|
Скачать 1.18 Mb.
|
^
Фолликулин (эстрон) – один из женских половых гормонов (эстрогенов) имеет стероидную структуру: ![]() а) Реакция с концентрированной серной кислотой. При взаимодействии фолликулина с концентрированной серной кислотой образуется эфирное соединение соломенно-желтого цвета (фолликулинсульфат): ![]() ^ Пробирку с 20 каплями спиртового раствора фолликулина помещают на 5-10 минут в кипящую водяную баню для удаления спирта. Затем добавляют 20 капель концентрированной серной кислоты и пробу снова выдерживают 5-10 минут в кипящей водяной бане. Жидкость постепенно приобретает соломенно-желтую окраску, переходящую в оранжевую и красно-бурую. Если для анализа берут масляный раствор фолликулина, то реакция идет при комнатной температуре. В смеси из 3-5 капель масляного раствора фолликулина и 2 капель концентрированной серной кислоты развивается соломенно-желтое окрашивание. ^ При взаимодействии фолликулина с реактивом Фолина появляется синее окрашивание, характерное для фенольного радикала. ^ В пробирку вносят 5 капель раствора фолликулина, 2-3 капли 30%-го раствора гидроксида натрия и 2-3 капли реактива Фолина. Смесь окрашивается в синий цвет. ^ Ход работы. В пробирку наливают 1 мл спиртового раствора фолликулина, 1 мл 10%-го раствора карбоната натрия и 1 мл диазореактива (0,5 мл 1%-го раствора сульфаниловой кислоты смешивают с 0,5 мл 5%-го раствора нитрита натрия). Постепенно возникает бледно-желтое окрашивание. ^ При взаимодействии фолликулина с гидроксидом натрия образуется хорошо растворимый фенолят фолликулина. Ход работы. В две сухие пробирки наливают по 10 капель спиртового раствора фолликулина. В первую пробирку добавляют 1 мл дистиллированной воды и отмечают образование эмульсии фолликулина. Во вторую пробирку прибавляют 1 мл 30%-го раствора гидроксида натрия и содержимое перемешивают. Во второй пробирке помутнения раствора нет, так как в щелочной среде образуется растворимый фенолят эстрона. ^ Ход работы. В сухую пробирку вносят 5 капель раствора фолликулина, 5 капель 10%-го раствора гидроксида натрия и 5 капель 2%-го спиртового раствора м-динитробензола. Через 5-8 мин развивается красное окрашивание. ^ Кортикостероиды – гормоны, синтез которых происходит в корковом слое надпочечников. К кортикостероидам относятся дезоксикортикостерон, альдостерон, кортикостерон, гидрокортизон (кортизол) и кортизон. Все они – вещества стероидной структуры, в молекулах которых содержатся кето- и гидроксигруппы: ^ Кортизол, как и другие кортикостероиды, дает цветную реакцию с синим тетразолием, которая основана на его восстановлении за счет гидроксикетонной группы у 17-го углеродного атома гормона. ^ В пробирку наливают 1 мл спиртового раствора котризола (20 мкг/мл), 5 капель 10%-го раствора гидроксида тетра-метиламмония и 5 капель 5%-го спиртового раствора синего тетразолия. Содержимое пробирки перемешивают и помещают в темноту на 25 мин. Жидкость окрашивается в розовый цвет. ^ Ход работы. В пробирке смешивают 1 каплю масляного раствора дезоксикортикостерон-ацетата, 3-4 капли 96%-го этанола и 3-4 капли концентрированной серной кислоты. Смесь нагревают до кипения, охлаждают, добавляют еще 15 капель концентрированной серной кислоты и снова нагревают до кипения. Появляется синяя окраска. в) Качественная реакция на 17-кетостероиды в моче (реакция Циммермана) 17-кетостероиды являются конечным продуктом обмена гормонов коры надпочечников и половых гормонов. Они характеризуются наличием кетогруппы при 17-м углеродном атоме циклопентанпергидрофенантренового ядра. Различные 17-кетостеро-иды отличаются наличием или отсутствием функциональных групп у 11-го атома углерода, либо ароматичной структурой кольца А. Общая химическая формула 17-кетостероида: ![]() В моче 17-кетостероиды находятся в основном в виде глюкуронидов. Содержание 17-кетостероидов в суточной моче здоровых людей зависит от возраста и пола. Так, у детей до 6 лет оно равно 3-4 мг/сутки, а с 6 до 12 лет – 5-10 мг/сутки. Суточная моча женщин детородного возраста содержит 6-15 мг 17-кетостероидов, а мужчин – 15-25 мг. Количество 17-кетостероидов в моче меняется при гипер- и гипофункции надпочечников, аденогипофиза и семенников. Так, при болезни Аддисона оно составляет 1/5-1/3 нормы, а при болезни Симмондса почти равно нулю. Содержание 17-кетостероидов в моче также понижено при гипотиреозе, циррозе печени, гипофизар-ной карликовости, недостаточной функции семенников. Количество 17-кетостероидов в моче повышено при акромегалии, синдроме Иценко–Кушинга, андрогенитальном синдроме, опухолях семенников и надпочечников. Так при опухолях семенников оно достигает 1500 мг/сутки, а при опухолях надпочечников – до 2000 мг/сутки. Реакция Циммермана основана на взаимодействии 17-кетосте-роидов с метадинитробензолом в щелочной среде с образованием продуктов конденсации вишнево-красного или розово-фиолетового цвета. ^ В сухую пробирку вносят 5 капель мочи, 5 капель 2%-го спиртового раствора м-динитробензола и 5 капель 30%-го раствора гидроксида натрия, перемешивают. Через 2-3 мин появляется вишнево-красное окрашивание, характерное для 17-кетостероидов. Эту же реакцию можно сделать иначе: пробирку с 20 каплями мочи наклоняют под углом 45о и медленно, осторожно по стенке добавляют 30 капель 2%-го спиртового раствора мета-динитробензола. Затем также по стенке прибавляют 6 капель 24%-го спиртового раствора гидроксида натрия. Верхний слой окрашивается в розово-фиолетовый цвет ^
Общие выводы по работе: ^
Вопросы для самостоятельной подготовки
ПРИЛОЖЕНИЯ Сроки и условия хранения исследуемой пробы при определении некоторых показателей крови При исследовании крови следует знать и учитывать целый ряд факторов: в противном случае возможны необъективные интерпре-тации полученных результатов. Прежде всего надо иметь в виду, что при наличии гемолиза некоторые биохимические показатели остаются без изменений, в то же время другие могут значительно отличаться от тех же показателей в негемолизированной сыворотке. В частности, гемолиз мешает опреде-лению концентрации общего белка, билирубина, холестерола, железа, мочевины, меди, неорганического фосфора, однако не оказывает существенного влияния на такие показатели, как активность холин-эстеразы, концентрация глюкозы. На некоторые показатели оказывает влияние присутствие антикоа-гулянтов. Так, стабилизация крови гепарином, цитратом или оксала-том мешает определению меди. В то же время присутствие антикоа-гулянтов не влияет на определение неорганического фосфора. Наиболее важное значение имеют продолжительность хранения исследуемой пробы (с момента взятия крови и начала анализа) и условия, при которых она хранится. Концентрация неорганического фосфора остается стабильной в течение 7 суток при хранении при +4 оС, но только 2 дня при комнатной температуре. С увеличением продолжительности срока хранения сыворотки содержание неорга-нического фосфора возрастает за счет распада органических веществ, содержащих фосфор (АТФ, глюкозо-6-фосфат и др.). Определение билирубина должно проводиться по возможности быстро, сыворотку нужно хранить в темном месте. Концентрация кальция в сыворотке крови не меняется в течение 10 дней как при +4 оС, так и при 20-25 оС. Концентрация холестерина достаточно стабильна в течение 6 суток при любых условиях хранения сыворотки крови. За такой же период (6 суток) не происходит серьезных изменений в содержании общего белка, однако в этом случае сыворотку необходимо хранить при температуре +4 оС. Концентрация меди остается без изменений на протяжении 14 дней, магния – 7. Концентрация железа не меняется в сыворотке в течение 7 суток, если ее хранить при +4 оС, и 4 дня – при хранении в условиях комнатной температуры. Активность холинэсте-разы устойчива в сыворотке крови на протяжении 7 дней. Определение концентрации глюкозы должно проводиться в течение 4 часов с момента взятия крови, так как при длительном хранении содержание сахара снижается. При удалении белка концен-трация глюкозы в надосадочной жидкости достаточно стабильна в течение 2-3 дней. Очень лабильна концентрация промежуточного метаболита глюкозы – пирувата. Для определения этого показателя кровь необходимо брать в охлажденные пробирки, не следует использовать жгут, а анализ проводят сразу же после взятия пробы. Таблица перевода основных биохимических показателей в систему СИ
основные Вопросы к экзаменационным билетам ^
БЕЛКИ. АМИНОКИСЛОТЫ
ФЕРМЕНТЫ
^
ВИТАМИНЫ
биологическое окисление
^
переваривания углеводов у животных с четырехкамерным желудком.
^
^
Биологические мембраны
ГОРМОНЫ
содержание Предисловие ..........................................................................…..….…..…3 Раздел 1. Методы исследования в биохимии …………. 4 Работа 1. Колориметрический метод определения концент- рации окрашенных веществ в растворах. Принцип и техника колориметрирования. Устройство и правила работы на КФК-2 ......................…..........…........… 4 Раздел 2. состав и свойства белков …………………….... 11 2.1. анализ аминокислотного состава белков …….…11 Работа 2. Цветные реакции на белки ..............................….…………. 11 Работа 3. Выделение белков из тканей и биологических жидкостей. Изучение состава протеинов …………….….... 19 2.2. изучение некоторых свойств белков Работа 4. Растворимость и реакции осаждения белков ………………24 Вопросы для самостоятельной подготовки ………………………. .. 29 РАЗДЕЛ 3. выделение и изучение нуклеопротеинов ... 31 Работа 5. Качественные реакции на продукты гидролиза нуклеопротеинов дрожжей ………………………………… 31 Работа 6. Выделение дезоксирибонуклеопротеина из селезенки …... 32 Работа 7. Количественное определение рибозы по методу Мейбаум 34 Вопросы для самостоятельной подготовки ………………………. ... 35 РАЗДЕЛ 4. ФЕРМЕНТЫ ……………………………………………… 37 Работа 8. Ознакомление с действием некоторых ферментов ….….… 37 Работа 9. Изучение свойств ферментов, влияние на активность фермента реакции среды и температуры. Субстратная специфичность действия ………………………….………... 39 Работа 10. Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови по методу Кинга ...................….....….... 42 Вопросы для самостоятельной подготовки ……………………….. .. 44 РАЗДЕЛ 5. ВИТАМИНЫ …………………………………………….... 45 Работа 11. Качественные реакции на витамины .……….……......…... 45 Работа 12. Количественное определение аскорбиновой кислоты в пищевых продуктах и моче ........... ...…....…….. 60 Вопросы для самостоятельной подготовки ………………………. .. 64 РАЗДЕЛ 6. ОБМЕН ВЕЩЕСТВ ………………………………………..66 6.1. ХИМИЯ И ОБМЕН УГЛЕВОДОВ ………………………………..66 Работа 13. Ортотолуидиновый метод определения глюкозы в крови ......................................................................……..…. 66 Работа 14. Глюкозооксидазный метод определения глюкозы в биологических жидкостях ………………………….…….. 67 Работа 15. Количественное определение пировиноградной кислоты в крови модифицированным методом Умбрайта 70 Вопросы для самостоятельной подготовки ……………………….. .. 73 6.2. ХИМИЯ И ОБМЕН ЛИПИДОВ ………………………………….. 74 Работа 16. Количественное определение холестерина в сыворотке крови методом Илька .............................……. 74 Работа 17. Определение концентрации общего холестерина в сыворотке и плазме крови энзиматическим методом ………………………………...……………..…… 76 Работа 18. Количественное определение холестерина липопротеинов высоной плотности в сыворотке крови человека ………………………………………….….. 78 Работа 19. Экспресс-метод определения содержания кетоновых тел в крови, моче и молоке ..................….....…. 80 Вопросы для самостоятельной подготовки ……………………….. .. 82 6.3. Химия и обмен белков и аминокислот ……………. 83 Работа 20. Количественное определение белка в сыворотке крови биуретовым методом ....................…....................… 83 Вопросы для самостоятельной подготовки ……………………….. .. 86 6.4. ВОДНО-МИНЕРАЛЬНЫЙ ОБМЕН …………………………….. 87 Работа 21. Количественное определение кальция в сыворотке крови по методу Ваарда ..........................................………. 87 Работа 22. Определение неорганического фосфора в крови …..…..… 89 РАЗДЕЛ 7. ГОРМОНЫ ………………………………………………… 91 Работа 23. Качественные реакции на гормоны ...........................…..… 91 Перечень названий рефератов по теме «Гормоны» ..............…..….. 101 Вопросы для самостоятельной подготовки ….………………… …. 102 Приложения.………………………………………………………….... 104 Сроки и условия хранения исследуемой пробы при определении некоторых показателей крови......................….....……………………. 104 Таблица перевода основных биохимических показателей в систему СИ .........................................................…..........…..………. 105 Основные вопросы к экзаменационным билетам по биологической химии ...................................................................................................... 106 Учебное издание ^ по биологической химии Методические указания к лабораторным работам и вопросы для самостоятельной подготовки студентов 2-го курса эколого-биологического факультета Составители: М. Н. Яковлева, канд. биол. наук; В. В. Осташкова, канд. биол. наук; Я. П. Нижник, канд. хим. наук. Редактор Л. П. Соколова Подписано в печать 10.11.07. Формат 60 х 84 /16. Бумага газетная. Офсетная печать. 6 уч.- изд. л. Тираж 600 экз. Изд. № 261. Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ПЕТРОЗАВОДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Отпечатано в издательстве Петр ГУ 185910, Петрозаводск, пр. Ленина, 33 |