Рис. Колонии актиномицетов на питательной среде.
^
1. Морфологические св-ва возбудителей туберкулеза
а) Кокки
б) Тонкие длинные палочки
в) Короткие палочки
г) Зернистые формы
д) Наличие спор
2. Химические в-ва, определяющие кислотоустойчивость микобактерий
а) Липиды
б) Белки
в) углеводы
3. Материал для исследования при проказе
а) Мокрота
б) Соскоб слизистой перегородки носа
в) Кожные скарификаты
г) Содержимое распадающихся узлов
д) Кровь
е) Моча
ж) испражнения.
4. Методы лабораторной диагностики туберкулеза
а) Бактериоскопический
б) бактериологический
в) Биологический
г) Аллергический
5. Тесты, характерные для человеческого вида возбудителя
а) Ниацин-тест (образование никотиновой кислоты)
б) Генерализованный процесс у морской свинки
в) Генерализованный процесс у кроликов.
6. Цели использования кожно-аллергических проб при туберкулезе
а) Для диагностики
б) Контроль для ревакцинации
7. Препараты, используемые для кожно-аллергических проб при туберкулезе.
а) Тулярин
б) Бруцеллин
в) Туберкулин
г) РРД
8. В каком возрасте производится вакцинация против туберкулеза
а) Первая неделя жизни
б) 2-3 года
в) 6-7 лет
Занятие № 10.
Тема занятия: «Возбудители сифилиса. Значение спирохет в развитии язвенно-некротического гингивостоматита Венсана».
Учебная цель:
Изучить морфологию и биологические свойства бледной спирохеты, лептоспиры и возвратного тифа.
Освоить основные методы диагностики инфекций, вызванных патогенными спирохетами.
Ознакомиться с препаратами для специфической профилактики и лечения инфекций вызванных патогенными спирохетами.
Студент должен знать:
Классификацию спирохет и их основные биологические свойства.
Методы, применяемые для диагностики спирохет.
Студент должен уметь:
Проводить забор материала для исследования.
Овладеть матодами диагностики сифилиса.
^
Морфологические и биологические свойства бледной спирохеты.
Серодиагностика сифилиса: а) реакция Кана; б) реакция Вассермана.
Проявление сифилиса в полости рта.
Язвенно-некротический гингивостоматит Венсана.
^
Зарисовать возбудителя сифилиса: (Окраска: метод серебрения, метод Романовского-Гимзы и нативный препарат в темном поле зрения). (Таблица).
Серологический метод диагностики. Демонстрационная реакция связывания комплемента Вассермана с исследуемой сывороткой крови пациента.
Серологический метод диагностики. Демонстрация реакции микропреципитации с кардиолипиновым антигеном.
Трепонемальный тест: теоретический разбор реакции микроге-магглютинации.
^
Трепонемы чрезвычайно чувствительны к воздействию различных факторов внешней среды (температура, высушивание и др.); на искусственных питательных средах культивируются с большим трудом, что ограничивает использование бактериологического метода в диагностике сифилиса.
Спирохеты
В силу ряда морфологических и биологических свойств спирохеты выделены в самостоятельный порядок Spirochaetales, который включает два семейства: Spirochaetaceae и Leptospiraceae. Семейство Spirochaetaceae содержит 7 родов: Borrelia, Brachysplra, Cristispira, Leptonema, Serpulina, Spirochaeta, Treponema. Для человека патогенны только боррелии и трепонемы. В семейство Leptospiraceae включен один род Leptospira. Его представители патогенны для человека и многих видов животных.
Спирохеты (от греч. speira — завиток, chaite — волосы) — спиралевидной формы подвижные бактерии размером 0,1— 3,0х5-250мкм; одноклеточные, возможно, за исключением Spirochaeta plicatilis. Все спирохеты грамотрицательны.
Центральной структурой клетки является протоплазматический цилиндр, в котором содержатся цитоплазма, нуклеоид, рибосомы и различные комплексы ферментов. Протоплазматический цилиндр окружен комплексом цитоплазматическая мембрана + клеточная стенка, содержащая пептидогликан. Протоплазматический цилиндр имеет постоянную спиралевидную форму, благодаря пептидогликану, образуя первичные завитки. Их число, тип, шаг, высота, угол наклона варьируют у разных видов и играют важную систематическую роль. Вторичные завитки у спирохет образуются в результате изгиба всего тела. Вокруг спиралевидного цитоплазматического цилиндра располагается периплазматический жгутик (жгутики). Один конец каждого жгутика прикреплен к одному из полюсов протоплазматического цилиндра, а другой — к последнему примерно посередине клетки. Общее количество периплазматических жгутиков на клетку варьирует от двух до ста и более. Во всех случаях половина из них прикреплена к одному полюсу, а другая половина — к другому полюсу. Периплазматические жгутики спиралевидно обвивают протоплазматический цилиндр. Их совокупность образует так называемую осевую нить. Поверх жгутиков (осевой нити) располагается многослойная наружная мембрана, которую часто называют наружной оболочкой спирохеты. Наружная мембрана полностью окружает спиралевидный протоплазматический цилиндр, так что жгутик окружен наружной мембраной и расположен между ней и цилиндром: поэтому он и получил название периплазматического жгутика, или эндожгутика. Он является важным компонентом аппарата подвижности спирохет. Основные отличия периплазматических жгутиков от экзоцеллюлярных жгутиков других бактерий в том, что они, во-первых, постоянно обвиваются вокруг тела клетки (ее протоплазматического цилиндра) и, во-вторых, полностью расположены внутри клетки, будучи окружены наружной мембраной. Вследствие этого подвижность спирохет отличается от подвижности других бактерий, у которых она осуществляется в жидкой среде за счет вращения жгутиков в направлении по часовой или против часовой стрелки, в зависимости от хемотаксических сигналов. Спирохеты обладают тремя основными типами движения в жидкой среде: вращательным вокруг своей оси, поступательным и сгибательным. Клетки спирохет сохраняют подвижность в среде с относительно высокой вязкостью, при которой другие жгутиковые бактерии утрачивают подвижность.
По типу дыхания спирохеты — анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы и аэробы. Хемоорганотрофы. Источниками углерода и энергии для них служат углеводы, аминокислоты, жирные кислоты. Встречаются в природе как свободноживущие в воде и почве или паразитирующие в организме животных и человека. Различные виды непатогенных или условно-патогенных спирохет постоянно присутствуют в полости рта человека.
Размножаются спирохеты путем бинарного деления. При неблагоприятных условиях среды спирохеты могут превращаться в спирохетальные цисты. Спирохеты свертываются в клубок и выделяют слизь, которая, уплотняясь, образует оболочку цисты.
^
Сифилис — циклически протекающее венерическое заболевание человека, вызываемое бледной спирохетой; I стадия проявляется твердым шанкром (от фр. chancre — язва), II стадия — поражением стенки сосудов и различными сыпями, III — гуммами в различных органах с поражением нервной системы. Гумма (от лат. gummi — камедь) — хронический инфильтрат в виде узла, склонный к распаду и изъязвлению. Сифилитическая гумма (син.: сифилитическая гранулема, сифилид гуммозный, сифилома третичная) — безболезненная полушаровидная гумма, являющаяся проявлением третичного активного сифилиса. Возбудитель — Treponema pallidum — был открыт в 1905г. Ф. Шаудином и Э. Гофманом.
Т.pallidum — микроорганизм спиралевидной формы, размерами 0,09-0,18х6-20мкм. Число завитков спирали от 8 до 12, завитки равномерны, расположены друг от друга на одинаковом расстоянии около 1мкм, высота по направлению к концам уменьшается. В электронном микроскопе вид змеи или дождевого червя. На обоих концах трепонемы расположены блефаропласты скрепленными к ним жгутиками, число которых варьирует от 2 до нескольких, они образуют осевую нить, закрученную вокруг протоплазматического цилиндра спирохеты. При неблагоприятных условиях может образовывать цисты. В организме животных может возникать мукополисахаридной природы капсулоподобный чехол.
Трепонема плохо окрашивается анилиновыми красителями, в связи с чем возбудитель сифилиса и получил название бледной спирохеты. Восстанавливает нитрат серебра в металлическое серебро, которое откладывается на поверхности микроба и делает его видимым в тканях: при окраске по Морозову трепонемы выглядят коричневыми или почти черными. При окраске по Романовскому-Гимзе приобретают бледно-розовый цвет.
Трепонемы обычно размножаются поперечным делением, при этом разделившиеся клетки могут в течение некоторого времени прилегать друг к другу. Время деления — около 30 ч.
Живые трепонемы очень подвижны, совершают движения вокруг собственной продольной оси, а также сгибательное, волнообразное и поступательное движение.
До настоящего времени пока нет такого метода, при котором бы удавалось стабильно получать культуры трепонем. Патогенные для человека бледные трепонемы никогда не удавалось культивировать на искусственных питательных средах, в куриных эмбрионах или культурах клеток. Те разновидности их штаммов, которые растут в анаэробных условиях, являются, вероятно, сапрофитными спирохетами, близкими возбудителю сифилиса. Физиология их остается мало изученной. Трепонемы относятся к хемоорганотрофам, не имеют каталазы и оксидазы, могут сбраживать углеводы. Они растут на очень богатых средах, содержащих до 11 аминокислот, витамины, соли, сывороточный альбумин. Наилучшим способом выращивания патогенных спирохет является заражение кролика в яичко (экспериментальный орхит).
Высказано предположение о существовании у T.pallidum жизненного цикла, включающего, помимо спиралевидной формы, зернистую стадию и стадию кистоподобных сферических тел. Именно зернистые формы этих микроорганизмов способны проходить через бактериальные фильтры.
Антигены трепонем плохо изучены. Установлено, что в составе трепонем имеются белковые, полисахаридные и липидные комплексы. Антигенный состав культуральных и тканевых трепонем настолько близок, что антигены, приготовленные из культуральных трепонем, можно использовать для РСК при диагностике сифилиса. В организме человека трепонемы стимулируют выработку антител, которые вызывают иммобилизацию и гибель живых подвижных трепонем, связывают комплемент в присутствии суспензии T.pallidum или родственных спирохет, а также выявляются в непрямой РИФ.
Возбудитель сифилиса не образует экзотоксинов. К внешним воздействиям бледные трепонемы относительно мало устойчивы. Быстро погибают при высушивании и при повышенных температурах (при 55 °С в течение 15 мин). В 0,3-0,5%-ном растворе НС1 моментально утрачивают свою подвижность; так же быстро утрачивают ее и погибают в присутствии препаратов мышьяка, висмута, ртути. В цельной крови или в сыворотке при 4 °С сохраняют жизнеспособность в течение 24 ч. что следует учитывать при переливании крови.
Эпидемиология. Сифилис — типичное венерическое заболевание. Источник инфекции — больной человек, обычно заразен в течение 3-5 лет; больные с поздними формами сифилиса не заразны. Заражение в подавляющем большинстве случаев происходит при различных видах половых и бытовых контактов, редко — трансплацентарным путем от больной матери — ребенку (врожденный сифилис) или как профессиональное заражение контактным путем у медицинского персонала. В естественных условиях сифилисом болеет только человек, в эксперименте возможно заражение обезьян, хомяков и кроликов. У обезьян в месте введения трепонем развивается твердый шанкр, у кроликов и хомяков инфекция протекает бессимптомно.
^ Инкубационный период при приобретенном сифилисе варьирует от 2 до 10 нед, обычно — 20-28 дней. Входными воротами инфекции чаще всего являются слизистые оболочки половых органов, реже — полости рта, а также поврежденная кожа. В месте внедрения возбудитель размножается, формируется первичная сифилома (твердый шанкр) — эрозия или язва с уплотненным основанием. Далее возбудитель попадает в лимфатическую систему, развивается лимфангоит и регионарный лимфаденит. Это типичная клиника первичного сифилиса, который продолжается 1,5-2 мес. Потом эти признаки исчезают. Вторичный период сифилиса связан с генерализацией процесса, когда увеличиваются многие лимфатические узлы, а на коже и слизистых оболочках появляются высыпания; могут наблюдаться поражения внутренних органов и нервной системы. Различают вторичный свежий и вторичный рецидивирующий сифилис. При каждом последующем рецидиве интенсивность сыпи становится все менее выраженной, а периоды между рецидивами увеличиваются. В элементах сыпи содержится большое количество живых трепонем, в этот период больной наиболее заразен. Продолжительность вторичного сифилиса — до 4 лет и более. Далее болезнь вступает в длительный бессимптомный период, по прошествии которого, через несколько лет, развивается третичный сифилис. При этом наблюдаются грубые органические поражения внутренних органов, сердечно-сосудистой системы, ЦНС, костей, формируются гуммы, сопровождающиеся распадом ткани и дегенеративными изменениями. Характерной клинической особенностью сифилиса является отсутствие каких-либо субъективных жалоб со стороны больного (боль, зуд, жжение и т. д.).
Иммунитет. Против сифилиса ни естественного, ни искусственного иммунитета не возникает; есть только инфекционный иммунитет, и пока он существует, человек практически не восприимчив к новому заражению. Инфекционный иммунитет развивается через 10—11 дней после появления твердого шанкра (шанкерный иммунитет), в этот период повторное заражение или не наблюдается, или новый образовавшийся шанкр протекает абортивно (суперинфекция). В дальнейшем при суперинфицировании характер возникающих поражений соответствует стадии болезни в момент повторного заражения. Суперинфекция объясняется временным ослаблением или «срывом» инфекционного иммунитета. От суперинфекции необходимо отличать реинфекцию, т. е. новое, повторное заражение человека, ранее болевшего сифилисом (излечившегося) и, следовательно, утратившего инфекционный иммунитет. Описаны случаи даже трехкратного заболевания сифилисом. Инкубационный период у таких больных короче, чаще развиваются множественные язвенные шанкры с лимфаденитом, серологические реакции становятся положительными раньше. Во вторичном периоде папулы на коже нередко эрозируются. Это объясняется тем, что при сифилисе развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа, после излечения в организме длительно сохраняются сенсибилизированные лимфоциты. Инфекционный иммунитет носит нестерильный характер и обусловлен гуморальными факторами: в сыворотке больного обнаруживаются иммуноглобулины классов G, А и М.
^ . Существующие методы дигностики сифилиса можно разделить на две группы: 1) направленные на обнаружение возбудителя в исследуемом материале с помощью тех или иных способов микроскопии и 2) выявляющие в серологических реакциях специфические антитела. Исследуемым материалом для обнаружения трепонем является отделяемое твердого шанкра или его пунктат, пунктат лимфатического узла, соскоб из розеолы, ликвор. Лучше всего возбудитель выявляется в нативном материале с помощью микроскопии в темном поле или с использованием фазового контраста, что позволяет наблюдать разные типы движения живого возбудителя. Если уже начато лечение антибиотиками, возбудителя в патологическом материале обнаружить невозможно. Иногда пользуются непрямой РИФ или окраской препарата по Романовскому-Гимзе. Эти методы используют только для ранней диагностики сифилиса. Основным методом диагностики является серологический, так как его можно использовать на различных стадиях заболевания, кроме первичного серонегативного сифилиса. Обычно применяют комплекс серологических реакций: реакция связывания комплемента (реакция Вассермана), реакции преципитации (осадочные) — Кана, цитохолевая Закса-Витебского в различных их модификациях. В этих реакциях используют как специфический трепонемный антиген, так и кардиолипидный антиген (дифосфатидилглицерин) из бычьего сердца, являющиеся перекрестно реагирующими антигенами. Для взаимодействия кардиолипидного антигена с сифилитическим реагином сыворотки требуется присутствие лецитина и холестерина или какого-либо другого «сенсибилизатора». Реагин представляет собой смесь IgM и IgA против некоторых антигенов, широко распространенных в нормальных тканях. Он обнаруживается в сыворотке нелеченных больных через 2-3 нед после заражения сифилисом, в ликворе — через 4-8 нед.
Наиболее специфической реакцией в диагностике сифилиса, особенно латентного, является реакция иммобилизации трепонем, особо эффективная в более поздних сроках заболевания. Сущность реакции заключается в потере подвижности тканевой культуры бледной трепонемы в присутствии сыворотки крови больного сифилисом.
Микробиологическая диагностика сифилиса основывается на лабораторном обследовании пациента. Без обнаружения бледных трепонем в элементах поражения и результатов серологического обследования нельзя поставить диагноз сифилиса.
I. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД С помощью микроскопического метода можно обнаружить бледных трепонем в отделяемом твердого шанкра (первичный сифилис) и элементов высыпания на коже и слизистых оболочках (вторичный сифилис). Из-за низкого содержания нуклеопротеидов бледные трепонемы плохо воспринимают анилиновые красители. Поэтому наиболее успешно изучение и обнаружение возбудителя в нативных препаратах в темном поле зрения. Однако можно окрашивать мазки по методу Романовского-Гимзы (длительно) или проводить импрегнацию серебром.
|
