Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1
|
|
Скачать 2.36 Mb.
|
|
^ 1. При определении резус-принадлежности независимо от метода определения результат учитывается как истинный после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность каждой серии сыворотки антирезус, т.е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы O(I) и в других контрольных пробах, применяемых для каждого метода. 2. Если при определении резус-принадлжености наблюдается слабая или сомнительная реакция, то следует повторно исследовать кровь данного лица другими сериями сывороток антирезус и другими методами, включая метод агглютинации в солевой среде с сыворотками, содержащими полные антитела. Если при этом все серии сывороток, содержащих неполные антитела дадут также слабую или симнительную реакцию, а с полными антителами реакция будет отрицательная, это значит, что эритроциты содержат слабую разновидность антигена антирезус, так называемый антиген Du, частота которого около 1%. В этих случаях резус-принадлежность крови больного или беременной женщины указывают как резус-отрицательную (rh-), а резус-принадлежность крови донора как резус-положительную (Rh+), не допуская таким обрахзом, переливания его крови резус-отрицательным реципиентам. ^ При использовании сывороток, содержащих антитела анти-С, анти-Е, анти-с, анти-е, анти-Cw в чистом виде, а также в сочетании с анти-D, например, D+С; D+Е; D+С+Е, применяются те же методы, что и при использовании сыворотки антирезус анти-D. При этом учитывается форма антител. В качестве контролей используют эритроциты, содержащие и не содержащие соответствующий антиген. Приложение 8 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01 1998 г. №2 ИНСТРУКЦИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ НА ПЛОСКОСТИ БЕЗ ПОДОГРЕВА И ПО ИЗГОТОВЛЕНИЮ СТАНДАРТНОЙ СЫВОРОТКИ И РЕАКТИВА АНТИРЕЗУС, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ЭТОЙ ЦЕЛИ ^ Методы определения резус-принадлежности на плоскости без подогрева позволяют быстро проводить исследование без применения особого лабораторного оборудования непосредственно у постели больного, а также у доноров как в единичных случаях, так и при массовых обследованиях. Методы основаны на использовании сывороток антирезус, изготовленных в сочетании с коллоидными растворами (альбумин, полиглюкин), в присутствии которых неполные резус-антитела приобретают способность агглютинировать резус-положительные эритроциты на плоскости при комнатной температуре, аналогично реакции по определению групп крови АВО. Наиболее удобными для практики являются методы определения на плоскости без подогрева при помощи сыворотки антирезус, изготовленной в сочетании с альбумином и при помощи реактива антирезус, изготовленного из сыворотки антирезус в сочетании с сухим полиглюкином и альбумином. ^ (прилагается при выдаче сыворотки) Оснащение: а) специально приготовленная универсальная сыворотка антирезус анти-D в комплекте с контрольной сывороткой; б) белая пластинка со смачиваемой поверхностью; в) изотонический раствор NaCl; г) стеклянные палочки. Для исследования используют кровь, полученную непосредственно из места укола пальца или взятую заранее в пробирку со стабилизатором, но не более 2 суток хранения при 4-8°С. ^ На пластинке надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется и, сделав соответствующие обозначения, наносят на нее две точки: слева по 2 капли сыворотки антирезус и справа по 2 капли контрольной сыворотки. Рядом с этими каплями наносят по 1 капле исследуемой крови. Кровь тщательно смешивают с сывороткой стеклянной палочкой и размазывают на пластинке до получения тонкого слоя. Затем пластинку периодически покачивают в течение 4-5 минут и добавляют в обе смеси по 1 капле изотонического раствора NaCl для снятия возможной неспецифической агглютинации. Наблюдение заходом реакции продолжают до истечения 5 минут, после чего учитывают результат. ^ Если слева,то есть с сывороткой антирезус, произошла агглютинация эритроцитов, а справа (контроль) ее нет - кровб остается равномерно окрашенной, без признаков агглютинации, это значит,чтоисследуемая кровь резус-положительная (Rh+). Если в обеих каплях агглютинация отсутствует, это значит, что исследуемая кровь резус-отрицательная (rh-). При наличии агглютинации в контрольной капле, что может произойти при некоторых заболеваниях, например, за счет аутоантител, необходимо исследовать кровь повторно другими методами, желательно в лабораторных условиях. ^ (прилагается при выдаче реактива) Оснащение: а) специально приготовленный универсальный реактив антирезус анти-D в комплекте с контрольным реактивом; б) белая пластинка со смачиваемой поверхностью; в) изотонический раствор NaCl; г) стеклянные палочки. Для исследования использую кровь, полученную непосредственно из места укола пальца или взятую заранее в пробирку со стабилизатором не более чем за 2 суток до исследования. Кровь хранят при 4-8°С. ^ На пластинке надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется и, сделав соответствующие обозначения, наносят на нее слева 1 каплю реактива антирезус и справа - 1 каплю контрольного реактива, затем добавляют и к реактиву антирезус, и к контрольному реактиву по 1 капле густой взвеси исследуемой крови. Кровь тшательно смешивают с реактивом и размазывают по сластинке стеклянной палочкой тонким слоем. Затем пластинку периодически покачивают в течение 3-4 минут и добавляют в обе смеми для исключения неспецифической агглютинации по 5-8 капель изотонического раствора NaCl. Наблюдение за ходом реакции продолжают до истечения 5 минут, после чего учитывают результат. ^ Если слева, т.е. с реактивом антирезус, произошла агглютинация эритроцитов, а справа (в контроле) ее нет - это значит, что исследуемая кровь резус-положительная (Rh+). Если в обеих каплях агглютинация отсутствует, это значит, что исследуемая кровь резус-отрицательная (rh-). Однако, результат учитывают как истинный только при отсутствии агглютинации в контроле. При наличии агглютинации в контроле, что может произойти при некоторых заболеваниях, например, за счет аутоантител, кровь необходимо исследовать повторно другими методами, желательно в лабораторных условиях. ^ Сыворотка антирезус содержит неполные антитела анти-D. Выпускается в комплекте с контрольной сывороткой, не содержащей резус-антител. Сыворотка предназначена для определения резус-антигена D. Материалом для изготовления сыворотки антирезус в сочетании с альбумином служит сыворотка крови людей группы AB(IV) или специально приготовленная - универсальная с титром неполных резус-антител анти-D не ниже 1:64 - 1:128 в непрямой пробе Кумбса. Сыворотка должна быть предварительно исследована и признана годной, как стандартная сыворотка антирезус в соответствии с "Инструкцией по изготовлению стандартных сывороток и реагента антирезус". Материалом для изготовления контрольной сыворотки служит сыворотка крови людей группы AB(IV), т.е. не содержащая как резус-антите, так и групповых агглютининов a и b. Контрольная сыворотка должна соответствовать требованиям, предъявляемым к стандартным изогемагглютинирующим сывороткам системы АВО. При изготовлении сывороток антирезус в сочетании с альбумином необходимы: - альбумин 20-30% раствор, полученный из плазмы крови человека; - образцы резус-положительной и резус-отрицательной крови, взятой на гепарине; - гепарин; - изотонический раствор NaCl. Работу по изготовлению сыворотки начинают с подбора оптимального соотношения сыворотки антирезус и альбумина. Подбор можно вести двумя способами: а) используя одну и ту же сыворотку антирезус, испытывая с ней разные образцы (серии) альбумина, и выбирая таким образом образец альбумина с высокой конглютинационной активностью; б) используя один и тот же образец (серию) альбумина, испытывая его с разными образцами сыворотки антирезус. ^ Сыворотку антирезус с титром неполных антител 1:64 - 1:128 разводят в пробирках в 2-4 раза отдельно различными образцами раствора альбумина. Разные смеси сыворотки антирезус с альбумином исследуют на пластинке с 5-6 образцами Rh+ и с 5-6 образцами ccddee, а также с кровью фенотипа Ccddee и ccddEe. Сыворотку антирезус, смешанную с альбумином, переносят в 2 точки по 2 капли (0,1 мл) на пластинку, добавляют к ней по 1 капле (0,05 мл) резус-положительной и резус-отрицательной крови. Капли перемешивают и размазывают по пластинке до получения тонкого слоя. Наблюдение ведут до истечения 5 минут при покачивании пластинки. ^ Результат учитывают по скорости наступления и величине агглютинатов резус-положительных эритроцитов и отсутствии агглютинации с резус-отрицательными эритроцитами. На основании этого отбирают образцы альбумина наиболее пригодные для использования. Для последующего использования применяют образцы альбумина, при испытании которых агглютинация резус-положительных эритроцитов появляется в течение первых 20-30 секунд, а неспецифическсая аггрегация резус-отрицательных эритроцитов отсутствует до истечения 10 минут. ^ Несколько различных образцов сыворотки антирезус наносят отдельно в 2 точки по 1 капле (0,05 мл) на пластинку и добавляют к ним по капле (0,05 мл) 20-30% альбумина. Сыворотку тщательно смешивают с альбумином и добавляют к ней по 1 капле (0,05 мл) резус-положительной и резус-отрицательной крови. Капли перемешивают с эритроцитами на плоскости до получения тонкого слоя. Наблюдение ведут до 5 минут при покачивании пластинки. Так поступают отдельно для каждого испытуемого образца сыворотки, испытывая их с 5-6 образцами Rh+ крови и с 5-6 образцами крови ccddee, а также с кровью фенотипа Ccddee и ccddEe. ^ Результат учитывают по скорости наступления агглютинации и ее выраженности с резус-положительными эритроцитами и по отсутствию с резус-отрицательными эритроцитами ccddee и эритроцитами генотипа Ccddee и ccddEe. Для последующего использования выбирают сыворотки антирезус анти-D, при испытании которых четко выраженная агглютинация резус-положительных эритроцитов наступает в течение первых 20-30 секунд, а неспецифическая агглютинация резус-отрицательных эритроцитов и эритроцитов фенотипа Ccddee и ccddEe отсутствует до истечения 10 минут. ^ После выбора альбумина с наиболее высокой англютинирующей способностью или, наоборот, выбора сыворотки антирезус с высокой агглютинирующей активностью в альбуминовой среде, приступают к подбору оптимального их соотношения, для чего: в штатив устанавливают 5 пронумерованных пробирок; в первую пробирку вносят 2 капли (0,1 мл) выбранной серии альбумина, во вторую пробирку - 4 капли, в третью - 6, в четвертую - 8 и в пятую - 10 капель; в каждую пробирку добавляют по 2 капли (0,1мл) сыворотки антирезус и содержимое тщательно перемешивают; из каждой пробирки переносят в 2 точки по 1 капле (0,05 мл) на пластинку, образуя таким образом 2 ряда сыворотки с альбумином; во все капли 1-го ряда вносят по 1 капле (0,05 мл) свежей резус-положительной крови, во 2-ой ряд - резус-отрицательной крови (кровь предварительно берут с гепарином - 1 капля на 10 мл крови). Смесь перемешивают и ведут наблюдение в течение 3 минут при покачивании пластинки. ^ Четкая агглютинация Rh+ эритроцитов и отсутствие агглютинации rh- эритроцитов ccddee и эритроцитов фенотипа Ccddee и ccddEe указывает на оптимальное соотношение данного образца сыворотки антирезус и альбумина. ^ Для приготовления полного объема (серии) стандартной сыворотки используют выбранные оптимальные соотношения сыворотки и альбумина. И сыворотку и альбумин используют тех же серий, которые применялись для установления оптимального их соотношения. К изготовленному полному объему смеси сыворотки с альбумином добавляют гепарин из расчета - 1 капля на 20 мл сыворотки. Приготовленную таким образом сыворотку проверяют на пластинках с 5-6 образцами резус-положительных эритроцитов и с 5-6 образцами резус-отрицательных ccddee, а также с эритроцитами фенотипа Ccddee и ccddEe. При наличии четко выраженной агглютинации с резус-положительной кровью, наступающей через 30-40 сек., и отрицательной реакции с резус-отрицательной кровью ccddee и кровью фенотипа Ccddee и ccddEe, сыворотку антирезус в сочетании с альбумином мчитают пригодной в качестве стандартной сыворотки анти-D для определения резус-принадлежности на плоскости без