который окрашивает стенки клетки организма в красный цвет.
2. Применение обесцвечивающего средства , которое обесцветит все бактерии, кроме кислотоустойчивые микобактерии M. tuberculosis
3. Докрашивание голубым метиленом для обеспечения голубого фона, на котором кислотоустойчивые организмы становятся красными.
Тест можно выполнять прямым или концентрированным методом. ^ это нанесение небольшого кол-ва гнойного материала на микроскопическое стекло, затем жаровая фиксация и окрашивание методом Циля Нильсена.
Для исследования концентрированного образца мокроты, мокрота подвергалась деконтеминационной обработке (например: кислота, NaOH, хлор, Sputofluol, sodium bicarbonate). После добавления деконтеминционной жидкости образец выдерживают 45 мин (седиментация) или центрифугируют предпочтительно на 3000xg, в результате чего поднимается супернатант, а осадок используется для выполнения мазка прямого микроскопического исследования, как описано выше.
Бактерии , содержащиеся в образце мокроты, уничтожаются комбинацией гипохлорит натрия (NaClO) и NaOH. Этим раствором можно нейтрализовать за 15 мин все бактерии, содержащиеся в мокроте (Yassin et al., 2003). Или можно добавить sodium bicarbonate в мокроту и кипятить на протяжении 30 мин. Оба метода позволяют центрифугировать образцы мокроты в обычной центрифуге безопасно.
|
7. Образец
Качественный образец мокроты, содержащий материал из бронхов, с наличием слизистого или слизистогнойного материала. Идеальный объем 3 – 5 ml.
Мокрота должна быть свежей или храниться при 8 ºC втечении одной недели. Образец должен сопровождаться заполненным направлением.
|
^
Передача туберкулеза происходит посредством аэрозолей, которые являются крошечными капельками в воздухе, содержащем M. туберкулеза. Все манипуляции в лаборатории, которые могут привести к формированию аэрозолей, следует выполнять тщательно и контролируемо. Аэрозоли могут формироваться вовремя открытия контейнеров с образцами, центрифугирования, обжигания петель или пипетирования.
^
Прямой мазок выполняется в хорошо проветриваемом помещении, но не существует эпидемиологических доказательств относительно величины риска заражения туберкулезом во время процедуры приготовления мазков (источник IUATLD).
^
Гипохлорит натрия (NaClO) NaOH или бикарбонат натрия добавляется в контейнер с мокротой таким образом, чтобы избежать возникновения аэрозоля. Следовательно, использование ламинарного бокса необязательно. Через 15 мин после добавления гипохлорит натрия NaOH содержимое мокроты переливается в пробирку для центрифугирования. Для дополнительной безопасности контейнеры с мокротой автоклавируются и потом откладываются отбросы
|
^
В идеале, микроскопическое исследование на туберкулез должно проводиться в отдельном кабинете. Тем не менее, если нет возможности выделить отдельное помещение, для бактериоскопических исследований на туберкулез должно выделяться отдельное, достаточно просторное место. Помещение для бактериоскопии должно состоять из трех различных зон:
1) для приема исследуемых образцов, заполнения лабораторного журнала и место хранения различных лабораторных элементов;
2) хорошо вентилирующаяся зона для приготовления и окраски препаратов;
3) для бактериоскопии
^
Перед приготовлением мазков, оборудование и материалы необходимо разместить так, чтобы обеспечить логический и безопасный ход работы. Все манипуляции по приготовлению мазков должны быть стандартизованными, а для максимальной безопасности все материалы и реагенты всегда должны находиться на одних и тех же местах.
|
Требования к оборудованию
Для приготовления мазков
Контейнер для сбора и хранения мокроты
Бактериологическая петля диаметром 3 мм для распределения мокроты по предметному стеклу.
Предметное стекло (обезжиренное и без царапин).
Маркировочный карандаш для нанесения идентификационного номера на предметное стекло.
Пинцет для удержания предметного стекла.
Газовая горелка Бунзена или спиртовая для фиксации препаратов прокаливания петли.
Металлическая банка для последующего сжигания использованного материала или автоклавные мешки для убивки использованного материала.
Для окрашивания
1. Штатив предметных стекол.
2. Пинцет.
3. Штатив для просушивания окрашенных предметных стекол
4. Газовая горелка или спиртовая лампа для подогрева стекол вовремя инкубации с окрашивающим раствором
|
^
NB: лаборатории 1 уровня будут обеспечиваться готовыми растворами, приготовленными в лаборатории КГЦПТД: Затем эту часть можно будет удалить
Реактивы
Основной фуксин, 3.0 g
95% этиловый спирт (технический), 100 ml
Кристаллический фенол, 5 g
Дистиллированная вода, 100 ml
Концентрированная гидрохлорированная кислота, 3 ml
-
95% этиловый спирт (технический), 97 ml
OR концентрированная серная кислота, 25 ml
Стерильная дистиллированная вода, 100 ml
Хлорид метиленового голубого, 0.3 g
Дистиллированная вода, 100 ml
Растворы
Раствор для окрашивания: 3% раствор Карбол-фуксин
Обесчвечивающий раствор: 3 % Кислотный спирт или 20-25% H2SO
Докрашивающий раствор: 0.3 % Метиленовый голубой
NB: Концентрации ВОЗ, описанные выше, отличаются от приказа 45.
|
Приготовление растворов
NB: : лаборатории 1 уровня будут обеспечиваться готовыми растворами, приготовленными в лаборатории КГЦПТД: Затем эту часть можно будет удалить
Раствор для окрашивания
Раствор фуксина
Основной фуксин 0,3г (KIT рекомендует 10g)
95% ethanol (technical grade) 100ml
Технический 95%-ный этиловый спирт 10мл
Растворите основной фуксин в спирте . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..Раствор 1
Раствор фенола
Кристаллический фенол 5,0 г
Дистиллированная вода 100 мл
Растворите кристаллы фенола
в дистиллированной воде (может
потребоваться легкое нагревание) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Раствор 2
Рабочий раствор
Смешайте 10 мл раствора 1 и 90 мл раствора 2.
Перед использованием раствора его следует профильтровать
... Храните раствор в темной бутыли. Напишите на этикетке название раствора, дату приготовления и срок хранения. Раствор можно хранить при комнатной температуре в течение 6–12 месяцев.
^
Концентрированная соляная кислота (техническая) 3 мл
Технический 95%-ный этиловый спирт 97 мл
Аккуратно добавьте концентрированную соляную кислоту к 95%-ному спирту. Всегда осторожно вливайте кислоту в спирт, но ни в коем случае не наоборот . Раствор сам произвольно нагреется.
Или обесцвечивающий реактив: 25%-ный раствор серной кислоты
Концентрированная серная кислота (техническая) 25 мл
Стерильная дистиллированная вода 100 мл
Аккуратно добавьте концентрированную серную кислоту к воде. Всегда осторожно добавляйте кислоту к воде, но не наоборот. Раствор самопроизвольно нагревается.
^
Хлорид метиленового синего 0,3 г
Дистиллированная вода 100 мл
Растворите хлорид метиленового синего в дистиллированной воде..
Примечание:
Лаборатория KIT рекомендует:
1% раствор фуксина 5% раствор фенола 10% этиловый спирт
Докрашивание 20-30 сек с 0.05% метиленовым голубым, 0.5% этиленовый спирт в очищенную воду
Хранение растворов
Хранить в темном флаконе
Написать на флаконе название реактивов и даты приготовления и срок годности
Можно хранить при температуре с 6 до 12 месяцев
|
Методика приготовления мазка
Мазки следует готовить одновременно по несколько штук (максимальное количество в одной серии – 12 препаратов). Мазки необходимо маркировать сразу же на столе для приема проб, используя несмываемый маркер – например, алмазный
стеклограф или восковой карандаш. При этом нельзя касаться поверхности предметных стекол в месте нанесения мокроты. При исследовании неконцентрированных проб мокроты вероятность обнаружения микобактерий туберкулеза наиболее высока, если препарат приготовлен из самых плотных частиц, содержащихся в мокроте. Таким образом, результаты исследования будут в значительной мере зависеть от правильности выбора таких частиц.
^
Возьмите новое, чистое предметное стекло без царапин и напишите у края шифр пациента
Перенесите необходимое количество исследуемого материала с помощью аппликатора (рекомендуется) или бактериологической петли. Для приготовления препаратов используйте присутствующие в мокроте кровянистые, непрозрачные, сероватые или желтоватые творожистые массы
Распределите материал по предметному стеклу тонким слоем на площади примерно 1,0 см на 2,0 см. Слой мокроты должен быть достаточно тонким, чтобы его можно было легко микроскопировать. На каждом предметном стекле делайте не больше одного препарата (для нанесения мокроты на предметное стекло используйте сломанный конец деревянной палочки)
Оставьте препарат для высыхания на 15 минут.
Не подсушивайте препараты нагреванием
Фиксируйте препараты, используя один из следующих методов:
6. Проведите стекло (мазком кверху) через пламя горелки 3–4 раза. Не перегревайте препарат. Перед окрашиванием, препараты охладите;
Фиксируйте препараты не менее 2 часов на электронагревателе для сушки предметных стекол (при температуре 65°С–75°С)
8. Поместите использованную деревянную палочку (аппликатор) в дезинфицирующий раствор или контейнер для биологических отходов, а для нанесения следующего образца мокроты возьмите новую палочку. Удалите приклеившиеся остатки мокроты с бактериологической петли, двигая ее вверх и вниз в контейнере, содержащем песок и 70%-ный спирт. Тщательно прокалите петлю перед ее повторным использованием. При этом пламя горелки должно быть бесцветным или голубым; оранжевый или красный цвет пламени свидетельствует о недостаточном прожигании бактериологической петли.
^
|
Приготовление мазка методом концентрации
NB. Эта часть всего лишь показывает метод, используемый в определенных лабораториях
^
Откройте крышку контейнера с мокротой и добавьте во внутреннюю сторону контейнера одинаковое количество 5% гипохлорита натрия в 2% NaOH раствор, или десятикратно разбавленный Sputofluol. Хорошо смешивайте, втечении 20 секунд, так, чтобы вся внутренняя сторона контейнера была в растворе гипохлорит натрия или Sputofluol. Все бактерии, включая микобактерии нейтрализуются втечении 15 минутной инкубации в растворе гипохлорит натрия или Sputofluol.
Для метода седиментации оставьте на 30 - 45 минут в теплом месте 45°C, чтобы дать возможность осадку образоваться в углу контейнера. (Yassin et all, 2003).
Перенесите несколько капель осадка, с помощью пипетки Пастера, на чистое предметное стекло.
Высушите мазок и зафиксируйте горячим воздухом, как описано в методике прямого метода. .
Выполните окрашивание стекла, согласно методике окрашивания Циля Нильсена.
Для метода центрифугирования.
Переместите содержимое контейнера с мокротой, смешанного с раствором гипохлорит натрия (NaClO) или Sputofluol в 15 ml пробирку для центрифугирования.
Центрифугируйте 20 мин на 3000xg или 30 мин на 1800xg (3000 rpm с радиусом центрифугирования 16 см).
Перенесите супернатант с помощью пипетки (очень важно собрать основную часть (надосадочной жидкости)) и пересуспензируйте остаточный осадок 0.05 - 0.1 ml. Хорошо смешайте и перенесите несколько капель на чистое предметное стекло, используя пипетку Пастера.
Высушите мазок и зафиксируйте горячим воздухом, как описано в методике прямого метода.
Выполните окрашивание стекла, согласно методике окрашивания Циля Нильсена.
^
For the sodiumbicarbonate method
Добавьте равное количество 5% бикарбоната соды в мокроту
Хорошо смешайте и нагревайте на водяной бане 45 минут
Переместите образец на 15 мл
Центрифугируйте 20 минут на 3000xg или 30 минут на1800xg (3000 rpm с радиусом центрифигирования 16 cm).
Перенесите супернатант (надосадочную жидкость) с помощью пипетки (очень важно собрать основную часть супернатанта (надосадочной жидкости)) и пересуспензируйте остаточный осадок 0.05 - 0.1 ml. Хорошо смешайте и перенесите несколько капель на чистое предметное стекло, используя пипетку Пастера.
Высушите мазок и зафиксируйте горячим воздухом, как описано в методике прямого метода.
Выполните окрашивание стекла, согласно методике окрашивания Циля Нильсена.
|
Методики окрашивания
Поместите маркированные предметные стекла на подставку («салазки») группами (максимально по 12 шт.) так, чтобы они не касались друг от друга.
Убедитесь, что стекла не соприкасаются друг с другом.
Налейте на каждое стекло достаточное количество раствора Циля Нильсена (карбол-фуксина), профильтрованного перед употреблением, (это очень важно )или накройте каждый слайд полоской фильтровальной бумаги, если раствор карбол фуксина перед использованием не фильтровался.
Осторожно подогрейте препарат до появления пара. Не доводите до кипения.
Подогретый препарат оставляют на 5 минут. Ни в коем случае не допускайте полного испарения жидкости.
Если использовались полоски фильтровальной бумаги, удалите их пинцетом. Аккуратно промойте стекла под струей воды до полного удаления краски.
Нанесите обесцвечивающий раствор (примерно на 3 минуты).
Тщательно промойте стекло водой. Удалите остатки воды.
Нанесите на предметное стекло докрашивающий раствор.
Проводите дополнительное окрашивание в течение 60 секунд.
Тщательно промойте стекло водой. Удалите остатки влаги.
Оставьте препарат высыхать на воздухе.
Не промокайте.
KIT рекомендует:
Проводить окрашивание карболфуксином втечении 5-10 мин
Наносить обесцвечивающий раствор на 3-5 мин
Докрашивать 20-30 секунд
NB: Обсудить какой метод лучше использовать в лабораториях 1 уровня
|
^
Для проведения безупречного микроскопического исследования, необходим хороший микроскоп и удобное рабочее место. Чтение мазков должно быть систематическим и стандартизированным , что обеспечит исследование достаточно большой (репрезентативной) части препарата. Чтобы не исследовать одни и те же участки по несколько раз, необходимо просматривать препарат в определенном порядке. Для этого рекомендуется следующая методика:
При исследовании препаратов, окрашенных карболфуксином, всегда используйте масляный иммерсионный объектив с увеличением 100х
Методично просматривайте препарат вдоль предметного стекла. После осмотра одного поля зрения передвиньте препарат по продольной оси, чтобы исследовать соседнее поле зрения, находящееся справа. Тщательно просматривайте каждое поле зрения.
Прежде чем дать отрицательный ответ, необходимо просмотреть не менее 100 полей зрения.
У опытного микроскописта эта процедура займет около 5 минут. (KIT рекомендует 10-20 мин). В объекте размером 1,5 см на 1,5 см количество полей зрения по длине стекла составляет около ста. Если в препарате содержится среднее или большое количество кислотоустойчивых микобактерий, то положительный результат можно выдать после исследования меньшего количества полей зрения
После окончания исследования уберите препарат с предметного столика, погрузите его в ксилол, чтобы удалить иммерсионное масло, а затем положите в коробку с просмотренными препаратами.
Перед исследованием следующего препарата протрите иммерсионный объектив.
При микроскопировании могут быть обнаружены неожиданные объекты. Если эти объекты сдвигаются при перемещении предметного стекла, то это могут быть частицы, случайно оказавшиеся в исследуемом материале или преципитаты фиксаторов или красителей; это могут быть и загрязнения из красителей или иммерсионного масла.
Объекты, которые сдвигаются при повороте окуляра, находятся в самом окуляре или на его линзах. Артефакты могут быть также обусловлены частицами, которые находятся на линзах конденсора, зеркале или источнике света.
|
^
NB. Следует ли это включать в СОП или в дополнительный базовый материал?
Кислотоустойчивые микобактерии имеют в длину примерно 1-10 мкм; обычно, они видны в виде тонких палочковидных бактерий, но иногда можно обнаружить изогнутые или извитые формы.
При окраске карболфуксином микобактерии туберкулеза имеют вид тонких слегка изогнутых палочек красного цвета, содержащих различное количество гранул; микроорганизмы, располагающиеся по отдельности, парами или в виде групп, хорошо выделяются на голубом фоне.
В отдельных микобактериях могут обнаруживаться участки более интенсивногоокрашивания, в результате чего они похожи на бусы, а места неравномерного окрашивания могут быть видны в виде полос.
Некоторые другие микроорганизмы, не относящиеся к ^ могут иметь различные формы – от длинных палочек до кокковых форм с различной интенсивностью окрашивания.
Различную степени кислотоустойчивости могут проявлять не только микобакте рии, но и другие микроорганизмы. Это могут быть различные виды Rhodococcus, Nocardia и Legionella, а также цисты Cryptosporidium и Isospora.
Быстрорастущие микобактерии могут различаться по степени кислотоустойчивости.
|
^
Во время бактериоскопии нужно установить, присутствуют ли кислотоустойчивые микобактерии в препарате и если они имеются, то подсчитать приблизительное количество микобактерий в поле зрения. Рекомендуется по одной и той же схеме просматривать 100 подходящих полей зрения. Подходящими считаются те поля зрения, в которых видны клеточные элементы бронхиального происхождения (лейкоциты, волокна слизи и клетки эпителия). Поля зрения, не содержащие таких элементов, недолжны учитываться при бактериоскопическом исследовании.
^
Укажите метод окраски препарата. Ответ «кислотоустойчивые микобактерии не обнаружены» дается, если были выявлены 1-3 кислоустойчивых микобактерий или кислотоустойчивые микобактерии не были выявлены в 100 просмотренных полях зрения.
^
Укажите метод окраски препарата. Количество найденных микроорганизмов свидетельствует как о степени опасности больного для окружающих, так и о тяжести туберкулезного поражения. При положительном результате бактериоскопии необходимо дать и количественную характеристику.
Чтение результатов:
< 3 КУМ на 100 полей: Учет :Отрицательный
4-9 КУМ на 100 полей: Учет: Точное число
10 до 99 КУМ на 100 полей Учет: 1+
1 до 10 КУМ на одно поле Учет: 2+
более 10 КУМ на одно поле 3+ Учет: 3+
Учет результатов
Учет результатов состоялся:
В форме направления
В лабораторном сетевом журнале в формате ВОЗ
Отчет результатов
О результатах отчитываются посредством формы направления на исследование мокроты
Положительные результаты сообщаются врачу по телефону
|
|
Контроль качества
Процедуры внутреннего контроля качества
Использование стандартных методик и материалов, без отклонений от СОП.
Включение известных положительных мазков и известных отрицательных мазков согласно загруженности лаборатории каждый день или меньше, как утверждено курирующей лабораторией. Положительный контрольный мазок гарантирует качество растворов процедуры окрашивания. Отрицательный контроль подтверждает , что кислотоустойчивые контеминанты не присутствуют в красителях или других растворах.
Каждый положительный мазок необходимо подтверждать у врача лаборанта.
Выборка отрицательных стекол ежедневно и еженедельно перепроверяется врачом-лаборантом.
Количество перепроверенных стекол должно быть зарегистрировано в соответствующем журнале.
Выборка будет рассчитана для каждой лаборатории, с учетом загруженности и количества положительных стекол.
Еженедельный и ежемесячный анализ результатов в процентном соотношении положительных результатов. Расследовать любые серьезные отклонения от нормы.
Процедуры внешнего контроля качества
Курирующие визиты на рабочие места
Участие в профессиональном тестировании по схеме лабораторной сети
Участие в программах перепроверки по лабораторной сети
Хранение всех стекол для внешнего контроля качества, согласно учрежденных процедур
Постоянное улучшение
Ежемесячное заполнение внутреннего оценочного листа
Обзор проблем и поиск решений
Отчет о проблемах курирующей лаборатории
Участие в обзорных собраниях , организованных курирующими лабораториями
|
Причины ошибок при бактериоскопии
Ошибки, связанные с исследуемым материалом
Плохое качество и/или недостаточное количество
Из-за плохой обработки многоразовых контейнеров для мокроты в них могут остаться микобактерии, что будет причиной ложноположительных результатов
Неправильная маркировка контейнеров. Маркировку следует наносить на сам контейнер, а не на крышку.
Ошибки, связанные с приготовлением мазка
Недостаточное освещение рабочего стола.
Путаница с предметными стеклами.
Приготовление одновременно слишком большого количества препаратов. Рекомендуется делать не больше 12 за один раз.
Использование предметных стекол с предыдущим положительным результатом. Их следует выбрасывать.
Исследуемый материал может быть загрязнен при использовании контаминированных бактериологических петель, пипеток или деревянных аппликаторов.
Ошибки, связанные с процессом окрашивания
Использование предметных стекол с царапинами может привести к появлению при окраске артефактов, которые могут быть ошибочно приняты за микобактерии.
Использование непрофильтрованного раствора фуксина, содержащего кристаллы.
Неаккуратное подогревание раствора фуксина; испаряясь, фуксин может кристаллизоваться на стекле.
Недостаточное обесцвечивание препарата может привести к сохранению на некоторых сапрофитных бактериях красной краски, в результате чего они могут быть ошибочно приняты за кислотоустойчивые микобактерии.
Ошибки, связанные с методикой бактериоскопии
Отсутствие номера на препарате.
Не проверялись и не переномеровывались стекла, поскольку во время окрашивания номер мог закраситься. Что может привести к путанице.
Не проводилось очищение иммерсионных линз после микроскопии каждого препарата, особенно после положительных препаратов.
Наличие бактерий в иммерсионном масле (может быть связано с касанием препаратов контейнером с маслом). Необходимо использовать капельный дозатор и капать масло не касаясь препарата.
Ошибочный учет результатов
|
Литература
Order 45, MOH, Ukraine Tuberculosis Services
Laboratory services in tuberculosis control. Part I. Organization and Management. Part II. Microscopy and pat III. Culture, WHO/TB/98.258
External Quality Assessment for AFB Smear Microscopy, 2002. Association of Public Health Laboratories
Van Deun et al Bleach sedimentation method for increased sensitivity of sputum smear microscopy: does it work? 2000. Int J Tuberc Lung Dis. 4:371-376.
Saceanu et al., 1993. Evaluation of sputum smears concentrated by cytocentrifugation for direct detection of acid-fast bacilli J Clin Microbiol. 31:2371-2374
H.Miorner et al., 1994. Diagnosis of pulmonary tuberculosis.1994. Lancet; 344:127.
N. Gebre et al.,1995. Improved microscopical diagnosis of pulmonary tuberculosis in developing countries.Trans. of the Royal Society of Tropical Medicine.89:191-193
M. A Yassin, L.E. Cuevas, H. Gebrexabher, S.B. Squire (2003). Efficacy and safety of short-term bleach digestion of sputum in case-finding for pulmonary tuberculosis in Ethiopia. Int J Tuber. Lung Dis. 7:678-683
|
23. Приложения: 1. Диаграмма приготовления мазка и 2. Диаграмма процедуры окрашивания: следует подготовить.
|
|
