Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1
|
|
Скачать 2.36 Mb.
|
^ 1. Оснащение - стандартные эритроциты группы O(I), A(II) и B(III); - изотонический раствор NaCl; - пробирки вместимостью 8-10мл; - маленькие пробирки высотой 4-5 см, диаметром 0,8-1,0 см; - штативы; - термостат 37°С; - центрифуга. 2. Подготовительная работа Стандартные эритроциты групп O(I), A(II) и B(III), а также эритроциты исследуемого лица дважды отмывают изотоническим раствором NaCl путем центрифугирования и готовят из них 5% взвесь в изотоническом растворе NaCl. Сыворотку для исследования используют со сроком хранения не более 48 часов при температуре 4-8°С. В предварительно пронумерованных пяти пробирках вместимостью 8-10 мл готовят разведения исследуемой сыворотки в изотоническом растворе NaCl, начиная от 1:2 до 1:32 в объемах 2-3 мл. 3. Техника реакции В штатив устанавливают по пять маленьких пробирок: три ряда при исследовании сыворотки группы A(II) или B(III) или четыре ряда - при исследовании сыворотки группы O(I), Пробирки нумеруют одинаково во всхе рядах соответственно нумерации пробирок с исходными разведениями сыворотки. Штатив предварительно накрывают листом бумаги, в котором накалывают отверстия для установки пробирок. На бумаге надписывают фамилию и группу крови лица, чья сыоротка исследуется, группу крови стандартных эритроцитов и степень разведения помещенной в пробирках сыворотки (1:2 - 1:32). Исследуемую сыворотку из исходный разведений переносят соответственно номерам по пять капель в маленькие пробирки так, чтобы во всех первых номерах было разведение 1:2, во вторых - 1:4 и т.д. до 1:32. Затем во все пробирки добавляют по 1 капле 5% взвеси эритроцитов: в первый (контрольный) ряд пробирок вводят эритроциты лица, сыворотка которого исследуется: во второй (также контрольный) ряд - эритроциты группы O(I): в третий ряд вводят эритроциты противоположной группы, т.е. группы B(III), если исследуется сыворотка группы A(II) или группы A(II), если исследуется сыворотка группы B(III). При исследовании сыворотки группы O(I) в третий ряд вводят эритроциты группы A(II), а в четвертый ряд - эритроциты группы B(III). Содержимое пробирок тщательно перемешивают путем встряхивания и штатив помещают на 45 минут при температуре 37°С, затем пробирки вынимают из термостата и рассматривают результат невооруженным глазом в проходящем свете. 4. Трактовка результатов определения групповых гемолизинов. В ходе исследования определяется наличие или отсутствие групповых гемолизинов анти-А и анти-В. Результаты оценивают по соотношению количества сохранившихся эритроцитов в осадке и степени гемолиза, т.е. интенсивности окрашивания надосадочной жидкости: - если эритроциты полностью сохранились в осадке, а надосадочная жидкость прозрачна и бесцветна, это значит, групповые гелизины отсуствуют, что обозначают знаком минус (-). - если осадок эритроцитов частично сохранился, а надосадочная жидкость прозрачна и окрашена в красный цвет разной интенсивности (иногда только небольшим слоем над осадком эритроцитов) - это значит, что в исследуемой сыворотке содержатся групповые гемолизины различной степени активности (обозначают знаками от одного плюса(+) до трех плюсов (+++). - если осадок эритроцитов отсуствует, а вся жидкость окрашена в ярко-красный цвет и прозрачна, это значит, что в исследуемой сыворотке содержатся групповые гемолизины, что оенивается на четыре плюса (++++). Результаты учитывают как истинные, т.е., относящиеся к гемолизинам анти-А и анти-В только при отсуствии гемолиза в двух контрольных рядах. При наличии гемолиза не только с эритроцитами противоположной группы, но и в контрольных рядах - исследование повторяют. При подтверждении результатов реакции следует решать вопрос о природе обнаружения гемолизинов, с учетом характера заболевания и других показателей. Приложение 19 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздраво России от 09.01 1998г. № 2 ИНСТРУКЦИЯ ^ Стандартные эритроциты, содержащие определенные сочетания аллоантигенов, предназначены для выявления антиэритроцитарных антител в сыворотке исследуемой крови, при определении групп крови АВО перекрестным способом, при определении резус-принадлежности крови, а ткаже для проведения контроля специфичности и активности стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО, сывороток антирезус, тест-сывороток и реактивов, рпдназначенных для определения антигенов различных систем эритроцитов крови человека. Стандартные эритроцитоы группы 0(I) должны содержать в эритроцитах клинически значимые антигены: D, C, Cw, c, E, e, K, k, Fy, Jk, M, N, S, s, Le. С целью увеличения срока годности стандартных эритроцитов можно производить их консервирование специально изготовленными консервирующими растворами. ^ Стандартные эритроциты для исследований по системе АВО должны давать четкую, хорошо видимую агглютинацию при взаимодействии со стандартными сыворотками соответствующей специфичности и не давать агглютинации с сыворотками, не содержащими антител против данного антигена эритроцитов. Стандартные эритроциты группы A(II), предназначенные для выявления агглютинина анти-А должны иметь титр не ниже 1:64, эритроциты группы B(III), предназанченные для выявления агглютинина анти-В, также должны иметь титр не ниже 1:64. Титр антигенов А и В устанавливается с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток группы Ab(II) (анти-В) и Ba(III) (анти-А), или соответствующих моноклональных антител, удовлетворяющих требованиям действующих инструкций. Время наступления агглютинации эритроцитов А1 и В со стандартными изогемагглютинирующими реактивами должно составлять не более десяти секунд; эритроцитов подгруппы А3, В2 - не более двух минут. Стандартные эритроциты группы крови 0(I) не должны давать агглютинации со стандартными сыворотками групп крови 0ab(I), Ab(II), Ba(III) в течение двадцати минут. Стандартные резус-положительные эритроциты группы крови 0(I), содержащие антиген D, а также антигены C, Cw, c, и E, e в различных сочетаниях, прендназначенные для выявления антител системы резус, должны давать соответственно со стандартными сыворотками анти-D, анти-C, анти-Cw, анти-c, анти-E и анти-е четкую агглютинацию при определении методом конглютинации с желатином, экспресс-методом в пробирках или на плоскости без подогрева или непрямой пробе Кумбса в зависимости от того, для какого метода исследования предназначена данная стандартная сыворотка антирезус. Стандартные резус-положительные эритроциты 0(I) фенотипа ccddee не должны давать агглютинации с реактивами антирезус, содержащими антитела анти-D ,анти-C анти-E во всех методах исследования, для использования в которых предназначены указанные реактивы антирезус. Время наблюдения за отрицательной реакцией должно соответствовать времени, установленному для каждой из этих реакций. ^ Приготовление стандартных эритроцитов производится в условиях строгого соблюдения асептики и состоит из изготовления консервирующего раствора, получения взвеси эритроцитов в консервирующем растворе, розлива эритроцитов, маркировки продукции и контрольных исследований. 1. ^ Консервирующей средой для приготовления стандартных эритроцитов могут служить растворы следующего состава: Консервант № 1 сорбит 40,0 г глюкоза 6,0 г Na2HPO4 12 H2O 2,0 г KH2PO4 0,9 г левомицитин 0,06 г этиловый спирт 96° 100 мл вода бидистиллированная до 1000 мл pH раствора 6,8-6,9 В случае необходимости доведения рН до требуемой величины добавляется несколько кристаллов аскорбиновой кислоты или Na2HPO4 12H2O. Консервант № 2: аденин 0,03 г инозин 0,06 г лимонная кислота 1,5 г глюкоза 3,0 г Na3PO4 0,4 г NaOH 1h 20 мл вода дистиллированная до 100 мл pН раствора 6,3-6,4 Консервирующие растворы (консерванты) представляют собой прозрачную бесцветную жидкость без запаха. Стерилизация консервантов производится путем фильтрования их через соответствующие стерилизующие фильтры. Розлив производят в стерильные флаконы емкостью 250 мл или 500 мл, которые немедленно закрывают резиновыми пробками и завальцовывают металлическими колпачками. Срок годности консервантов - шесть месяцев. В случае помутнения консервирующего раствора или появления желтого окрашивания применение его для работы недопустимо. 2. ^ Источником получения стандартных эртроцитов является эритроцитная масса, получаемая после удаления плазмы из консервированной крови доноров. Кровь берут от доноров, фенотип эритроцитов которых заранее определен. Для получения стандартныхэритроцитов, содержащих антигены системы АВО, в качестве исходного материала должна быть использована эритроцитная масса от одного специально отобранного донора. А для получения стандартных эритроцитов других систем можно использовать смесь эритроцитов группы 0(I) от нескольких (2-4) доноров различного фенотипа таким образом, чтобы каждый из редких антигенов:K, Cw, E присутствовали в эритроцитах не менее чем у двух доноров. Используется эритроцитная масса, полученная не позднее 2-3 суток от момента заготовки крови. В боксе через стерильную систему путем прокола переливают эритроцитную массу во флакон с заготовленным консервантом так, чтобы соотношение эритромассы и консерванта было 1:4. Содержимое флакона осторожно перемешивают и разливают той же системой в стерильные флаконы по 5, 10 или 25 мл. Используют обычную систему для взятия. Флаконы (по 5, 10 или 25 мл) закрывают резиновыми пробками, завальцовывают металлическими колпачками, немедленно маркируют (см.п.3) и помещают в рефрижератор при температуре +4°С. 3.Маркировка На флаконы со стандартными эритроцитами наклеивают этикетки с указанием: учреждения, изготовившего эритроциты, группы крови по системе АВО, антигенного состава эритроцитов, срока годности. Наставление по применению стандартных эритроцитов прилагается при выдаче (см п. IV). 4. Контроль Контроль специфичности и активности стандартных эритроцитов производится после их расфасовки и маркировки в изоиммунологической лаборатории станции переливания крови. 5. ^ Стандартные консервированные эритроциты хранят при +4°С. Срок годности консервированных стандартных эритроцитов - два месяца. При использовании в качестве стандартных эритроцитов цельной консервированной крови, а также эритроцитной массы в комбинации с другими гемоконсервантами, срок хранения стандартов 1-4 недели. ^ Транспортировка стандартных эритроцитов производится аналогично транспортировке консервированной крови в изотермической таре. ^ (прилагается при выдаче) Консервированные стандартные эритроциты используют в постановках реакций в различных методиках в соответствии с действующими инструкциями по изосерологии. 1. Стандартные эритроциты группы 0(I) с содержанием в эритроцитах клинически значимых антигенов D, C, Cw, c, E, e, K, k, Fy, Jk, M, N, S, s, Le предназначены для выявления соответствующих изоиммунных противоэритроцитарных антител в сыворотке крови доноров, больных и беременных с помощью реакции конглютинации в желатине, непрямой пробе Кумбса, реакции агглютинации и солевой среде в пробирках или на плоскости. Для желатинового метода используют осадок стандартных эритроцитов или 10% их взвесь в желатине для чего к одной части осадка эритроцитов добавляют девять частей 10% раствора желатина, стандартьизованного для серологических исследований. В реакции используют по две капли (0,1 мл) взвеси. Взвесь стандартных эритроцитов в желатине используют в течение рабочего дня, на следующий день готовят новую порцию. В непрямой пробе Кумбса и реакции агглютинации в солевой среде используют стандартные эритроциты, отмытые не менее двух раз физиологическим раствором хлористого натрия. 2. Стандартные эритроциты группы 0(I), A1(II), A2(II), B(III) предназначены для выявления изогемагглютининов a и b в сыворотке или плазме крови при определении групповой принадлежности крови перекрестным методом, а также для выявления неполных изоиммунных a и b антител в сыворотке крови доноров, больных и беременных с помощью реакции коглютинации в желатине и непрямой пробе Кумбса. Для перекрестного метода и реакции конглютинации в желатине применяют неотмытые стандартные эритроциты взятые непосредственно из осадка со дна флакона. Для желатинового метода используют осадок стандартных эритроцитов или 10% их взвесь в растворе желатина, для чего к одной части осадка эритроцитов добавляют девять частей 10% раствора желатина, стандартизованного для серологических исследований. В реакции используют по две капли (0,1 мл) взвеси. Взвесь стандартных эритроцитов в желатине используют в течение рабочего дня, на следующий день готовят новую порцию. В непрямой пробе Кумбса и реакции агглютинации в солевой среде используют стандартные эритроциты, отмытые не менее двух раз физиологическим раствором хлористого натрия. 3. Срок годности консервированных стандартных эритроцитов - два месяца. Стандартные эритроциты из разгерметизированного флакона пригодны для использования в течение недели. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям