Российской Федерации Пермская государственная медицинская академия А. В. Туев, В. Ю. Мишланов бронхиальная астма (иммунитет, гемостаз, лечение) Пермь, 2000
|
|
Скачать 3.37 Mb.
|
|
^
Рассмотрим подробнее что такое иммунный статус. Под этим термином иммунологи понимают характеристику состояния защитных систем, обеспечивающих иммунный гомеостаз организма. Данная характеристика включает в себя комплекс клинических и лабораторных признаков и показателей (смотри Петров Р.В., Орадовская И.В. Диагностика иммунологической недостаточности при иммуноэпидемиологических исследованиях.- М., ВНИИМИ, серия: иммунология, 1989) [134]. ^ Признаками выраженной дисфункции системы иммунитета являются: длительная лихорадка, частое рецидивирующее течение респираторных заболеваний (5 и более раз в год), пиодермия, длительная диарея, упорное течение любых воспалительных процессов и инфекций, наличие хронической герпетической или цитомегаловирусной инфекции; жалобы могут быть связаны с текущими аллергическими, аутоиммунными или неопластическими заболеваниями. При сборе анамнеза прежде всего следует обратить внимание на данные о перенесенных инфекциях, интоксикациях, аллергических и онкологических заболеваниях, причинах их возникновения, результатах их лечения. Необходимо обратить внимание на применение ранее длительной медикаментозной терапии (антибиотики, глюкокортикоиды, цитостатики, антидепрессанты, микроэлементы и другие). Несомненно, что заболевания нервной и эндокринной систем также влияют на состояние системы иммунитета. Следует учитывать данные о случаях обширных ожогов, оперативных вмешательствах, серьезных травмах, которые могли повлиять на иммунную реактивность. Среди причин заболеваний с нарушением в системе иммунитета необходимо рассматривать отягощенную наследственность по перечисленным заболеваниям, наличие наследственной патологии, смертности от генерализованных инфекционных заболеваний, злокачественных новообразований и аутоиммунных заболеваний среди близких родственников. Важное место в сборе иммунологического анамнеза нужно отводить выявлению возможной сенсибилизации к бытовым, эпидермальным, пыльцевым, пищевым и лекарственным аллергенам, другим группам аллергенов. На состояние иммунного статуса влияет наличие хронических очагов инфекции, состояние дисбактериоза кишечника, нарушение функции легких, печени, почек. Среди причин нарушения функций системы иммунитета могут встречаться также интоксикации, производственные факторы, случаи хронического стресса и характер питания человека. После внимательного изучения иммунологического анамнеза следует обратить внимание на наличие объективных признаков нарушений в системе иммунитета, для чего необходимо провести осмотр по системам органов. Иммунная недостаточность может проявляться возникновением хронических очагов инфекции со стороны верхних дыхательных путей, бронхов, легких, а также уха, ротовой полости, желчевыводящих путей и желудочно-кишечного тракта, почек и мочевыводящих путей, женских половых органов или предстательной железы (у мужчин), реже других локализаций. При осмотре необходимо обратить внимание на возможное наличие суставного синдрома, поражение кожи или синовиальных оболочек, что встречается при аутоиммунных заболеваниях. Очень часто у больных бронхиальной астмой выявляются признаки дисбактериоза кишечника: вздутие живота, урчание, болезненность при пальпации кишечника. Считается, что дисбактериоз кишечника встречается у 88% больных бронхиальной астмой, причем его частота и степень выраженности нарастают при тяжелом течении заболевания [179]. Поскольку применение эубиотиков и некоторых растительных препаратов у таких больных помогает улучшать течение заболевания, то лабораторное обследование представляется необходимым для уточнения характера нарушения микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Для уточнения состояния ротовой полости, носоглотки, околоносовых пазух, уха и состояния половой сферы следует прибегать к консультации узких специалистов: стоматолога, ЛОР-врача, гинеколога, в редких случаях уролога. При объективном обследовании необходимо уделить внимание специализированным органам системы иммунитета: состояни лимфоузлов, селезенки, а также печени. В целом, наличие клинических признаков иммунной недостаточности определяется согласно карте диагностики иммунной недостаточности при иммуноэпидемиологических исследованиях взрослого населения, составленной Р.В.Петровым, И.В.Ородовской (1989) [134]. Тщательное обще клиническое обследование, включающее: сбор жалоб больного со стороны различных органов и систем организма, выяснение особенностей жизнедеятельности, изучение анамнеза основного заболевания, жизни, объективного статуса пациента необходимо выполнять у каждого больного бронхиальной астмой. Результаты объективного обследования больного, указывающие на нарушение функции различных органов позволяют составить план дополнительного инструментального и лабораторного обследования для установления характера патологического процесса, и, таким образом, диагносцировать наличие неопластического синдрома или инфекционного процесса. ^ составляют общеклинические методы. Это наблюдение за общим анализом крови, мочи, данными электрокардиограммы, флюорографии органов грудной клетки, учет данных анализа на обнаружение яиц гельминтов в кале. Целесообразно изучение биохимических тестов крови: на содержание глюкозы, общего количества белка, креатинина, общего биллирубина, трансаминаз, щелочной фосфатазы сыворотки крови, величины тимоловой пробы, серомукоидов, С-реактивного белка и других показателей. Поскольку наличие самой бронхиальной астмы уже указывает на особенности иммунного ответа у пациента, то определение функциональных критериев тяжести заболевания является обязательным, в том числе и для правильной оценки лабораторных иммунологических симптомов. Особое внимание следует уделять установлению выраженности некоторых признаков, определяющих диагноз бронхиальной астмы и причину заболевания, например наличие классических приступов удушья, их особенности или проявления кашля, чихания, насморка, слезотечения, зуда в носоглотке, першения в горле при контакте с потенциальными аллергенами и другие. Уточняют их периодичность, частоту, выраженность, потребность в медикаментозном купировании. Для определении тяжести бронхиальной астмы обращают внимание на количество симптомов, ограничение физической активности, проводимую базисную терапию бронхиальной астмы. Анамнестичекие и физикальные данные составляют основу диагностики сопутствующих заболеваний, определяют тактику специального обследования для выявления аллергических заболеваний и оценки состояния системы иммунитета. ^ должно включать: сбор аллергологического анамнеза, оценку "эффекта элиминации" виновного аллергена. Кожные аллергологические пробы проводятся с целью подтверждения данных анамнеза при отсутствии противопоказаний. Для диагностики атопических состояний применяют коммерческие препараты аллергенов, приготовленные из домашней пыли, библиотечной пыли, пера подушки, шерсти собак, кошек, реже другие эпидермальные аллергены, а при указании на явления поллиноза в анамнезе - с аллергенами пыльцы деревьев, злаковых и сорных трав вне сезона поллинации. С этой целью могут быть использованы аллергены, приготовленные Краснодарским предприятием по производству медицинских препаратов. В целом, аллергологическое обследование должно соответствовать принципам, изложенным Л.А.Горячкиной и соавт. (1989) [43]. По особым показаниям, кроме обязательного крупнокадрового флюорографического исследования органов грудной клетки, необходимо выполнять более детальное рентгенологическое исследование, например при подозрении на наличие перибронхита, бронхоэктазов, инфильтрации легочной ткани и других. При обследовании больных бронхиальной астмой обязательным методом является исследование функции внешнего дыхания с помощью компьютерного спирометра. При статистической обработке результатов спирометрии пользуются относительными вентиляционными показателями в процентах от должных величин, полученным по уравнениям предсказания с учетом пола, возраста, роста и веса больного, а также параметров окружающей среды - температуры, атмосферного давления и влажности воздуха (Knudson R.J.). С помощью спирометрии врач получает информацию о важных параметрах функции внешнего дыхания, отражающих преимущественно рестриктивные изменения: Исследование количества и функции иммунокомпетентных клеток, других лабораторных иммунологических параметров организма завершает иммунологическое обследование больного бронхиальной астмой. Необходимо периодически повторять максимально полное определение иммунологических показателей, а при выявлении выраженных дефектов в иммунной системе и проведении иммунокоррегирующей терапии контролировать наиболее информативные показатели по мере необходимости (возможно еженедельно в период проведения лечения, в дальнейшем ежемесячно или ежесезонно для оценки эффективности терапии). ^
ИммунограммаЗапись иммунологических показателей в виде таблицы, включающей многие маркеры Т- и В-звеньев системы иммунитета, оценку функциональной активности лейкоцитов и ряд других гуморальных иммунологических признаков, называется иммунограммой. Методика исследования лабораторных иммунологических показателей условно делиться на два или три этапа в зависимости от сложности выполняемых тестов и глубины изучения иммунных реакций [132, 133, 134, 176, 205]. Однако в небольших лабораториях обычно используется какой-либо достаточно постоянный набор методик, причем нормальные величины иммунологических показателей могут несколько различаться в отдельных лабораториях в силу разных методических модификаций или условий выполнения тестов. Характеристики Т-клеточного звена чаще оцениваются в реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана, а также с применением нагрузочного теста с теофиллином. Эта методика позволяет получить следующие показатели:
Реже и только по специальным показаниям используются другие нагрузочные тесты. Общее количество В-лимфоцитов учитывают по величине показателя МРОЛ - розеткообразующих лимфоцитов с эритроцитами мыши. Функциональную активность В-лимфоцитов оценивают по содержанию основных трех классов иммуноглобулинов в сыворотке крови (M, G, A). Высокоинформативную оценку состоянию противомикробной защиты дают показатели фагоцитарной активности нейтрофилов. Из них наибольшее распространение получили процент фагоцитоза и фагоцитарное число. Иммунограмму дополняют величина общей гемолитической активности комплемента и содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови. Оценка полученных данных иммунологического обследования больного бронхиальной астмой требует определенных знаний методики выполнения иммунологических тестов, их возможности и диагностическое значение, а также умение проводить оценку взаимосвязей клинических и лабораторно-инструментальных результатов иммунологического обследования, с применением методик оценки иммунного дисбаланса. Остановимся на основных принципах оценки звеньев системы иммунитета. Оценка Т-клеточного звенаДля оценки состояния Т-клеточного звена системы иммунитета в настоящее время большинство лабораторий использует моноклональные антитела к некоторым клеточным мембранным маркерам Т-лимфоцитов (Т3, Т4, Т8 и др.). Можно применять методы проточной цитометрии, непрямой иммунофлюоресценции, реакцию лейколизиса (смотри специальные руководства). Метод спонтанного розеткообразования также имеет широкое распространение (Jondal M.) [268]. Однако, для количественного анализа Т-лимфоцитов и их субпопуляций он мало пригоден. Его использование целесообразно с целью иметь функциональную характеристику некоторых мембранных рецепторов Т-лимфоцитов. Принцип метода спонтанного розеткообразования. Т-лимфоциты обладают способностью образовывать розетки с эритроцитами барана, благодаря специфическим мембранным рецепторам на их поверхности (Е-розетки). Обычно к Т-лимфоциту прилипает 3 и более эритроцита барана. Но, чем больше эритроцитов образуют розетку, тем активнее рецепторы на поверхности Т-лимфоцита (Рис. 8). После инкубации лимфоцитов в присутствии теофиллина, часть из них теряет способность к образованию розеток с эритроцитами барана. Это связано с изменением активности внутриклеточных посредников - цАМФ и цГМФ [13, 119, 164], ферментативных систем клетки, а следовательно, и мембранных рецепторов. Причем, молодые зрелые Т-лимфоциты (наиболее активные) как правило сохраняют способность к розеткообразованию, а старые и менее активные утрачивают. Эта модификация теста обычно применяется для оценки функции Т-клеточного звена системы иммунитета при острых и хронических воспалительных процессах. Для выполнения реакции розеткообразования необходимо выделение максимально чистой суспензии лимфоцитов, что достигается с применением градиента плотности фиколл-верографина (1.077) по методу А.Boeum (1968). Методики выделения мононуклеарных лейкоцитов и спонтанного розеткообразования описаны в методических рекомендациях [205], справочнике "Лабораторные методы исследования в клинике" (под ред. В.В.Меньшикова, 1987) [93], практикуме "Иммунология" (Пастер Е.У. и соавт., 1989) [69]. Методика выделения взвеси лейкоцитов, обогащенной мононуклеарными клеткамиПринцип выделения взвеси мононуклеарных лейкоцитов в градиенте плотности состоит в наслаивании венозной гепаринизированной крови на среду фиколл-верографин, плотность которой составляет 1.077. При центрифугировании пробирок в течении 40 минут при 1000 об/мин происходит седиментация эритроцитов и гранулоцитов, обладающих большей плотностью, на дно пробирки. Другие компоненты крови располагаются послойно: взвесь мононуклеарных лейкоцитов выявляется в виде белого кольца в верхнем слое фиколл-верографина, над ним располагается мутное облачко тромбоцитов и столбик плазмы крови. Суспензию мононуклеаров осторожно собирают пипеткой, трижды отмывают в среде 199 и готовят концентрацию в указанной среде 2-4 10-6/мл. Р  ис. 8. Розеткообразование Т-лимфоцитов с эритроцитами барана Постановка метода спонтанного розеткообразованияс эритроцитами барана Для осуществления метода розеткообразования с эритроцитами барана необходимо заранее приготовить 0.5% взвесь отмытых эритроцитов барана в среде 199. Смесь равных количеств (0.5 мл) мононуклеаров и эритроцитов барана центрифугируют 5 минут при 1000 об/мин, инкубируют в термостате (37° С) один час, затем помещают в холодильник (4° С) на 18 часов (до следующего дня). Перед приготовлением мазков производят фиксацию образовавшихся розеток 0.6% раствором глютарового альдегида в течение 10 минут, после чего отмывают в среде 199, затем взвесь осторожно ресуспендируют, готовят мазки и окрашивают их гематоксилин-эозином. Оценку результатов проводят под иммерсионным микроскопом при увеличении в 200 раз. Подсчитывают 200 лимфоцитов и определяют процент розеткообразования. Розеткой считается три и более эритроцита, присоединившихся к лимфоциту. Проведение нагрузочного теста с теофиллиномОпределенную практическую ценность имеют нагрузочные тесты, среди которых тест с теофиллином занимает особое положение. Количество теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов определяют методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана в присутствии раствора теофиллина (2 мг/мл) по S.Limatibul, A.Shore и соавт. (1978). В результате взаимодействия теофиллина с пуриновыми рецепторами изменяется активность фермента фосфодиэстеразы, влияющей на соотношение цАМФ/цГМФ внутри лимфоцитов. Эти реакции приводят к изменению способности Т-лимфоцитов образовывать розетки с эритроцитами барана [13, 119]. Существует мнение об относительной корреляции теофиллинрезистентной и теофиллинчувствительной фракции Т-лимфоцитов с величиной субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров соответственно у здоровых лиц. При различных заболеваниях эти корреляции могут изменяться в силу способности теофиллина стимулировать реакцию розеткообразования с эритроцитами барана за счет выявления "замаскированных" рецепторов на Т-лимфоцитах и 0-клетках. В настоящее время использование данного теста в клинической практике считается оправданным с целью изучения состояния рецепторного аппарата клеток и степени зрелости Т-клеток периферической крови человека [53, 164, 204]. Учитывая большое значение теста для оценки иммунного статуса и достаточную информативность в клинике его применение считается целесообразным [98]. Для осуществления теста готовят две пробирки, в которые вносятся равные объемы взвеси мононуклеаров и эритроцитов барана, в первую добавляют раствор теофиллина в среде 199, в другую соответственное количество среды 199. В первой пробирке розеткообразующие лимфоциты составляют теофиллинрезистентную фракцию. Разница количества розеткообразующих лимфоцитов в контрольной и опытной пробах выявляет содержание теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов. Оценка гуморального звенаСостояние гуморального или В-звена системы иммунитета можно оценить по количеству В-лимфоцитов, что возможно с применением моноклональных антител или реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши, или эритроцитами быка при участии комплемента (ЕАС-розетки). Эти методы не часто имеют большое клиническое значение. Обязательным является оценка концентрации различных классов иммуноглобулинов, продуцируемых производными В-лимфоцитов плазматическими клетками (IgM, IgG, IgA, IgE). Для этой цели пригодны реакция радиальной иммунодиффузии в геле, нефелометрия, а для определения IgE иммуноферментный или радиоиммунный анализ (смотри специальные руководства). Иммуноглобулин D (IgD) в условиях практической медицины как правило не определяют. Определение концентрации сывороточных иммуноглобулиновПринцип классического метода радиальной иммунодиффузии (Mancini, 1963) заключается в определении величины диаметра кольца преципитации, образовавшегося в результате диффузии испытуемой сыворотки в агаре, содержащем моноспецифическую сыворотку против иммуноглобулинов человека (Рис. 9). С этой целью используют моноспецифические сыворотки против иммуноглобулинов человека классов M, G, A, выпущенные научно-исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии г. Нижний Новгород. Перед проведением исследования готовятся разведения диагностических моноспецифических сывороток в мединал-вероналовом буферном растворе; в соответствии с титром, указанном на ампуле диагностических сывороток, определяется объем агар-агара. Смесь разведенных моноспецифических сывороток с определенным объемом агар-агара вносят в чашки Петри, расположенные на горизонтальной поверхности. После формирования равных по объему лунок в агаровом слое с помощью специального пробойника, в них вносят контрольную стандартную сыворотку в разведениях 1:8; 1:4; 1:2; 1:1, а также исследуемые образцы сыворотки пациентов. Чашки инкубируют в эксикаторе. Учет реакции производят через 24 часа для определения концентрации иммуноглобулинов класса G и A. Концентрация иммуноглобулина класса М оценивают через 48 часов. Вычисление концентрации иммуноглобулинов выполняют с учетом данных калибровочной кривой, построенной по значениям диаметров зон преципитации стандартной сыворотки. ^  Исследование фагоцитарной активности лейкоцитовОчень важную информацию для клинической практики часто имеют результаты исследования фагоцитарной активности лейкоцитов. При этом в качестве объектов фагоцитоза можно использовать либо свежие эритроциты барана, либо фиксированные эритроциты барана (эритроцитарный шигеллезный диагностикум для РПГА), либо частицы латекса, либо культуру стафилококка. Необходимо помнить, что во всех этих случаях нормальные величины будут различными. Врач лаборант чаще указывает процент фагоцитоза, фагоцитарное число - количество объектов фагоцитоза на один из ста сосчитанных нейтрофилов, фагоцитарный индекс - количество объектов фагоцитоза на один фагоцитирующий нейтрофил. Информативным показателем также является индекс активности фагоцитов (ИАФ) - показатель предложенный пермским иммунологом, профессором В.Н.Каплиным (1993) [73]. Он вычисляется как отношение числа объектов фагоцитоза, поглощенных активными нейтрофилами, к общему числу неактивных и малоактивных нейтрофилов. Активными нейтрофилами считают поглотившие два и более объектов фагоцитоза. сумма объектов фагоцитоза, поглощенных активными фагоцитами (с поглощением 2-х и более объектов на клетку) ИАФ =  _______________________________________________ ;сумма неактивных и малоактивных фагоцитов (с поглощением не более одного объекта) В наших исследованиях показатели фогоцитарной активности лейкоцитов - процент фагоцитоза и фагоцитарное число определяли рутинным методом с использованием в качестве объектов фагоцитоза эритроцитарного шигеллезного диагностикума для РПГА (реакции прямой гемагглютинации), произведенного институтом вакцин и сывороток г.С.-Петербург. Принцип метода описан в справочнике "Лабораторные методы исследования в клинике (под ред. В.В.Меньшикова, 1987), и заключается в выявлении способности нейтрофилов к неспецифическому захвату объектов, сравнимых по величине с фагоцитами (Рис. 10). Метод осуществляется следующим образом: равные объемы гепаринизированной венозной крови и 1% суспензии эритроцитарного диагностикума смешивали и инкубировали 30 минут в термостате при 37˚ С. Затем готовили мазки и окрашивали гематоксилин-эозином. Для каждого пациента готовили по 2 мазка, в которых подсчитывали по 200 нейтрофилов. Учитывали количество клеток, участвующих в фагоцитозе, среднее количество объектов фагоцитоза, поглощенных одним нейтрофилом, рассчитывали индекс активности фагоцитов. Более трудоемким, но целесообразным считают исследование хемотаксической подвижности лейкоцитов под влиянием различных хематрактантов: плазмы, компонентов комплемента, биологически активных веществ. Р  ис. 10. Определение фагоцитарной активности лейкоцитов Определение общей гемолитической активности комплементаЧасто иммунологическое исследование дополняют характеристикой системы комплемента, изучая общую гемолитическую активность комплемента - способность лизировать эритроциты барана, несущие на своей поверхности антитела, разрушающие их после взаимодействия с комплементом. Чем больше эритроцитов разрушается, тем большей активностью обладает система комплемента добавленной сыворотки. Результат выражают в гемолитических единицах. В наших исследованиях определение общей гемолитической активности комплемента по 50% гемолизу осуществляли по методу, описанному Л.С.Резниковой (1967) [156]. Метод заключается в определении степени гемолиза эритроцитов барана, сенсибилизированных антителами, под влиянием активных компонентов комплемента, содержащихся в исследуемой сыворотке. Для сравнительной оценки гемолизирующей способности сыворотки пациента строили калибровочную кривую. Использовали 5% взвесь эритроцитов барана. Степень гемолиза определялась при добавлении дистиллированной воды в различных соотношениях с объемом эритроцитарной взвеси. После этого готовили гемолитическую систему смешав равные количества растворов гемолитической сыворотки в мединал-вероналовом буфере и 3% взвеси отмытых эритроцитов барана. Смесь инкубировали при 37˚ С в течении 30 минут для сенсибилизации эритроцитов. Для оценки уровня комплемента исследуемую сыворотку разводили 1:10 и разливали в 10 пробирок, смешивая с соответствующим объемом буферного раствора и 1 мл гемолитической системы. Затем инкубировали при 37˚ С в течение 60 минут, охлаждали 10 минут при 4˚ С и центрифугировали 5 минут при 3000 об/мин. После этого определяли оптическую плотность среды в каждой пробирке на фотоколориметре. Количество 50%-ных гемолитических единиц рассчитывали согласно простой пропорции объемов и разведений сыворотки. Определение цикрулирующих иммунных комплексовИсследование циркулирующих иммунных комплексов необходимо при обследовании больных васкулитами, заболеваниями соединительной ткани, легких, бронхиальной астмой и в ряде других клинических ситуаций. Иммунные комплексы состоят из антигена и связанного с ним антитела, часто имеется третий компонент - комплемент, который фиксируется к специальной площадке на иммуноглобулинах и служит для усиления опсонизирующего эффекта иммуноглобулина. Смысл образования таких иммунных комплексов заключается в обеспечении наилучших условий для поглощения фагоцитами чужеродного материала. Для этого на поверхности фагоцитов есть рецепторы - посадочные площадки для Fc-фрагмента иммуноглобулинов (константный фрагмент) и для С3-компонента комплемента (3-й компонент системы комплемента). Отмечено, что наилучшей опсонизирующей способностью обладают иммуноглобулины класса G, в меньшей степени иммуноглобулины класса M. При некоторых патологических состояниях иммунные комплексы могут приобретать патогенные свойства. Это связано с нарушением процессов их поглощения, увеличением скорости образования и изменением состава и свойств иммунных комплексов. Например, если иммунные комплексы образованы с участием иммуноглобулина класса M, то они имеют соответственно гораздо большие размеры, чем комплексы, образованные при участии иммуноглобулина класса G, так как структура иммуноглобулина M является пентамером, включает в себя пять молекул, подобных иммуноглобулину G, соединенных пептидной цепью. В отличие от двухвалентного иммуноглобулина G, иммуноглобулин M имеет 10 валентностей и способен связывать большее количество антигенного материала. Крупные иммунные комплексы хуже элиминируются и накапливаются в жидких средах и тканях организма. Активация комплемента, входящего в состав иммунного комплекса, на поверхности базальных и клеточных мембран сопровождается образованием мембраноатакующего комплекса комплемента и повреждением тканей организма. Эти процессы лежат в основе ^  иммунокомплексных заболеваний. Свойства иммунных комплексов и их способность элиминироваться из кровотока зависят также от антигена, входящего в их состав. Сами антигены могут иметь сродство к собственным тканям организма, фиксироваться на них или приводить к различным нарушениям систем обеспечения гомеостаза организма человека. Оценку количества и состава циркулирующих иммунных комплексов производят с помощью различных методик: методом осаждения полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000 (причем разные процентные разведения этого реактива способны осаждать комплексы различных размеров, чем выше концентрация полиэтеленгликоля, тем мельче размер иммунных комплексов можно определить); с использованием моноклональных антител к С1-компоненту комплемента, выявляющих иммунные комплексы, содержащие комплемент; можно использовать антитела к иммуноглобулинам после осаждения иммунных комплексов и другие методики. Мы определяли количество циркулирующих иммунных комплексов методом осаждения 3.5% раствором полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 по принципам, описанным П.Фальк (Иммунологические методы /Под ред. Г.Фримеля, 1987) [231], В.В.Меньшиковым (Лабораторные методы исследования в клинике, 1987) [93]. Реакция основана на способности полиэтиленгликоля вызывать преципитацию циркулирующих иммунных комплексов с помутнением раствора. Для этого к 0.4 мл разведенной в 3 раза исследуемой сыворотке добавляли 3.6 мл раствора полиэтиленгликоля, в контрольной пробирке - 3.6 мл боратного буфера. После часовой инкубации при комнатной температуре преципитат осаждали центрифугированием, отмывали полиэтиленгликолем и растворяли в 5.0 мл 0.1 н. раствора едкого натра. Результат оценивали по разнице оптической плотности в контрольной и опытной пробирках и выражали в единицах оптической плотности. Другие иммунологические тестыТочная характеристика функциональной активности Т-клеточного звена требует проведения реакции бласттрансформации лимфоцитов с выполнением тестов спонтанной бласттрансформации и стимулированной митогенами бласттрансформации с применением фитогемагглютинина, конканавалина А, митогена лаконоса (смотри специальные руководства). В последнее время хорошо оснащенные лаборатории начали определять концентрацию некоторых цитокинов сыворотки крови, вырабатываемых лимфоцитами и другими лейкоцитами с помощью иммуноферментного или радиоиммунного анализа, например интерлейкина-1, интерлейкина-2, эозинофильного катионного белка и другие. Оценка результатов иммунологических тестовТрадиционным методом оценки иммунограммы является сравнение величин изучаемых показателей со средними величинами, полученными при обследовании практически здоровых лиц определенной возрастной группы. Вместе с тем, такой подход позволяет выявить исключительно только грубые дефекты системы иммунитета, которые встречаются достаточно редко. Величины иммунологических параметров, получаемые при скрининговом обследовании пациента не позволяют в полной мере судить о состоянии системы иммунитета. Понятие нормы в работе системы иммунитета соответствует режиму оптимального функционирования при осуществлении противомикробной, противовирусной, противоопухолевой защиты, а также иммунологической толерантности, т.е. ареактивности по отношению к собственным тканям организма. Следовательно, нормальное состояние это не застывший образ, а закономерно изменяющееся соотношение иммунокомпетентных клеток и гуморальных факторов. Поэтому отдельные параметры при оценке системы иммунитета трудно поддаются оценке - очень велик разброс нормальных величин. Но, при наблюдении в течение 2-4 недель можно заметить, что большинство параметров все время изменяются. Существуют суточные, околодвухнедельные, месячные, сезонные колебания показателей иммунного статуса, а также возрастные изменения. Считается, что сохранение этих ритмов в динамике величин иммунологических показателей является нормальным. Эти обстоятельства делают метод оценки иммунограммы путем сравнения со средними величинами, полученными при обследовании практически здоровых лиц, малоинформативным в большинстве случаев клинической практики. Более информативным является метод изучения соотношения различных параметров системы иммунитета. Например, большой популярностью у иммунологов пользуется метод, называемый "иммунологический компас" или "иммунные часы" (Чередеев А.Н., Ковальчук А.В., 1984), который заключается в вычислении соотношения теофиллинрезистентных и теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов. Многочисленные наблюдения за изменениями этого показателя в различных клинических ситуациях позволяют его рекомендовать как точный критерий оценки функционального статуса Т-клеточного звена [81]. На функциональную активность системы иммунитета влияют так же и взаимосвязи между Т- и В-клеточными звеньями, а также соотношение с активностью фагоцитирующих клеток. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям