Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1





Скачать 2.36 Mb.
Название Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1
страница 5/10
Дата 20.03.2013
Размер 2.36 Mb.
Тип Инструкция
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

^ 4. Нейтрализация групповых агглютининов a и b при помощи разведения сыворотки

Для нейтрализации сыворотку антирезус разводят изотоническим раствором NaCl специально подобранной сывороткой нруппы AB(IV) или стандартным разводителем.

Нейтрализация групповых антител при помощи разведения возможна лишь при большом различии титра групповых и резус-антитела.

Например, если титр групповых антитела 1:8, сыворотку следует развести не менее,чем в 16 раз, что возможно только в том случае, если титр резус-антител в ней после разведения сохранится не ниже требований, предъявляемых к стандартной сыворотке антирезус.

В процессе работы в начале следует приготовить пробные разведения сыворотки антирезус и исследовать титр резус-антител, а также степень нейтрализации групповых антитела с 6-8 образцами резус-отрицательных эритроцитов группы A(II) и B(III).

При сохранении достаточного титра резус-антител и полноте абсорбции групповых антитела, разводят основной объем сыворотки антирезус и далее исследуют и обрабатывают в соответствии с "Инструкцией по изготовлению сывороток и реагнета антирезус".


^ 5. Удаление из сыворотки антирезус сопутствующих антител анти-С и анти-Е

Если на какой-либо стадии обработки сыворотки антирезус-D выяснится, что в ней содержатся еще и другие антитела антирезус, последние могут быть удалены путем абсорбации или разведения сыворотки.

Абсорбция производится трижды отмытыми эритроцитами, взятыми приблизительно в половинном объеме по отношению к сыворотке. Если в сыворотке имеется примесь антител анти-С, то для абсорбции применяются эритроцитов фенотипа Ccddee, а если имеется примесь анти-Е, то эритроциты фенотипа ccddEe. Абсорбция проводится в течение 2-3 час. при температуре 37°С при помешивании с последующей проверкой сыворотки на специфичность и активность. Если сопутствующие антитела не удалились, сорбцию можно повторить.

Разведение сыворотки антирезус для удаления сопутствующих антитела можно проводить при титре антител анти-D не ниже, чем 1:128-1:256 и титре сопутствующих антител не выше 1:2.

Сыворотку антирезус разводят изотоническим раствором NaCl, сывороткой-разводителем или стандартным разводителем.

В начале следует делать пробные порции, которые исследовать на полноту нейтрализации сопутствующих антител и на сохранность достаточного титра резус-антител-D. При положительном результате разводят основной объем сыворотки. Как после абсорбции так и после разведения основного объема сыворотки, ее вновь обрабатывают и исследуют далее в соответствии с "Инструкцией по изготовлению стандартных сывороток и реагента антирезус".


^ 6. Получение и обработка амниотической жидкости для использования её при изготовлении сывороток антирезус

Амниотическую жидкость собирают в родильных домах от каждой роженицы отдельно в чистые флаконы. От одной роженицы может быть получено от 100 до 1500 мл. На этикетке флакона указывают фамилию роженицы, дату взятия, количество и по возможности группу крови новорожденного.

Групповая принадлежность амниотической жидкости соответствует группе крови новорожденного.

Оплата за сбор амниотической жидкости производится учреждениями службы крови аналогично оплате за ретропалцентарную кровь из средств на заготовку крови.


^ Подготовка амниотической жидкости к использованию

Групповую принадлежность амниотической жидкости устанавливают путем определения групповой принадлежности крови новорожденного или методом истощения агглютининов a и b в гемагглоютинирующей сыворотке группы О(I). Для этого в пробирке смешивают равные объемы (по 1 мл) стандартной гемагглютинирующей сыворотки с титром 1:32 и испытуемой амниотической жидкости. Смесь перемешивают и оставляют на 10 минут при комнатной температуре. Затем смесь сыворотки и амниотической жидкости исследуют на плоскости со стандартными эритроцитами группы A(II) и B(III). Соотношение эритроцитов и смеси должно соответствовать примерно 1:10, экспозиция 5-7 минут.


^ Трактовка результатов

- Наличие агглютинации в каплях с эритроцитами группы A(II) и B(III) указывает на отсутствие в амниотической жидкости групповых антигенов А и В, т.е. на принадлежность ее к группе O(I). Такая амниотическская жидкость не пригодна для нейтрализации групповых агглютининов.

- Отсутствие агглютинации в капле с эритроцитами группы A(II) и наличие агглютинации в капле с эритроцитами группы B(III) указывает на принадлежность амниотической жидкости к группе A(II).

- Отсутствие агглютинации в капле с эритроцитами группы B(III) и наличие агглютинации в капле с эритроцитами группы A(II) указывает на принадлежность амниотической жидкости к группе B(III).

- Отсутствие агглютинации в каплях, как с эритроцитами группы A(II), так и с эритроцитами группы B(III) указывает на принадлежность амниотической жидкости к группе AB(IV).

Групповую принадлежность записывают на этикетке, которую наклеивают на флаконе с амниотической жидкостью.


^ Контроль амниотической жидкости на специфичность

Следует учитывать возможность попадания в амниотическую жидкость крови роженицы, в связи с чем необходимо исследовать каждый образец амниотической жидкости на наличие групповых агглютининов.

Иследование амниотической жидкости с эритроцитами группы A(II) и B(III) проводится аналогично определению групповой принадлежности крови.

Наличие агглютинации означает наличие в амниотической жидкости групповых агглютининов крови роженицы. Такой образец непригоден для работы.


^ Фильтрация и консервирование амниотической жидкости

После определения групповой принадлежности и контроля на специфичность амниотическую жидкость фильтруют через обычный бумажный фильтр или под вакуумом через фарфоровую воронку Бюхнера, в которую помещают измельченную фильтровальную бумагу толщиной 5-7 мм. После фильтрации амниотическая жидкость становится прозрачной.

Консервирование производится борной кислотой из расчета 2 гр на 100 мл или азидом натрия 1 г на 1000 мл.

Срок хранения амниотической жидкости 12 месяцев при 4-8°С.


^ Высушивание амниотической жидкости

С целью удлинения срока годности амниотическую жидкость высушивают по 150-250 мл во флаконах емкостью 250-500 мл. На флаконы наклеивают этикетки с указанием группы амниотической жидкости по системе АВО, ее исходного количества и даты высушивания.

Высушенную амниотическую жидкость хранят при комнатной температуре. Срок годности 5 лет. Высушенную амниотическую жидкость перед употреблением разводят дистиллированной водой до исходного объема. После растворения используют аналогично нативной.


Приложение 7

УТВЕРЖДЕНО

Приказ Минздрава России

от 09. 01. 1998г. № 2


ИНСТРУКЦИЯ

^ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ


I. ВВЕДЕНИЕ


Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах людей антигена D системы Резус.

В систему Резус входят шесть антигенов: D, d, C, c, E, e, которые определяют с помощью соответствующих антисывороток. Антиген d серологически не выявляется. Существуют также разновидности антигенов резус: Du, Cw, cv cx и другие.

Антигены системы Резус встречаются со следующей частотой:

D - 85%

C - 70%

E - 30%

c - 80%

e - 97,5%

Антигены системы резус обладают способностью вызывать образование изоиммунных антител.

Наиболее активным в этом отношении является антиген D, который и подразумевается под термином резус-фактор. Именно по наличию или отсутствию антигена D все люди делятся на резус-положительных и резус-отрицательных.

Различные сочетания антигенов резус в крови отдельных людей составляют 28 групп системы Резус. (Табл.1). В четырнадцати из них содержится антиген D - они являются резус-положительными, а другие четырнадцать не содержат антигена D (нижняя часть таблицы) - их относят к резус-отрицательным.

Таблица 1

^ СИСТЕМА РЕЗУС


№ п\п

Резус-положительные




Фенотип

Частота в %

Генотип

Частота в %

1-2

CCDDEE CwCDEe

0.00







3

CCDDEe

0.07

CDE/CDe




4

CcDEE

0.035

CDE/cdE

cDE/CdE

0.006

0,029

5

CcDEe

13,69

CDe/cDE

CDE/cDe

CDe/cdE

cDE/Cde

CDE/cde

cDE/cdE

12,24

0,01

0,97

0,27

0,19

0,006

6

CwcDEe

1,23







7

ccDEe

11,82

cDE/cde

cDE/cDe

cDe/cdE

10,04

0,72

0,06

8

ccDEE

2,49

cDE/cDE

cDE/cdE

2,16

0,33

9

CcDee

31,93

Cde/cde

CDe/cDe

cDe/Cde

29,90

1,98

0,05

10

CwcDee

2,38







11

CCDee

16.81

CDe/Cde

CDe/Cde

16,01

0,80

12

CwCDee

2,60







13

CwCwDe

0,00







14

ccDee

2,21

cDe/cde

cDe/cDe

2,10

0,11

Резус-отрицательные

15

ccddee

12,71

cde/cde




16

Ccddee

1,54

Cde/cde




17

CCddee

0,03

Cde/Cde




18

Cwcddee

0,035

Cwde/cde




19

ccddEe

0,070

cde/cdE




20

CcddEe

0,35

Cde/cdE




21-28

CwCddee CwCwddee

ccddEE CcddEE

CCddEE CCddEe

CcddEe CwCddEe

0,00








^ II.ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ


1.Определение резус-принадлежности

Определение резус-принадлежности производится специалистом, имеющим специальную подготовку.

Определение резус-принадлежности реципиентов производится стандартной сывороткой анти-D, что дает возможность разделить их на резус-положительных (Rh+) и резус-отрицательных (rh-).

В отличие от реципиентов определение резус-принадлежности крови доноров производится в два этапа: сначала кровь доноров исследуется стандартной сывороткой анти-D, а затем кровь доноров, давшую отрицательную реакцию с сывороткой анти-D, исследуют дополнительно стандартными сыворотками антирезус, содержащими антитела анти-С и анти-Е. Антитела анти-С и анти-Е могут быть в сыворотке как в чистомвиде, так и в сочетании с антителами анти-D, например: анти-D+С, анти-D+Е или анти-D+С+Е.

В число резус-отрицательных доноров зачисляются только лица, кровь которых дает отрицательную реакцию со всеми сыворотками, т.е. не содержит ни одного из этих трех антигенов резус D, С, Е.

Иногда такие дополнительные исследования требуется проводить и у других лиц - у больных с подозрением на изосенсибилизацию и у беременных женщин.

Резльтат определения резус-принадлежности крови доноров записывается в специальных листах или журнале и на лицевом листе донорского журнала (карточке) с указаниемдаты и за подписью лиц, производивших определение.

Результат определения резус-принадлежности крови больных и других лиц записывается в специальный журнал и на бланке с указанием даты и за подиписью лиц, производивших определение. Этот бланк вклеивается в историю болезни и, кроме того, результат,указанный на этом бланке, записывается лечащим врачом в правом верхнем углу лицевого листа историиболезни и скрепляется его подписью с указанием даты.

^ 2.Учет групповой принадлежности сыворотки антирезус.

Сыворотки антирезус изготавливаются обычно в виде "универсальных", т.е. лишенных групповых антител анти-А и анти-В. Такие сыворотки пригодны для определения резус-принадлежности крови людей любой группы по системе АВО.

Однако, если изготовляются сыворотки антирезус различных групп по системе АВО, то в этих случаях при определении резус-принадлежности необходимо учитывать групповую специфичность сыворотки. Сывороткой антирезус группы O(I) определяется резус-принадлежность только в эритроцитах группы 0(I); сывороткой антирезус группы A(II) только в эритроцитах групп O(I) и A(II); сывороткой антирезус группы B(III) - только в эритроцитах групп O(I) и B(III); сывороткой антирезус группы AB(IV) и специально приготовленной "универсальной" резус-принадлежность определяется в эритроцитах группы AB(IV) и любой другой группы крови.

^ 3.Контрольные исследования.

При каждом исследовании или проводимой серии исследований необходимо для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус ставить контроль. Для контроля применяются стандартные резус-положительные эритроциты группы O(I) или той же группы, что и исследуемая кровь, и стандартные резус-отрицательные эритроциты.

О стандартных эритроцитах см."Инструкцию по взятию и учету крови, получаемой от доноров малыми дозами для приготовления стандартных эритроцитов".

^ 4.Особенности стандартных сывороток антирезус.

Стандартные сыворотки для определения резус-принадлежности могут содержать резус-антитела разные по форме - полные и неполные (см."Инструкцию по исследованию сыворотки на наличие резус-анттел"). Каждые их этих антител активны только в особых условиях, поэтому методика определения резус-принадлежности зависит от того, какие резус-антитела находятся в стандартной сыворотке.

Метод использования каждой стандартной сыворотки антирезус указывается в сопроводительной инструкции.


^ III. РАЗЛИЧНЫЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

Метод определения резус-принадлежности зависит от формы антител в стандартной сыворотке и способа ее изготовления.

При выдаче сыворотки антирезус к ней придается краткая сопроводительная инструкция с описанием того метода, для которого предназначена данная серия выдаваемой сыворотки.

^ 1. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации с применением желатина в пробирке с подогревом 46-48°С.

а) Специальное оснащение.


Стандартная сыворотка антирезус анти-D с неполными антителами.

Стандартные эритроциты Rh+ и rh- для контроля.

Центрифужные или другие пробирки вместимостью 10 мл.

Водяная баня 46-48°С. Суховоздушный термостат 46-48°С.

10% раствор желатина. (желатин можно сохранять с консервантом - сульфацилом натрия (альбуцид) - из расчета 100 мг альбуцида на 10 мл 10% раствора желатина).

Лупа с 2-4-кратным увеличенем.

б) Предварительная обработка испытуемой крови и стандартных эритроцитов. Кровь для исследования следует брать в количестве 5-8 мл в пробирку без стабилизатора. На пробирке надписать фамилию, инициалы и группу крови лица,от которого взята кровь.

Обычно после свертывания крови на дне пробирки остается небольшое количество свободных эритроцитов, которые следует употреблять для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сверток для отделения большего количества эритроцитов.

Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при температуре +4-8°С.

Можно брать кровь с изотоническим раствором лимоннокислого натрия или другого стабилизатора (0,25 мл на 1 мл крови). В этом случае эритроциты необходимо отмыть, для чего в пробирку долить доверху изотонический раствор NaCl содержимое ее перемешать и центрифугировать. Отмытые эритроциты использовать для исследования.

Непосредственно перед исследованием кровь может быть взята из места укола пальца стеклянной палочкой и немедленно помещена в пробирку с заранее введенной сывороткой антирезус, смешанной с желатином 1:2.

в) Техника определения. В штатив устанавливают два ряда пробирок по числу исследуемых образцов эритроцитов в каждом ряду и по две пробирки для стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эрироцитов. На каждых двух пробирках надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого будет исследоваться. Пробирки нумеруют. В одинаково обозначенные пробирки (в два ряда) вводят по 1 капле (0,05 мл) стандартных Rh+ и rh- эритроцитов.

Во все пробирки первого ряда добавляют по одной капле (0,05 мл) сыворотки антирезус.

Во все пробирки (в два ряда) добавляют по две капли (0,1 мл) 10% раствора желатина, предварительно подогретого до разжижения.

Второй ряд является контролем для исключения возможного неспецифического склеивания эритроцтов (прямая желатиновая проба).

Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и штатив с пробирками помещают в водяную баню при 46-48°С на 15 минут или в суховоздушный термостат на 25-30 минут.

При извлечении пробирок из водяной бани или термостата доливают в них 5-8 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содержимое путем 1-2-кратного перевертывания пробирок.

г) Трактовка результатов. Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу.

Результат трактуют по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов.

При положительном результате агглютинаты легко различимы в виде красных комочков в прозрачной, почти обесцвеченной жидкости.

При отрицательном результате в пробирке видна равномерно окаршенная в светло-красный цвет, опалесцирующая жидкость.

Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой анти-D, являются резус-положительными (Rh+). Образцы эритроцитов, давшие агглютинации с сывороткой анти-D - резус-отрицательными (rh-). Однако результаты учитывают как истинные после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутсвии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы O(I). В пробирках второго (контрольного) ряда агглютинации быть не должно.

Наличие агглютинации в какой-либо пробирке контрольного ряда (прямая желатиновая проба положительная) говорит о неспецифичности реакции. При этих условиях положительный результат с сывороткой антирезус не может быть учтен как истинный. В таких случаях рекомендуется отмыть исследуемые эритроциты теплым изотоническим NaCl для элюирования с них аутоантител и повторить исследование. При сомнительном результате для определения резус-принадлежности следует применить метод агглютинации в солевой среде с использованием сывороток антирезус, содержащих неполные антитела.

^ 2. Определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева).

Специальное оснащение.


стандартный универсальный реагент антирезус- анти-D;

33% раствор полиглюкина;

стандартные эритроциты Rh+ и rh- для контроля;

центрифцзные или другие пробирки вместимостью 1- мл;

лупа с 2-4-кратным увеличением.

Предварительная обработка исследуемой крови не требуется. Может быть использована кровь, взятая непосредственно перед исследованием из места укола пальца, консервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке после образования свертка крови, взятой безстабилизатора.

Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при 4-8°С.

^ Техника реакции.

В штатив устанавливают два ряда пробирок по числу исследуемых образцов эритроцитов в каждом ряду и по две пробирки для стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. На пробирках надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется.

Во все пробирки первого ряда вводят по 2 капли (0,1 мл) стандартного универсального реагента антирезус.

Во все пробирки второго (контрольного) ряда вводят по 2 капли (0,1 мл) изотонического раствора NaCl и по 1 капле (0,05 мл) 33% раствора полиглюкина.

В кажду пару одинаково обозначенных пробирок вводят согласно маркировке по 1 капле (0,05 мл) исследуемой крови. В пробирки, предназначенные для контроля, вводят стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты.

Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по ее стенкам. Такое растекание крови по стенкам пробирок делает реакцию более выраженной. Как правило, агглютинация наступает уже в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитела и четко выраженной реакции, а также в виду возможности замедленной реакции при слабо выраженной агглютинабельности эритроцитов, контакт эритроцитов с реагентом при поворачивании пробирок проводят не менее 3 минут.

Через 3 минуты в пробирки добавляют по 2-3 мл изотонического 0,85% раствора NaCl, и перемешивают содержимое 2-3-кратным перевертванием пробирок, не встряхивая.

^ Трактовка результатов

Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу. Результат трактуют по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов.

При наличии агглютинации в виде крупных комочков или хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости исследуемую кровь считают резус-положительной (Rh+). При отсутствии агглютинации (в пробирке сохраняется гомогенное окрашивание) исследуемую кровь следует считать резус-отрицательной (rh-). Однако эти результаты следует учитывать как истинные только после проверки контрольных образцов, т.е при положительной реакции со стандартными резус-положительными эритроцитами, отрицательной - с резус-отрицательными,а также после просмотра результатов во 2-ом контрольном ряду.

Во всех пробирках 2-го ряда агглютинации быть не должно.

Наличие агглютинации в какой-либо пробирке контрольного ряда указывает на неспецифическое склеивание эритроцитов и, следовательно, не позволяет учесть результат исследования как истинный.

В этом случае рекомендуется отмыть исследуемые эритроциты теплым изотоническим раствором NaCl для элюирования с них антител и повторить исследование.

В сомнительных случаях для определения резус-принадлежности следует применить метод агглютинации в солевой среде, используя сыворотку с полными антителами.

^ 3. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации в сывороточной среде на плоскости с подогревом.

Специальное оснащение.


стандартные сыворотки антирезус анти-D с неполными антителами;

стандартные эритроциты Rh+ и rh- для контроля;

пластмассовые пластины;

водяная баня 46-48°С.

^ Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов.

Кровь для исследования берут в количестве 3-5 мл в обычные пробирки без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы и группу крови лица, от которого берется кровь. Обычно после свертывания крови на дне пробирки остается небольшое количество эритроцитов, которые следует употреблять для реакции. Если этих эритроцитов недостаточно, следует интенсивно встряхнуть сверток для отделения большего количества эритроцитов.

Эритроциты используют для исследования в виде 5-10% взвеси в собственной сыворотке. Взвесь готовит на глаз в этих же пробирках путем встряхивания содержимого.

Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при 4-8°С.

^ Техника определения.

На пластмассовую плстину у обозначений наносят по 1 большой капле (0,1 мл) сыворотки антирезус в три ряда по горизонтали, всего в 6 точек (3 -одной серии сывороток и 3 - другой). Кроме того, в одну точку наносят большую каплю (0,1 мл) стандартной сыворотки группы АВ(IV), не содержащей резус-антител (контроль на неспецифическую агглютинацию).

К первой капле каждой серии сыворотки добавляют одну каплю (0,05 мл) взвеси исследуемых эритроцитов, ко второй капле каждой серии- 1 каплю (0,05 мл) контрольных резус-положительных, одноименных с группой крови больного или группы 0(I), и к третьей капле каждой серии 1 каплю (0,05 мл) контрольных резус-положительных эритроцитов, обязательно одноименных с группой крови больного по системе АВО. В контрольную каплю с сывороткой группы AB(IV), не содержащей резус-антител добавляют одну каплю (0,05 мл) исследуемых эритроцитов. Капли перемешивают стеклянной палочкой и пластину опускают в водяную баню при 46-48°С на 10 минут.

^ Трактовка результатов.

Результаты исследований просматривают при легком покачивании пластины и трактуют по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов.

При положительном результате агглютинины легко различимы на почти обесцвеченном фоне жидкости.

При отрицательном результате капля остается равномерно окрашенной в красный цвет.

Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой анти-D, являются резус-положительными (Rh+).

Образцы эритроцитов, не давшие агглютинацию с сывороткой анти-D, являются резус-отрицательными (rh-). Однако, эти результаты учитывают как истинные только при совпадении их в обеих сериях сыворотки антирезус и после проверки контрольных образцов эритроцитов, подтверждающих специфичность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы O(I), а также при отрицательном результате в контрольной капле с сывороткой группы AB(IV), не содержащей резус-антител. Наличие агглютинации в этой капле говорит о неспецифическом склеивании эритроцитов, и, следовательно, положительный результат с сывороткой антирезус не может быть учтен как истинный. В этих случаях резус-принадлежность следует определять, применяя другие методы исследования.

^ 4.Определение резус-принадлежности реакцией агглютинации в солевой среде.

Специальное оснащение.


стандартные сыворотки антирезус анти-D с полными антителами;

стандартные эритроциты Rh+ и rh- для контроля;

пробирки высотой 1,5-2,0 см и диаметром 0,5-0,6 см с гладким дном округлой формы или планшеты для иммунологических реакций с углублениями такой же конфигурации и объема;

лупа с 2-4-кратным увеличением;

термостат 37°С.

^ Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов.

Кровь для исследования берут в количестве 0,5-1 мл в обычные пробирки, содержащие 0,25 мл (5 капель) изотонического раствора лимоннокислого натрия или другого стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы и группу крови лица, от которого взята кровь. Эритроциты необходимо отмыть, для чего в пробирки доливают доверху изотонический раствор Na Cl, содержимое их перемешивают и центрифугируют.

Можно брать кровь без стабилизатора. При этом после свертывания крови обычно в пробирке остается некоторое количество свободных эритроцитов. Если этих эритроцитов недостаточно, следует интенсивно встряхнуть сверток для отделения большего количества эритроцитов. Полученные таким образом эритроциты отмывают как сказано выше.

Из отмытых эритроцитов приготавливают 20% взвесь, для чего 1 каплю эритроцитов переносят в соответственно обозначенную пробирку, содержащую 49 капель изотонического раствора NaCl.

2% взвесь эритроцитов употребляют для исследования.

Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при 4-8°С.

^ Техника определения.

В штатив устанавливают два ряда пробирок по числу исследуемых образцов эритроцитов в каждом ряду и две - для контролей. Предварительно штатив накрывают листом бумаги. На нем слегка накалывают отверстия, сквозь которые и устанавливают пробирки. Против каждой пары пробирок на бумаге надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого будет исследоваться.

Во все пробирки (лунки планшета) первого ряда вводят по 1 капле (0,05 мл) сыворотки антирезус одной серии, во все пробирки (лунки) второго ряда - по 1 капле (0,05 мл) сыворотки антирезус другой серии и во все пробирки (лунки) обоих рядов по 1 капле изотонического раствора NaCl.

В соответственно обозначенные пары пробирок (лунок планшета) добавляют по одной капле (0,05 мл) 2% взвеси испытуемых эритроцитов, а в контрольные - по одной капле (0,05 мл) 2% взвеси контрольных (стандартных) резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.

Содержимое тщательно перемешивают встряхиванием и помещают в термостат при 37°С на 1 час. Можно затем оставить пробирки на столе при комнатной температуре еще на 1,5-2 часа до учета результата.

За это время эритроциты оседают на дно, предварительно войдя в контакт с сывороткой антирезус.

^ Трактовка результатов.

Пробирки (планшеты) следует рассматривать по продольной оси над источником света, закрытым матовым стеклом.

Результат трактуют о наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов, что выражается в разной форме их осадка на дне.

При положительном результате осадок эритроцитов располагается на дне неравномерным слоем. Видна шероховатость, губчатость или зернистость его структуры. Края осадка не бывают ровными, они изогнуты, иногда завернуты внутрь. В некоторых случаях эритроциты располагаются в виде волнистого венчика вокруг более светлой центральной части.

При отрицательном результате осадок эритроцитов располагается равномерным слоем без шероховатостей и неровностей, иногда с небольшим просветлением в центре. Границы его представляют собой правильно очерченный кругю

Диаметр осадка при отрицательном результате всегда меньше, чем при положительном.

Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой анти-D, являются резус-положительными (Rh+), образцы эритроцитов, не давшие агглютинации с сывороткой анти-D - езус-отрицательными (rh-).

Однако результаты учитывают как истинные при совпадении их в обеих сериях сыворотки антирезус и после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы 0(I).

Примечание. Полные антитела не выявляют слабый антиген Du.

^ Повторное использование сыворотки. После определения резус-принадлежности из всех пробирок осторожно отсасывают сыворотку (эритроциты остаются на дне) и собирают ее в пробирку. Эту сыворотку можно повторно несколько раз применять для определения резус-принадлежности, пока активность ее не иссякнет, т.е. пока она будет давать четку агглютинацию со стандартными резус-положительными эритроцитами и отрицательную реакцию - со стандартными резус-отрицательными эритроцитами.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Приказ 23 мая 1985 г. N 700 о мерах по дальнейшему предупреждению осложнений при переливании крови,

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Методика определения группы крови. Проведение проб на совместимость при переливании крови. Показания

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Концепция разработана по заказу Минобразования России при консультативной поддержке Минздрава России

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Приказ Минздрава России от 20. 12. 01 №460 инструкция по констатации смерти человека на основании

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Приказ от 24 ноября 1998 г. N 338 о внесении изменений и дополнений в приказ минздрава россии от

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Согласно Приложению к Приказу Минздравсоцразвития России от 30 октября 2007 г. N 673 о внесении изменений

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Приказ >> от 18 октября 2002 года n 316 >> Об утверждении перечня нормативных правовых актов Минздрава

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Приказ Минздрава РФ от 30 июля 2001 г. N 291 "О мерах по предупреждению распространения инфекций,

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Приказ Минздрава России от 12 ноября 2012г. №572н

Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1 icon Выдержки из Приказа Минздрава РФ от 25 ноября 2002 г. №363 "Об утверждении Инструкции по применению

Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина


База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Документы