С использованием специальных процедур

2.3.2. Реактивы

2.4. Характеристика методики выполнения ПМУ "Проба на совместимость перед переливанием крови"

2.4.1 Требования к образцам крови.

2.4.5.1.1 Проба на совместимость по группам крови системы АВО (на плоскости)

Порядок проведения исследования:

Проба производится на планшете со смачиваемой поверхностью.

1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. и группу крови реципиента, Ф.И.О. и группу крови донора и номер контейнера с кровью.

2. Из пробирки с исследуемой кровью реципиента осторожно взять пипеткой сыворотку и нанести на планшет 1 большую каплю (100 мкл).

3. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая приготовлена для трансфузии именно этому больному, взять маленькую каплю (10 мкл) донорских эритроцитов и нанести рядом с сывороткой реципиента (соотношение сыворотки и эритроцитов 10:1).

3. Капли перемешать стеклянной палочкой.

4. Наблюдать за реакцией 5 минут при постоянном покачивании планшета. По истечении этого времени добавить 1-2 капли (50-100 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%.

Трактовка результатов реакции.

Реакция в капле может быть положительной или отрицательной.

а) Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных агрегатов. Кровь не совместима, переливать нельзя! (см. рисунок 1).



Рисунок 1. Кровь реципиента и донора несовместима


б) При отрицательном результате (-) капля остаётся гомогенно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Кровь донора совместима с кровью реципиента (см. рисунок 2).



Рисунок 2. Кровь донора совместима с кровью реципиента


^ 2.4.5.2 Пробы на индивидуальную совместимость по системе Резус

2.4.5.2.1 Проба на совместимость с использованием 33 % раствора полиглюкина.

Порядок проведения исследования:

1. Для исследования взять пробирку (центрифужную или любую другую вместимостью не менее 10 мл). Промаркировать пробирку, для чего указать Ф.И.О. и группу крови реципиента и Ф.И.О донора, номер контейнера с кровью.

2. Из пробирки с исследуемой кровью реципиента осторожно взять пипеткой сыворотку и внести 2 капли (100 мкл) на дно пробирки.

3. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая приготовлена для трансфузии именно этому больному, взять одну каплю (50 мкл) донорских эритроцитов внести в эту же пробирку, добавить 1 каплю (50 мкл) 33% раствора полиглюкина.

5. Содержимое пробирки перемешать путём встряхивания и затем медленно поворачивать по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по ее стенкам. Эту процедуру выполнять в течение пяти минут.

6. Через пять минут в пробирку добавить по 3-5 мл физ. раствора. Содержимое пробирок перемешать 2-3-кратным перевертыванием пробирок (не встряхивая!)

Трактовка результатов реакции.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом или через лупу.

Если в пробирке наблюдается агглютинация в виде взвеси мелких или крупных красных комочков на фоне просветлённой или полностью обесцвеченной жидкости значит, кровь донора не совместима с кровью реципиента. Переливать нельзя!

Если в пробирке равномерно окрашенная слегка опалесцирующая жидкость без признаков агглютинации эритроцитов – это значит, что кровь донора совместима с кровью реципиента в отношении антигенов системы Резус и другим клинически значимым системам (см. рисунок 3).




Агглютинация есть- Агглютинации нет-

кровь несовместима. кровь совместима.

Рисунок 3. Результаты исследования проб на совместимость по системе Резус (с использованием 33% раствора полиглюкина и 10% раствора желатина).

^ 2.4.5.2.2 Проба на совместимость с использованием 10 % раствора желатина.

Раствор желатина необходимо тщательно просмотреть перед употреблением. При помутнении или появлении хлопьев, а также при потере свойств застудневать при t+4 ⁰С…+8 ⁰С желатин непригоден.

Порядок проведения исследования:

1. Для исследования взять пробирку (ёмкость не менее 10 мл). Промаркировать пробирку, для чего указать Ф.И.О., группу крови реципиента и донора, номер контейнера с кровью.

2. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая приготовлена для трансфузии именно этому больному, взять одну каплю (50 мкл) донорских эритроцитов внести в пробирку, добавить 2 капли (100 мкл) 10% раствора желатина, прогретого на водяной бане до разжижения при температуре t+46 ⁰С…+48 ⁰С. Из пробирки с кровью реципиента осторожно взять пипеткой сыворотку и внести 2 капли (100 мкл) на дно пробирки.

3. Содержимое пробирки встряхнуть для перемешивания и поместить на водяную баню (t+46 ⁰С…+48 ⁰С) на 15 минут или в термостат (t+46⁰С…+48⁰С) на 45 минут.

4.После окончания инкубации пробирку извлечь, добавить 5-8 мл физ. раствора, содержимое пробирки перемешать путём одно-двухкратного перевёртывания и оценить результат исследования.

Трактовка результатов реакции.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом или через лупу, а затем просмотреть путём микроскопирования. Для этого капля содержимого пробирки поместить на предметное стекло и просмотреть под малым увеличением.

Если в пробирке наблюдается агглютинация в виде взвеси мелких или крупных красных комочков на фоне просветлённой или полностью обесцвеченной жидкости - это значит, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита.

Если в пробирке равномерно окрашенная, слегка опалесцирующая жидкость без признаков агглютинации эритроцитов - это значит, что кровь донора совместима с кровью реципиента в отношении антигенов системы Резус и другим клинически значимым системам (см. рисунок 3).


^ 2.4.5.3 Проба на совместимость в гелевом тесте

При постановке в гелевом тесте пробы на совместимость проводятся сразу по системе АВО (в микропробирке Neutral) и проба на совместимость по системе Резус (в микропробирке Coombs).

Порядок проведения исследования:

1. Перед исследованием проверить диагностические карты. Не использовать карты, если в геле имеются взвешенные пузырьки, микропробирка не содержит надосадочной жидкости, наблюдается уменьшение объёма геля или его растрескивание.

2. Микропробирки подписываются (фамилия реципиента и номер донорского образца).

. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая приготовлена для трансфузии именно этому больному, автоматической пипеткой взять 10 мкл донорских эритроцитов поместить в центрифужную пробирку.

4. Добавить 1 мл разводящего раствора.

5. Вскрыть необходимое количество микропробирок (по одной микропробирке Coombs и Neutral).

6. Автоматической пипеткой внести по 50 мкл разведенных донорских эритроцитов в микропробирки Coombs и Neutral.

7. Добавить в обе микропробирки по 25 мкл сыворотки реципиента.

8. Инкубировать при t+37⁰С 15 минут.

9. После инкубации карточку центрифугировать в центрифуге для гелевых карт (время и скорость задаются автоматически).

Трактовка результатов:

Если осадок эритроцитов расположен на дне микропробирки, то проба считается совместимой (см. рисунок 4 №1). Если агглютинаты задерживаются на поверхности геля или в его толще, то проба несовместима (см. рисунок 4 №№2-6).


№1 №2 №3 №4 №5 №6



Рисунок 4. Результаты исследования проб на индивидуальную совместимость по системе Резус гелевой методикой.


^ 2.4.5.4 Биологическая проба

Для проведения биологической пробы используются подготовленные к трансфузии кровь и её компоненты.

Биологическую пробу проводят независимо от объема гемотрансфузионной среды и скорости ее введения. При необходимости переливания нескольких доз крови и её компонентов биологическую пробу проводят перед началом переливания каждой новой дозы.

Техника проведения

Однократно переливается 10 мл гемотрансфузионной среды со скоростью 2-3 мл (40-60 капель) в минуту, затем переливание прекращают и в течение 3 мин наблюдают за реципиентом, контролируя у него пульс, дыхание, артериальное давление, общее состояние, цвет кожи, измеряют температуру тела. Такую процедуру повторяют еще дважды. Появление в этот период даже одного из таких клинических симптомов, как озноб, боли в пояснице, чувство жара и стеснения в груди, головной боли, тошноты или рвоты, требует немедленного прекращения трансфузии и отказа от переливания данной трансфузионной среды. Образец крови направить в специализированную лабораторию службы крови для проведения индивидуального подбора эритроцитной массы.

Экстренность трансфузии компонентов крови не освобождает от выполнения биологической пробы. Во время ее проведения возможно продолжение переливания солевых растворов.

При переливании крови и её компонентов под наркозом о реакции или начинающихся осложнениях судят по немотивированному усилению кровоточивости в операционной ране, снижению артериального давления и учащению пульса, изменению цвета мочи при катетеризации мочевого пузыря, а также по результатам пробы на выявление раннего гемолиза. В таких случаях переливание данной гемотрансфузионной среды прекращается, врач-хирург и врач анестезиолог-реаниматолог совместно с врачом-трансфузиологом обязаны выяснить причину гемодинамических нарушений. Если ничто, кроме трансфузии, не могло их вызвать, то данная гемотрансфузионная среда не переливается, вопрос дальнейшей трансфузионной терапии решается ими в зависимости от клинических и лабораторных данных.

Биологическая проба, также как и проба на индивидуальную совместимость, обязательно проводится и в тех случаях, когда переливается индивидуально подобранная в лаборатории или фенотипированная эритроцитная масса или взвесь.

После окончания переливания донорский контейнер с небольшим количеством оставшейся гемотрансфузионной среды, использованная для проведения проб на индивидуальную совместимость, подлежит обязательному сохранению в течение 48 часов при температуре t+2⁰С…+8⁰С.

Реципиент после переливания соблюдает в течение двух часов постельный режим и наблюдается лечащим или дежурным врачом. Ежечасно ему измеряют температуру тела, артериальное давление, фиксируя эти показатели в медицинской карте больного. Контролируется наличие и почасовой объем мочеотделения и сохранение нормального цвета мочи. Появление красной окраски мочи при сохранении прозрачности свидетельствует об остром гемолизе. На следующий день после переливания обязательно производят клинический анализ крови и мочи.

При амбулаторном проведении гемотрансфузии реципиент после окончания переливания должен находиться под наблюдением врача не менее трех часов. Только при отсутствии каких-либо реакций, наличии стабильных показателей артериального давления и пульса, нормальном мочеотделении он может быть отпущен из лечебного учреждения.


^ 2.4.5.5 Регистрация результатов проб на совместимость

Результат контрольных исследований проб на совместимость (раздельно по каждому виду) занести в трансфузионную карту медицинской карты больного (см. приложение 2).


^ 2.4.6 Индивидуальный подбор

Индивидуальный подбор переносчиков газов крови проводится в учреждениях службы крови (СПК или ОПК) врачом клинической лабораторной диагностики, имеющим специальную подготовку по иммуногематологии на специализированных циклах и на базе учреждений службы крови РТ.

^ 2.4.6.1 Показания к индивидуальному подбору

• 
  отягощённый трансфузионный анамнез (наличие в анамнезе посттрансфузионных реакций или осложнений на предыдущие трансфузии, многократные трансфузии)
  
• 
  отягощённый акушерский анамнез (наличие в анамнезе рождения детей с ГБН, мёртворождений, выкидышей на поздних сроках);
  
• 
  гемолитическая болезнь новорожденных;
  
• 
  затруднения при определении групповой и/или резус-принадлежности крови пациента,
  
• 
  положительный или сомнительный результат хотя бы одной из проб на индивидуальную совместимость или биологической пробы;
  
• 
  наличие изоиммунных антиэритроцитарных антител любой специфичности;
  
• 
  многократные трансфузии.