Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon

Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004



Скачать 0.82 Mb.
Название Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004
страница 8/8
Дата 25.03.2013
Размер 0.82 Mb.
Тип Реферат
Приложение VII.(Not finished!) Программа профессионального тестирования для лабораторной сети.
3. Приготовление стекол с определенным количеством КУМ
4. Внедрение программы ПТ
Количество стекол в ПТ наборе
5. Результаты приготовления мазков в лаборатории Центрального противотуберкулезного диспансера.
Preparation of slides
6. Number of slides made and AFB concentration of slides
7. Deviations from protocol in Appendix 2
8. Decontamination of sputum using sputofluol
1   2   3   4   5   6   7   8
^

Приложение VII.(Not finished!) Программа профессионального тестирования для лабораторной сети.



1. Введение

Профессиональное тестирование включает окрашивание и/или перечитывание централизовано заготовленных стекол с известным количеством КУМ. Тестирование позволяет проверить техническую компетенцию каждого лаборанта , а также возможности и доступность оборудования. Этот метод не проверяет работу при стандартных условиях, или всю работу лаборатории.


2. Цель

Цель профессионального тестирования в Киеве является оценка профессионализма лаборантов из лабораторий 1 уровня, которые прошли тренинг.


Профессиональное тестирование будет внедряться как часть внешнего контроля качества перед внедрением программы перепроверки мазков.


^ 3. Приготовление стекол с определенным количеством КУМ

Центральный ТБ диспансер будет заниматься приготовлением стекол для профессионального тестирования.

Мокрота с положительным результатом может использоваться для приготовления стекол для профессионального тестирования. Если положительной мокроты нет в наличии в достаточном количестве стекла можно приготовить из культур Mycobacterium tuberculosis.

Мы испробовали оба метода в Центральном ТБ диспансере. Основная методика взята из книги: ”Внешняя оценка качества для микроскопии КУМ, из Ассоциации лабораторий общественного здоровья, 2002”.


Полная процедура описана в Приложении C буклета Внешний Контроль Качества и в отчет приложена копия. Результаты приготовления стекол описаны ниже.


^ 4. Внедрение программы ПТ

Всем лаборантам и врачам, связанным с исследованием мокроты на туберкулез необходимо участвовать в профессиональном тестировании. Структуру программы необходимо уточнить, и решение должно быть принято независимо от того будет ли выполняться тестирование под надзором или без. Также включение неокрашенных стекол можно рассматривать.


ПТ тест будет состоять из 5 стекол со следующим содержанием:

Концентрация
^ Количество стекол в ПТ наборе

1
Отрицательные



3

2
1-9 КУМ



2

3
1+
10-99 бацилл / на 100 полей
3

4
2+
100 – 999 бацилл на /100 полей
2


Опробование теста пройдет в сентябре с целью разрешения оперативных проблем и налаживания протокола. После официального открытия лабораторийthe можно будет полностью внедрить программу ПТ и первый отчет ожидается до конца ноября 2004.

Проект обязан подготовить детальный протокол по внедрению профессионального тестирования, включая приготовление форм для учета результатов тестирования и форм для выдачи ответов лабораториям и сбора резльтатов. Примеры этих форм также представлены в Приложении C инструкции по Контролю Качества.

Анализ состоит из оценки следующих пунктов:

  • Положительная консистенция

  • Отрицательная консистенция

  • Полное соответствие

  • Большое количество ложно положительных результатов

  • Большое количество ложно отрицательных результатов

  • Мало ложно положительных /мало ложно отрицательных


Следующий раздел вкратце описывает процедуры и результаты.


^ 5. Результаты приготовления мазков в лаборатории Центрального противотуберкулезного диспансера.

Мы испробовали несколько методов приготовления слайдов с известным количеством КУМ для проведения профессионального тестирования.

  1. Стекла приготовленные из суспензии, культурированного M. tuberculosis

  2. Стекла приготовленные из мокроты, выросшей с суспензией культурированного M. tuberculosis

  3. Стекла, приготовленные из мокроты пациента с положительным результатом мокроты.


Приложение 1. Мы представили обе суспензии M. tuberculosis для кипячения и фиксации формалином (убитого материала). Для этого M. tuberculosis вырастили на белковой среде Tween, которая дает хорошую суспензию of M. tuberculosis. Экстинкция измерялась в 420nm и увеличивалась на 0.15 соответственно 108 бактериям /мл. Мы также ввели использование стандарта Mac Farland (известен лабораории). Mac Farland № 1, соответствует 3x108 бактериям/мл. Был представлен график, отображающий отношение между Mac Farland Ex при 420 nm, мутность и количество M. tuberculosis / ml, выполнялись серийные разведения для стекол, посредством смешивания 10 µl суспензии бактерий и 40 µl мокроты, в результате получили суспензию 7.5x107. Подобные суспензии были сделаны из 7.5x106 и 7.5x105 бактерии/мл, начиная с суспензии 3.107 и 3x 106 бактерий/мл. Результаты были неожиданными, только самое высокое разведение 3.108 бактерий/мл суспензии дало ZN микроскопии положительное чтение. Чтение было трудным, так как микобактерии не распространялись равномерно.


Приложение 2. Мы также исследовли другой способ приготовления стекол для профессионального тестировния: определенное количество 1 ml мокроты было вырощено на суспензии M.tuberculosis до конечной концентрации 5x105, 2x105,,5x104, 2x104 и без бактерий. 20 и 40 µl quantities of these samples were put on slides. The results were not satisfactory very little mycobacteria were found after ZN staining.


Приложение 3. The best results were obtained using a sputum sample from a patient (P227) Sputofluol concentrated sputum was used to make the 3+ slides. The 2+ were made by direct smear, the 1+ by addition of negative sputum. It saves time to prepare first a small number of slides with 2+ and 1+ score and stain these to see if the dilution produces the right ZN score and then prepare the large amount of slides in the same way. The method described here is essentially the same as described under C4, 5 and 6 WHO Quality Control booklet).


Slides made from Mycobacterium tuberculosis culture

The cultures are made according to the protocol as described in appendix 2.

^

Preparation of slides


Slides were prepared by dispensing 20 µl of each final solution onto clean slides over an area of 1x 2 cm (we used millimeter paper to make the same spot size) and fixed.


We checked consistency of AFB counts by screening six from each batch.

Slides are coded on day of preparation February 5, and the protocol of the first proficiency round will give the scheme of coding of the slides.


^ 6. Number of slides made and AFB concentration of slides


The following number of slides were prepared:

  • 100 negative slides

  • 50 slides with 1+,

  • 50 slides with 2+ and

  • 50 slides with 3+ ZN score.



^ 7. Deviations from protocol in Appendix 2


We followed the protocol in Appendix C1-7 of the Manual for External Quality Control (http://www.aphl.org/Infectious_Diseases/EQA.cfm) with the following minor modifications:

  1. Sputum sample for 3+ slides was concentrated by Sputofluol method and not by NaOH method.

  2. We have added1.5 mg/ml or 15 mM N acetyl cysteine to the negative, 1+ and 2+ sputum samples to reduce the viscosity.


^ 8. Decontamination of sputum using sputofluol


Mode of Action
If tubercle bacilli are to be cultivated, they must first be freed from the surrounding cells and mucus. This is achieved by dissolving the material in Sputofluol®. The active reagent of Sputofluol® is alkaline hypochlorite which dissolves the organic material by oxidation without damaging the acid-alkali-resistant tubercle bacilli. The undesired accompanying bacterial flora is destroyed (http://service.merck.de/microbiology/tedisdata/nodes/5058.html).

Composition
Water; sodium hydroxide; sodium hypochlorite.

Procedure

  1. Open the lid of the sputum container and add via the inner side of the container an equal amount of 5% bleach in 2% NaOH solution, or 10 times diluted Sputofluol.

  2. Mix well, 20 seconds, so that the whole inner side of the container has been in contact with the bleach solution or the Sputofluol solution.

All bacteria including mycobacteria are killed within 15 minutes of incubation in bleach or

Sputofluol.



For the sedimentaion method

  1. Let it stand for 30 -45 min in a warm place at 45°C to allow sedimentation into the dependent corner of the container. (Yassin et all.,2003).

  2. Transfer a few drops from the sediment using a Pasteur pipette onto a clean glass slide.

  3. Dry the smear and fix by heat as described for the direct smear.
    Stain the slide as described under Ziehl - Neelsen staining.



For the centrifugation method.

Transfer the content of sputum container with the bleach or the Sputofluol solution to a 15 ml centrifuge tube.

  1. Centrifuge for 20 min at 3000xg or 30 min at 1800xg (3000 rpm with a centrifuge radius of 16 cm).

  2. Remove the supernant by a pipette (it is important to remove most of the supernatant) and resuspend the pellet with the remaining supernatant 0.05  - 0.1 ml. mix well and transfer a few drops onto a clean glass slide using a Pasteur pipette.

  3. Dry the smear and fix by heat as described for the direct smear.

  4. Stain the slide as described under Ziehl - Neelsen staining.
1   2   3   4   5   6   7   8
отлично
  1
Ваша оценка:

Похожие:

Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Пособие для специалистов общей лечебной сети по своевременному выявлению больных туберкулезом. М.,

 Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Приказ и о. Министра здравоохранения Республики Казахстан от 6 января 2011 года №12 Онекоторых вопросах
Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Приказ Министра здравоохранения Республики Казахстан от 25 апреля 2011 года №218 Онекоторых вопросах

 Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Приказ Министра здравоохранения Республики Казахстан от 25 апреля 2011 года №218 Онекоторых вопросах
Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Hip and Knee. Конференция посвящена 80-летию со дня рождения академика нан и амн украины К. С. Тернового

 Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Название: Хроника дорожных происшествий. Март Согласно статистическим данным на территории г. Горно-Алтайска
Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon В киеве пройдет крупнейшая в Восточной Европе конференция для врачей дерматологов

 Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Инструкция по химиотерапии больных туберкулезом проект изменений «Инструкции по химиотерапии больных
Проект изменений «Инструкции по химиотерапии больных туберкулезом» приложения №6 к Приказу мз РФ...
Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon 9-10 июля в Киеве пройдет региональный форум по вич/спиду для представителей сообщества потребителей

 Для Лабораторной сети по борьбе с туберкулезом в г. Киеве. Март 2004 icon Требования инфекционного контроля в предупреждении внутрибольничных инфекций в клинике туберкулеза.
Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина

База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Новые материалы

опубликовать
Документы