подогрева. Исследование проводят с одновременным параллельным использованием контрольной сыворотки. ^ Для изготовления контрольной сыворотки используют изогемагглютинирующую сыворотку группы AB(IV) и добавдяют к ней альбумин того же образца (серии) и в том же количестве и в соотношении, которые были использованы для приготовления данной серии сыворотки антирезус. Контрольную сыворотку испытывают аналогично тому,как описано выше для сыворотки антирезус. Контрольная сыворотка не должна вызывать агглютинацию эритроцитов. ^ Сыворотку антирезус и контрольную сыворотку консервируют борной кислотой из расчета 2 гр на 10 мл сыворотки. Розлив и паспортизация сыворотки антирезус и контрольной сыворотки Сыворотку антирезус разливают по 1-2 мл в ампулы, которые запаивают, или во флаконы, которые плотно укупоривают резиновыми пробками. На ампулы, флаконы наклеивают этикетки с указанием учреждения, изготовившего сыворотку, специфичности сыворотки, метода, для которого предназначена, количества, номера серии и срока годности. Контрольную сыворотку разливают в таких же объемах и в том же количестве ампул (флаконов) и так же наклеивают этикетки. Номер серии контрольной сыворотки повторяет номер серии основной сыворотки антирезус. ^ Сыворотки антирезус, изготовленные в сочетании с альбумином и контрольные сыворотки хранят при 4-8°С. Срок годности - 4 месяца. По истечении срока годности, но при сохранении активности и специфичности сывороток, срок годности может быть продлен еще на 1 месяц. ^ Сыворотка антирезус выдается в комлекте с контрольной сывороткой. К каждому комплекту прилагают инструкцию по использованию.
Формы этикеток для сыворотки антирезус и контрольной сыворотки. ^ Реактив содержит неполные активные антитела антирезус анти-D, представляет собой вязкий опалесцирующий мутноватый раствор. При хранении может выпадать осадок. Выпускается в комплекте с контрольным реактивом, не содержащим резус-антитела. Материалом для изготовления реактива антирезус служат нативные сыворотки крови людей группы AB(IV) или специально приготовленные - универсальные с титром неполных резус-антител не ниже 1:64 - 1:128 в непрямой пробе Кумбса. Сыворотка должна быть предварительно исследована и признана годной, как стандартная сыворотка антирезус. Материалом для изготовления контрольной сыворотки служит сыворотка крови людей группы AB(IV), т.е. не содержащая как резус-антител, так и групповых антитела a и b. Контрольная сыворотка должна соответствовать требованиям, предъявляемым к стандартным изогемагглютинирующим сывороткам системы АВО. При изготовлении реактива антирезус необходимы: - полиглюкин высушенный лиофильным способом; - альбумин - 2,5% раствор; - изотонический раствор NaCl; - образцы резус-положительной и резус-отрицательной крови. Примечания: 1. Полиглюкин высушивают лиофильным способом на сублимационном аппарате по регламенту, установленному для сушки плазмы. Сушку ведут во флаконах емкостью 250-500 мл. 2. 2,5% раствор альбумина получают из готового 10%-20% раствора альбумина путем разведения его изотоническим раствором NaCl. ^ Сыворотку, содержащую антитела анти-D с титром не ниже чем 1:6401:128* переносят во флакон с предварительно высушенным полиглюкином в объеме, равном количеству жидкого полиглкина, высушенного в данном флаконе. В результате конечная концентрация полиглюкина составит 6%. Содержимое флакона тщательно перемешивают путем встряхивания до полного растворения порошка полиглюкина. * Примечание: сыворотку антирезус с более высоким титром можно развести до этого значения с сывороткой группы AB(IV), стандартным разводителем или 2,5% раствором альбумина в изотоническом растворе NaCl. ^ Для изготовления контрольного реактива в другой такой же флакон с высушенным полиглюкином той же серии добавляют стандартный разводитель или 2,5% раствор альбумина так же до исходного объема полиглюкина. Содержимое тщательно перемешивают до полного растворения порошка полиглюкина. ^ Исследование реактивов производят непосредственно после их изготовления с резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами и оценивают по характеру агглютинации и специфичности реакции: на плстинку помещают два ряда, слева - по две капли (0,1 мл) реактива антирезус и справа - по две капли (0,1 мл) контрольного реактива; в первый ряд добавляют по одной капле (0,05 мл) резус-положительных эритроцитов, во второй ряд также по одной капле резус-отрицательных эритроцитов. аСодержимое капель перемешивают, затем размазывают до получения тонкого слоя и оставляют на 3 минуты периодически покачивая пластинку; через 3 минуты во все капли добавляют по 5-6 капель изотонического раствора NaCl, перемешивают и через 2 минуты учитывают результат. Реактивы исследуют не менее чем с 20 образцами резус-положительных и с 30 образцами резус-отрицательных эритроцитов групп A(II), AB(IV) и B(III), включая эритроциты Ccddee и ccddEe. ^ Результат учитывают по скорости наступления агглютинации и ее выраженности с резус-положительными эритроцитами и отсутствием ее с резус-отрицательными эритроцитами (ccddee) и эритроцитами фенотипа Ccddee и rccddEe. Показателем пригодности реактива для последующего использования является наличие крупно-зернистой агглютинации резус-положительных эритроцитов со скоростью наступления до 1 минуты и отсутствие ее с резус-отрицательными эритроцитами (ccddee) и эритроцитами фенотипа CcddEe и ccddEe. Контрольный реагент исследуется так же как описано выше для реагента антирезус. Агглютинация с контрольным реагентом должна отсутствовать со всеми образцами эритроцитов. ^ Реактив антирезус и контрольный реактив консервируют борной кислотой из расчета 2 гр. на 100 мл реагента. Розлив и паспортизация Реагент антирезус разливают во флаконы или ампулы. Ампулы запаивают, флаконы плотно укупоривают резиновыми пробками и завальцовывают или парафинируют. На ампулы, флаконы наклеивают этикетки с указанием учреждения, изготовившего реактив, специфичности реактива, метода для которого он предназначается, количества, номера серии и срока годности. Контрольный реактив разливают в такие же объемы и в том же количестве ампул (флаконов) и также наклеивают этикетки с соответствующим текстом. Номер серии основного реактива антирезус.
Формы этикеток для реактива антирезус и контрольного реактива. ^ Реактив антирезус, приготовленный с сухим полиглюкином и контрольный реактив хранят при 4-8°С. Срок годности 4 месяца. Реактив антирезус и контрольный реактив проверяют на активность и специфичность через месяц. ^ Реактив антирезус выдается в комплекте с контрольным реактивом. К каждому комплекту (или набору комплектов) придается инструкция по использованию. Приложение 9 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01 1998г. № 2 ИНСТРУКЦИЯ по применению ЦОЛИКЛОНА анти-D диагностического жидкого для определения D антигена системы резус (Антитела моноклональные анти-D) ТУ 9398-215-27575295-95 1. Назначение ЦОЛИКЛОН анти-D предназначен для выявления D антигена системы резус в эритроцитах человека и применяются в серологических тестах взамен или параллельно с изоиммунной анти-D сывороткой. Порядок установления резус-принадлежности крови определен "Инструкцией по определению резус-принадлежности крови", утвержденной Министерством здравоохранения Российской Федерации в 1997 году и Методическими рекомендациями по определению резус-принадлежности крови, утвержденными ГНЦ РАМН 27 апреля 1994 года. ^ Действующим началом ЦОЛИКЛОНА Анти-D являются моноклональные анти-D антитела, продуцируемые лимфобластианой линией клеток человека, полученной из лимфоцитов донора, гипериммунного против D антигена. Антитела, продуцируемые клетками одного клона, являются моноклональными, принадлежат к одному классу иммуноглобулинов, полностью идентичны по структуре и биологической активности. Поскольку линия клеток, секретирующих моноклональные анти-D антитела, получена из лимфоцитов здорового донора, исключена контаминация реагента патогенными вирусами (гепатит, СПИД,и др.). Однако с исследуемыми образцами крови следует работать в перчатках во избежание заражения патогенными вирусами, передающимися через кровь. ЦОЛИКЛОН Анти-D представляет собой неразбавленную или разведенную солевым раствором культуральную жидкость, кондиционированную клетками-продуцентами антител. Анти-D моноклональные антитела принадлежат к иммуноглобулинам кдасса G (IgGI). ЦОЛИКЛОН Анти-D не содержит антител иной специфичности и поэтому может быть использован для выявления D антигена в эритроцитах любой группы крови. Анти-D антитела, принадлежащие к иммуноглобулинам класса G (неполные антитела), не вызывают прямой агглютинации эритроцитов, срдержащих D антиген, и могут быть использованы в реакции конглютинации с желатином, непрямом антиглобулиновом тесте (пробе Кумбса), в реакции агглютинации эритроцитов, обработанных протеолитическими ферментами, в том числе в автоматизированных системах типа "Группоматик". ^ Определение D-антигена производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов. Заключение о присутствии D-антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации. 3.1. Непрямой антиглобулиновы тест (непрямая проба Кумбса) Является наиболее чувствительным методом выявления D-антигена. Взвесь (2-3%) в физиологическом растворе трижды отмытых исследуемых эритроцитов помещают в круглодонную пробирку (0,1 мл взвеси эритроцитов) или 96-ячеечную круглодонную плату (0,05 мл/ячейку), добавляют равный объем ЦОЛИКЛОНА и инкубируют в течение 45-60 минут при 37°С. Затем после однократного отмывания физиологическим раствором к осадку эритроцитов добавляют 0,05-0.1 мл антиглобулиновой сыворотки, тщательно перемешивают и немедленно или через 15-30 минут инкубации при комнтаной температуре центрифугируют при 200 g в течение 15-20 секунд. Осадок мягко взвешивают и по наличию агглютинатов, выявляемых в макро- или микроскопически, делают заключение о присутствии D антигена в исследуемых эритроцитах. 3.2. Реакция конглютинации с желатином В агглютинационную пробирку вносят одну каплю (0,05-0,1 мл) свободных эритроцитов из сгустка свернувшейся крови или эритроцитов, отмытых от консерванта. Затем добавляют две капли (0,1-0,2 мл) 10% раствора желатина, предварительно прогретого при 45-50°С до разжижения, и одну каплю ЦОЛИКЛОНА Анти-D. Суспензию тщательно перемешивают, инкубируют 10-15 минут в водяной бане или 30 минут в термостате при 48°С, прибавляют 5-6 мл физиологического раствора и после осторожного переворачивания пробирки визуально определяют наличие агглютинатов. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о присутствии в них D антигена. 3.3. Реакция с препаратом на основе полиглюкина Полиглюкин практически всегда вызывает неспецифическую агглютинацию D-отрицательных эритроцитов, поэтому невозможно объективное заключение об отсутствии D антигена или о наличии его слабого варианта в исследуемых эритроцитах. В связи с этим использование полиглюкина для моноклональных антител не рекомендуется. 3.4. Реакция агглютинации с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами ЦОЛИКЛОН Анти-D, содержащий моноклональные антитела класса IgG, способен вызывать прямую агглютинацию D-положительных эритроцитов, обработанных такими протеолитическими ферментами как бромелин, папаин и др., и поэтому может применяться в автоматических системах типирования крови. 3.5. Контроль специфичности реакции агглютинации Для контроля специфичности при каждом исследовании (независимо от применяемой методики исследования) необходимо использовать стандартные D-положительные и D-отрицательные эритроциты. Желательно также включение образцов со слабовыраженным D антигеном. ^ ЦОЛИКЛОН Анти-D выпускается в жидкой форме во флаконах объемом 5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%. Срок хранения - два года в холодильнике при 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение одного месяца в закрытом виде. 5. Рекламация Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность,нарушение целостности флаконов, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями. При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины, по которым реагент признан негодным, протокол с результатами проверки реагента. Вместе с рекламацией направляют 2-3 невскрытых флакона данной серии. Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель. Приложение 10 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01.1998г. №2 ИНСТРУКЦИЯ по применению анти-D IgM моноклонального реагента для определения резус-принадлежности крови человека (ЦОЛИКЛОНА анти-D Супер) ТУ 9398-206-27575295-94 1. Назначение ЦОЛИКЛОН анти-D Супер предназначен для выявления антигена D системы резус в эритроцитах человека. Порядок установления резус-принадлежности крови определен "Инструкцией по определению резус-принадлежности крови", утвержденной Министерством здравоохранения Российской Федерации в 1997 году и Методическими рекомендациями по определению резус-принадлежности крови, утвержденными ГНЦ РАМН 27 апреля 1994 года. В связи с тем, что IgM антитела не вызывают агглютинации некоторых образцов эритроцитов со слабовыраженным D антигеном (Du), образцы донорской крови, которые при исследовании ЦОЛИКЛОНОМ анти-D Супер были определены как D-отрицательные, необходимо дополнительно тестировать с помощью анти-D реагентов, модержащих IgG-антитела (поликлональной сыворокой или моноклональным анти-D IgG реагентом). ^ Действующим началом ЦРЛИКЛОН Анти-D Супер являются моноклональнае анти-D антитела, которые продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши. ЦОЛИКЛОН Анти-D Супер изготовлен на основе культуральной жидкости, кондиционированной клетками-продуцентами антител. Анти-D реагент не содержит антител иной специфичности и поэтому может быть использован для выявления D антигена в эритроцитах любой группы крови. Моноклональные антитела, принадлежат к одному классу иммуноглобулинов - IgM, полностью идентичны по структуре и биологической активности. Анти-D антитела класса М являются полными антителами, т.е. вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих D антиген. ЦОЛИКЛОН Анти-D Супер может быть использован для выявления D антигена в любых вариантах прямой реакции агглютинации на плоскости, в пробирках, в микроплате. ^ Определение D-антигена производится в нативной крови, стабилизированной кронсервантом; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. 3.1. Реакиция агглютинации на плоскости На пластину со смачиваемой поверхностью нанесите большую каплю (около 0,1 мл) реагента. Рядом поместите маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешайте кровь с реагентом. Наиболее крупная агглютинация наблюдается при использовании эритроцитов в высокой концентрации. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 секунд, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 секунд. Использование подогретой до 37-40°С пластинки сокращает время наступления агглютинации. Результаты реакции учитывайте через три минуты. Пластинку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 секунд, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой вгглютинации. 3.2. Реакция агглютинации в пробирках В круглодонную пробирку внесите одну каплю (около 0,1 мл) реагента и добавьте одну каплю 5% суспензии исследуемых эритроцитов в физиологическом растворе. Содержимое пробирки тщательно перемешайте встряхиванием и инкубируйте 30 минут при комнатной температуре. После инкубации пробирку центрифугируйте при 1500-2000 оборотах в минуту в течение одной минуты. Мягко покачивая пробирку,отслоите осадок ото дна. При отрицательном результате осадок эритроцитов разбивается,образуя непрозрачную гомогенную суспензию. При положительном результате в пробирке видны агглютинаты на фоне прозрасной жидкости. 3.3. Реакция агглютинации в микроплате В лунку 96-ячеечной круглодонной микроплаты внесите 0,05 мл реагента и 0,05 мл 2% суспензии исследуемых эритроцитов в физиологическом растворе (эритроциты предварительно дважды отмойте). Через 45-60 минут инкубации при комнатной температуре визуально оцените результат реакции по рисунку осадка эритроцитов на дне лунки: при отрицательном результате осадок эритроцитов собирается в точку, при положительном - имеет большой диаметр,располагается неравномерным слоем, имеет неровные или завернутые края. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям