Практикум по курсу «Биохимия» для студентов специальностей 260204 «Технология бродильных производств и виноделие» и240901 «Биотехнология» Бийск
|
|
Скачать 0.82 Mb.
|
|
^
В основе метода лежит способность альдегидной группы лактозы в щелочной среде окисляться молекулярным йодом:  Избыточное количество йода, которое не вступило в реакцию, определяют титрованием тиосульфатом натрия, используя в качестве индикатора крахмал. ^ складчатые бумажные фильтры, молоко, 7 %-ный раствор сульфата меди, 2 %-ный раствор гидроксида натрия, 5 %-ный раствор фторида натрия, 0,05 моль/л раствор йода, 5 %-ный раствор соляной кислоты, 0,05 моль/л раствор тиосульфата натрия, 1 %-ный раствор крахмала. Оборудование: стеклянные палочки, пипетки градуировочные, колбы мерные (объем 50 мл), колбы конические с притертой пробкой (объем 100 мл), воронки стеклянные, бюретки, капельницы, часы. ^ В две мерные колбы вносят по 5 мл раствора сульфата меди, по 5 мл раствора гидроксида натрия и по 2,5 мл раствора фторида натрия. В одну из них (проба) добавляют 5 мл молока, в другую (контроль) – 5 мл дистиллированной воды, перемешивают и доводят дистиллированной водой до объема 50 мл, через 30 мин фильтруют. Затем в конические колбы переносят по 20 мл фильтрата пробы и контроля, вливают по 20 мл раствора йода и, непрерывно перемешивая, по 10 мл раствора гидроксида натрия. Тщательно закрывают. Через 20 мин к содержимому колб добавляют по 10 мл раствора соляной кислоты, по три капли раствора крахмала и титруют раствором тиосульфата натрия до исчезновения окраски, образовавшейся при добавлении крахмала. Массовую концентрацию лактозы в молоке (мг/мл) рассчитывают по формуле  ,где А и В – объемы раствора тиосульфата натрия, затраченные на титрование пробы и контроля; f – коэффициент поправки на титр 0,05 моль/л раствора тиосульфата натрия; Q – масса лактозы (18,01 мг), эквивалентная 1 мл 0,05 моль/л раствора тиосульфата натрия; V0 – общий объем пробы; V1 и V2 – объемы фильтрата и молока, соответственно, взятые для исследования. ^ Все белки являются высокомолекулярными полипептидами. Простые белки (протеины) содержат только аминокислоты, а сложные (протеиды) – еще и неаминокислотные компоненты: гем, производные витаминов или углеводные компоненты (Приложения ЕК). ^ Метод заключается в том, что устанавливают количество децинормального раствора щелочи, затраченное на титрование казеина, зная, что 1 мл децинормальной щелочи эквивалентен 0,11315 г казеина в молоке. ^ : складчатый бумажный фильтр; молоко цельное; 0,1 %-ный спиртовой раствор фенолфталеина; 0,04 н раствор серной кислоты; 0,1 н раствор гидроксида натрия. Оборудование: колбы мерные (объем 100 мл), колбы конические объемом от 200 до 250 мл, капельницы, воронки стеклянные, бюретка, часы. ^ 1) в две колбы емкостью 200…250 мл отмерить по 20 мл из одной пробы исследуемого молока и добавить 80 мл дистиллированной воды; 2) в одну из колб прибавить из бюретки при постоянном перемешивании по каплям 0,04 н раствор H2SO4 (приблизительно 23…28 мл) до появления хорошо заметных хлопьев казеина; 3) во вторую колбу влить из бюретки такое же количество серной кислоты, как и в первую колбу; 4) содержимое первой колбы отфильтровать в мерную колбу на 100 мл. В фильтрат пройдут через фильтр все составные части смеси, за исключением казеина и жира; 5) смесь во второй колбе (с казеином) оттитровать 0,1 н раствором NaOH с индикатором фенолфталеином (23 капли) до слабо-розового окрашивания; 6) 100 мл прозрачного фильтрата перелить в коническую колбу, прибавить 23 капли фенолфталеина и так же оттитровать 0,1 н раствором NaOH до слабо-розового окрашивания; 7) вычислить содержание казеина в молоке; 8) на нейтрализацию смеси во второй колбе пошло 14 мл 0,1 н раствора NaOH. На нейтрализацию 100 мл фильтрата из первой колбы без казеина пошло 10 мл 0,1 н NaOH. На нейтрализацию 55 мл фильтрата из колбы без казеина пошло 4 мл 0,1 н раствора NaOH: 55 4 61 х х = 4,43 мл. Следовательно, на нейтрализацию казеина из 10 мл молока пошло: 10,0 – 4,43 = 5,57 мл 0,1 н раствора NaOH. Так как 1 мл 0,1 н раствора NaOH эквивалентен 0,11315 г казеина, то в 10 мл молока содержится: 0,11315·5,57=0,63 г. В 100 мл молока будет: 0,63·5=3,1 г казеина. Процентное содержание казеина в молоке: 3,1:1,030 = 3,01 %. ^ Метод основан на том, что водный нейтральный раствор аминокислот в присутствии нейтрального формалина способен повышать кислотность с образованием соединений, в которых оба водорода аминогруппы замещены метильной группой.  Далее свободную группу COOH оттитровывают щелочью:  ^ молоко цельное; 1 %-ный спиртовой раствор фенолфталеина (1 г фенолфталеина растворить в 70 мл этилового спирта и добавить 30 мл воды); нейтрализованный раствор формалина (приготовление: к 50 мл 30…40 %-ного формалина добавить 0,5 мл 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина и при перемешивании оттитровать 1 н раствором NaOH до слабо-розового окрашивания); 0,1 н раствор NaOH. Оборудование: колба коническая (объем 100 мл), капельница, бюретка, стакан. ^ 1) в колбу объемом от 50 до 100 мл отмерить пипеткой 10 мл молока, добавить 10 капель 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина, все размешать и оттитровать 0,1 н раствором щелочи до слабо-розового окрашивания, не исчезающего при взбалтывании; 2) в колбу добавить 2 мл нейтрализованного формалина, размешать (слабо-розовое окрашивание исчезнет); 3) в бюретке отметить уровень щелочи и содержимое колбы вновь оттитровать до такого же слабо-розового окрашивания (как в первый раз), не исчезающего при размешивании; 4) сделать отсчет по бюретке, показывающий количество 0,1 н раствора щелочи, пошедшей на титрование смеси в колбе, и рассчитать содержание общего белка и казеина в молоке; 5) для установления содержания общего белка необходимо количество 0,1 н раствора щелочи, пошедшее на титрование после добавления формалина, умножить на коэффициент 1,94, а для определения казеина – на коэффициент 1,51. Пример. После добавления формалина на титрование содержимого колбы пошло 1,7 мл 0,1 н раствора NaOH. Сколько общего белка и казеина в молоке? Содержание общего белка в молоке (%): 1,7×1,94=3,3. Содержание казеина (%): 1,7×1,51=2,57. Факторы, влияющие на точность анализа: а) неодинаковая интенсивность окраски при титровании до добавления формалина; б) качество формалина. Используйте только нейтральный и свежеприготовленный формалин! ^ Метод основан на способности аминокислот реагировать с нейтральным раствором формальдегида с образованием метиленаминокислот. Этот метод применяется для определения карбоксильных групп аминокислот, которые титруют раствором щелочи, предварительно блокировав аминогруппы формальдегидом. Во время реакции с формальдегидом аминогруппа теряет основные свойства, при этом образуется метиленаминокислота, которая оттитровывается щелочью:   Определяя количество карбоксильных групп титрованием, можно одновременно определить и количество α-аминогрупп, так как количество карбоксильных групп эквивалентно количеству связанных с формальдегидом α–аминогрупп. ^ : складчатый бумажный фильтр; сухой хлористый барий; 1 %-ная смесь аминокислот (вытяжка аминокислот из биологического материала); 0,1 %-ный спиртовый раствор фенолфталеина; 0,01 моль/л раствор соляной кислоты; 0,05 моль/л раствор гидроксида калия; формольная смесь (к 50 мл 40 %-ного раствора формальдегида добавляют 10 капель 0,1 %-ного раствора фенолфталеина и по каплям 0,1 моль/л раствор гидроксида калия до образования слабо-розовой окраски). Оборудование: колбы мерные (объем 100 мл), капельницы, воронка стеклянная, бюретка, часы. ^ . К 25 мл смеси аминокислот в колбе прибавляют 1 г хлористого бария, 10 капель раствора фенолфталеина и перемешивают. К смеси приливают насыщенный раствор баритовой воды до появления едва заметного розового окрашивания. Колбу закрывают и оставляют на 15 минут. Затем разбавляют водой до объема 100 мл и отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр от фосфорнокислых и углекислых солей бария. Готовят две колбы объемом 100 мл. В одну вносят 40 мл фильтрата, что соответствует 10 мл раствора аминокислот, во вторую – 40 мл дистиллированной воды. Прибавляют по 10 капель раствора фенолфталеина и при необходимости раствор соляной кислоты (осторожно) до окрашивания растворов (контроля и пробы) в едва заметный розовый цвет. Затем в обе колбы вносят по 10 мл формольной смеси и титруют из бюретки раствором гидроксида калия до появления едва заметной розовой окраски. Цвет контроля и пробы должен быть одинаковым. Массовую концентрацию аминокислот (мг/мл) рассчитывают по формуле:  ,где А и В – объемы раствора гидроксида калия, затраченные на титрование пробы и контроля, соответственно; f – коэффициент поправки на титр 0,05 моль/л раствора гидроксида калия; Q – масса аминокислот, эквивалентная 1 мл 0,05 моль/л раствора гидроксида калия (0,7 мл); V – объем раствора аминокислоты, взятый для анализа. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям