Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1
|
|
Скачать 2.36 Mb.
|
|
^ К 2 объемам сыворотки антирезус с неполными антителами добавляют 1 объем 33% раствора полиглюкина, тщательно перемешивают и далее проводят исследование в отношении специфичности и активности. ^ Пробный образец реагента исследуют с 2-3 образцами резус-положительных эритроцитов, а также с резус-отрицательными ccddee группы 0(I), A(II) и B(III). Кроме того, в исследование включают эритроциты генотипа Ccddee и ccddEe. Среди резус-отрицательных должны быть образцы, положительные и отрицательные по факторам Даффи (Fy) и Келл (K). Для исследования устанавливают ряд пробирок по числу образцов эритроцитов, пробирки маркируют. На дно пробирок помещают по 2 капли исследуемого реагента и затем, в соответствии с маркировкой в пробирки вводят по 1 капле эритроцитов. Содержимое пробирок тщательно перемешивают, затем пробирки наклоняют почти до горизонтального положения,медленно поворачивают и т.д., как сказано выше. ^ Результат учитывают по отсутствию или наличию агглютинации эритроцитов и скорости ее наступления в каждой пробирке. Специфичность оценивают по отсутствию агглютинации с D-отрицательными эритроцитами различного фенотипа в каждой отдельной пробирке. Если агглютинация произошла во всех пробирках с резус-положительными образцами, а со всеми резус-отрицательными образцами и образцами Ccddee и ccddEe - реакция отрицательная, пробный образец считают специфическим. Активность пробного образца можно оценивать одновременно с оценкой специфичности. Если агглютинация резус-положительных эритроцитов проявилась при поворачивании наклоненной пробирки в течение 1-й минуты и через 3 минуты после добавления изотонического растовра NaCl агглютинаты образуют крупные хлопья на фоне полностью просветленной жидкости и при этом титр антител, определенный на предыдущем этапе исследования не ниже 1:32, реагент считают пригодным для практического использования. ^ После заключения о пригодности пробного образца можно готовить стандартный универсальный реагент в полном объеме, исходя из потребности. Изготовленный реагент вновь контролируют теми же методами, т.е. титруют и исследуют на специфичность и активность и делают заключение о его пригодности. После этого реагент фильтруют, разливают по 2-5 мл во флаконы или ампулы, которые тщательно закупоривают (запаивают) и наклеивают на них этикетки с указанием учреждения, изготовившего реагент, название реагента, специфичности, номера серии и срока годности.
Рисунок 2. Форма этикетки для стандартного универсального реагента антирезус. ^ Реагент хранят в холодильнике при 4-8°С. Срок годности- 6 месяцев. Активность и специфичность реагента контролируют 1 раз в месяц в лаборатории, его изготовившей. ^ Реагент антирезус выдается в другие учреждения в комплекте с 33% раствором полиглюкина и с инструкцией по использованию (см.дополнение 2). ^ Все этапы работы по изготовлению сывороток, предназначенных для разных методов определения резус-прнадлежности, а также реагента антирезус, регистрируются в "Журнале регистрации материала, поступившего для изготовления стандартной сыворотки антирезус" и в "Журнале регистрации изготовленной сыворотки антирезус". Дополнение 1 ИНСТРУКЦИЯ по использованию стандартной сыворотки антирезус для определения резус-принадлежности реакцией с применением желатина. (Прилагается при выдаче сыворотки) Реакция с применением желатина пригодна для работы с сыворотками, содержащими неполные резус-антитела. ^ При определении резус-принадлежности необходимо учитывать групповую специфичность сыворотки по системе АВО. Сывороткой антирезус или группы B(IV) специально приготовленной - универсальной определяют резус-принадлежность в эритроцитах любой группы по системе АВО. Сывороткой антирезус группы 0(I) определяют резус-принадлежность только в эритроцитах группы 0(I), сывороткой группы A(II) - в эритроцитах группы 0(I) и A(II) и сывороткой антирезус группы B(III) - в эритроцитах группы 0(I) и B(III). При каждом исследовании или проводимой серии исследований необходимо для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус ставить контроль. Для контроля применяют стандартные резус-положительные эритроциты группы 0(I) или той же группы, что и исследуемая кровь и стандартные резус-отрицательные эритроциты обязательно той же группы, что и исследуемая кровь. ^ Кровь для исследования берут в количестве 5 мл в обычную пробирку без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы и группу крови лица, от которого взята кровь. Обычно после свертывания крови на дне пробирки остается небольшое количество свободных эритроцитов, которые и следует употреблять для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сверток для отделения большего количества эритроцитов. Можно брать кровь с изотоническим раствором лимоннокислого натрия (0,25 мл на 1 мл крови) или другим стабилизатором. В этом случае эритроциты необходимо отмыть, для чего в пробирку долить доверху изотонический раствор NaCl, содержимое ее перемешать и центрифугировать. Отмытые эритроциты используют для исследования. Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при 4-8°С. ^ а) В штатив устанавливают два ряда центрифужных пробирок объемом не менее 10 мл по количеству исследуемых образцов эритроцитов и по две пробирки для стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. На двух пробирках каждого ряда надписывают фамилию, инициалы лица, кровь которого будет исследоваться. б) В одинаково обозначенные пробирки вводят согласно маркировке по одной капле (0,05 мл) исследуемых эритроцитов, в контрольные пробирки: - по одной капле (0,05 мл) стандартных резус-положительных эритроцитов и по 1 капле (0,05 мл) стандартных резус-отрицательных эритроцитов. в) Во все пробирки добавляют по две капли (0,1 мл) 10% раствора желатина, предварительно подогретого до разжижения в теплой воде (46-48°С). Перед употреблением желатин следует просмотреть. При помутнении или появлении хлопьев, а также при потере свойств застудневать при 4-8°С желатин непригоден. г) Во все пробирки 1-го ряда добавляют по одной капле (0,05 мл) сыворотки антирезус. 2-ой ряд служит контролем для исключения возможной неспецифической агглютинации исследуемых эритроцитов, например за счет аутоантител. д) Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и штатив с пробирками помещают в водяную баню при 46-48°С на 15 минут или в суховоздушный термостат при той же температуре на 30-45 минут. е) По извлечении пробирок из водяной бани или термостата в них доливают 8-10 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содержимое путем 1-2-кратного перевертывания пробирок. ^ Прбирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу. Результат трактуют по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов. При положительном результате агглютинаты легко различимы в виде красных комочков на прозрачном, почти обесцвеченном, фоне жидкости. При отрицательном результате в пробирке видна равномерно окрашенная слегка опалесцирующая жидкость. Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой анти-D, считают резус-положительными (Rh+), образцы эритроцитов, не давшие агглютинации с сывороткой анти-D - резус-отрицательными (rh-). Однако эти результаты следует учитывать как истинные только после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резс-положительными эритроцитами одноименной группы или группы 0(I), а также после просмотра результатов во втором ряду. В пробирках второго (контрольного) ряда агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации во втором (контрольном) ряду указывает на неспецифическое склеивание эритроцитов, например, из-за аутоантител и, следовательно, положительный результат с сывороткой антирезус не может быть учтен как истинный. Для определения резус-принадлежности в таких случаях следует применить сыворотку антирезус с полными антителами в реакции солевой агглютинации или предварительно отмыть эритроциты теплым изотоническим раствором NaCl, для элюирования с них аутоантител. Примечание: 1. Изредка встречаются образцы эритроцитов, дающие слабо выраженную реакцию. В этих случаях следует повторно исследовать их несколькими сериями сыворотки антирезус высокой активности и, по возможности, сывороткой с полными антителами. 2. При определении резус-принадлежности крови доноров недостаточно разделения их только на резус-положительных и резус-отрицательных по сыворотке анти-D, а необходимо дополнительное исследование сыворотками, содержащими антитела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных доноров зачисляются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов, т.е. фенотипа ccddee. 3. Определение антигенов системы резус C, E, c, e, и Cw производится сыворотками, содержащими антитела соответствующей специфичности. Эти антитела могут быть в сыворотке как в чистом виде, так и в различных сочетаниях, в том числе и с анти-D. Эти исследования производятся теми же методами, что и определение резус-антигена D. В качестве контролей используются эритроциты соответствующего фенотипа. Подробности о технике реакции, оценке результатов, мерах предупреждения возможных ошибок см. в "Инструкции по определению резус-принадлежности крови". Дополнение 2 ИНСТРУКЦИЯ по использованию стандартного универсального реагента для определения резус-принадлежности в пробирках без подогрева (Прилагается при выдаче реагента) Стандартный универсальный реагент не содержит групповых агглютининов a и b и поэтому может быть использован для определения резус-антигена D в эритроцитах любой группы системы АВО. Для контроля активности и специфичности реагента антирезус необходимо одновременно с основным исследованием ставить контроль, используя стандартные резус-положительные и стандартные резус-отрицательные эритроциты. ^ исследуемой крови и стандартных эритроцитов не требуется. Может быть использована кровь, взятая непосредственно из места укола пальца, консервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке, после образования свертка крови, взятой без стабилизатора. Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при 4-8°С. ^ а) В штатив устанавливают два ряда пробирок по числу исследуемых эритроцитов в каждом ряду и по 2 пробирки для контрольных исследований. На пробирках надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. б) Во все пробирки 1-го ряда вводят по 2 капли (0,1 мл) стандартного универсального реагента антирезус. Во все пробирки 2-го ряда вводят по 2 капли (0,1 мл) изотонического раствора NaCl и по 1 капле (0,05 мл) 33% раствора полиглюкина. 2-й ряд служит контролем для исключения возможной неспецифической агглютинации исследуемых эритроцитов, например за счет аутоантител. в) В каждую пару одинаково обозначенных пробирок вводят согласно маркировке по 1 капле (0,05 мл) исследуемой крови (эритроцитов) и стандартные резус-положительные (Rh+) и резус-отрицательные (rh-) эритроциты. г) Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки. Такое размазывание крови по стенкам пробирки делают реакцию более выраженной. Как правило, агглютинация эритроцитов наступает уже в течение первой минуты, но для образования устойчивости комплекса антиген+антитела и четко выраженной реакции, а также ввиду возможности замедленной реакции при слабовыраженной агглютинабельности эритроцитов, конткакт эритроцитов с реагентом при поворачивании пробирок проводят не менее 3 минут. Через 3 минуты в пробирки добавляют по 2-3 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содержимое путем 2-3-кратного переворачивания пробирок (не встряхивать!). ^ . Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу. Результат трактуют по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов. При наличии агглютинации в виде крупных комочков или хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости, исследуемую кровь относят к резус-положительной (Rh+). При отсутствии агглютинации (в пробирке сохраняется гомогенное окрашивание) исследуемую кровь можно считать резус-отрицательной (rh-). Однако эти результаты можно учитывать как истинные только после проверки контрольных образцов, т.е. при положительной реакции со стандартными резус-положительными эритроцитами и отрицательной - со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, а также после просмотра результатов во 2-м (контрольном) ряду. Во всех пробирках контрольного ряда агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации эритроцитов во втором (контрольном) ряду указывает на неспецифическое склеивание эритроцитов, например, за счет аутоантител и, следовательно, положительный результат с сывороткой антирезус не может быть учтен как истинный. Для определения резус-принадлежности в таких случаях следует применять другую активную сыворотку антирезус и сыворотку антирезус с полнвми антителами или предварительно отмытые эритроциты теплым изотоническим раствором NaCl для элюирования с них аутоантител. Примечание. 1. Изредка встречаются образцы эритроцитов, дающие слабовыраженную реакцию. В этих случаях следует повторно исследовать их несколькими сериями сывороток антирезус высокой активности и параллельно сывороткой антирезус с полными антителами в реакции солевой агглютинации. 2. При определении резус-принадлежности крови доноров недостаточно разделения их на резус-положительных и резус-отрицательных по реагенту анти-D, а необходимо дополнительно исследовать сыворотками, содержащими антитела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных доноров зачисляются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов, т.е. фенотипа ccddee. 3. Определение антигенов системы резус С, Е, с,е производится сыворотками, содержащими антитела соответствующей специфичности. Эти антитела могут быть в сыворотке как в чистом, так и в различных сочетаниях, в том числе и с анти-D. Эти исследования производятся теми же методами, что и определение резус-антигена D. В качестве контролей используются эритроциты соответствующего фенотипа. Подробности о технике реакции, оценке результатов, мерах предупреждения возможных ошибок см. в "Инструкции по определению резус-принадлежности крови". Дополнение 3 ИНСТРУКЦИЯ по использованию стандартной сыворотки антирезус анти-D для определения резус-принадлежности реакцией агглютинации в солевой среде (Прилагается при выдаче сыворотки) Реакция агглютинации в солевой среде пригодна для работы с сывороткой, содержащей полные резус-антитела. ^ Определение резус-фактора следует производить двумя сериями стандартных сывороток антирезус. В настоящей инструкции описывается определение двумя сериями сыворотки с использованием одной и той же методики - агглютинации в солевой среде. При определении резус-принадлежности необходимо учитывать групповую специфичность сыворотки по системе АВО. Сыворотка группы AB(IV) и специально приготовленная - универсальная - предназначена для определения резус-принадлежности крови любой группы по системе АВО. Сывороткой группы 0(I) определяют резус-принадлежность только в эритроцитах группы 0(I), сывороткой группы A(II) - в эритроцитах группы 0(I) и A(II) и сывороткой группы B(III) - в эритроцитах группы 0(I) и B(III). При каждом исследовании или проводимой серии исследований необходимо для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус ставить контроль. Для контроля применяют стандартные резус-положительные эритроциты группы 0(I) или той же группы, что и исследуемая кровь, и стандартные резус-отрицательные эритроциты обязательно той же группы, что и исследуемая кровь. ^ Кровь для исследования берут в количестве 0,5-1 мл в обычные пробирки, содержащие 0,25 мл (5 капель) изотонического раствора лимоннокислого натрия или любого другого стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы и группу крови лица, от которого взята кровь. Эритроциты необходимо отмыть, для чего в пробирки доливают доверху изотонический раствор NaCl, содержимое из перемешивают и центрифугируют. Можно брать кровь и без стабилизатора. При этом после свертывания крови обычно в пробирке остается некоторое количество свободных эритроцитов. Если этих эритроцитов недостаточно, следует интенсивно встряхнуть сверток для отделения большего количества эритроцитов. Полдученные таким образом эритроцитв отмывают, как сказано выше. Из отмытых эритроцитов приготавливают 2% взвесь, для чего одну каплю эритроцитов переносят в соответственно обозначенную пробирку, содержащую 49 капель изотонического раствора NaCl. Такую взвесь употребляют для исследования. Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при 4-8°С. ^ а) в штатив устанавливают два ряда пробирок высотой 2-2,5 см с внутренним диаметром 0,5-0,6 см и с гладким дном округлой формы в каждом ряду по числу исследуемых эритроцитов и по две пробирки для контрольных исследований. Предварительно штатив накрывают листом бумаги, в котором слегка накалывают отверстия, сквозь которые устанавливают пробирки. Против каждой пары пробирок на бумаге надписывают фамилию и инциалы лица, кровь которого исследуется. Можно использовать планшет для иммунологических реакций, имеющий лунки с круглым дном. б) во все пробирки (лунки) 1-го ряда вносят по одной капле (0,05 мл) сыворотки антирезус одной серии, во все пробирки (лунки) 2-го ряда - по одной капле (0,05 мл) сыворотки антирезус другой серии и в оба ряда добавляют по 1 капле изотонического раствора NaCl. в) в соответственно обозначенные пары пробирок (лунок) добавляют по одной капле (0,05 мл) 2% взвеси исследуемых эритроцитов, а в контрольные - по одной капле (0,05 мл) 2% взвеси стандартных резус-положительных эритроцитов и по одной капле взвеси стандартных резус-отрицательных эритроцитов. г) содержимое пробирок (лунок) тщательно перемешивают встряхиванием и помещают в термостат при 37°С на 1 час. (Можно затем оставить планшет при комнатной температуре еще на 1-2 часа до учета результатов). За это время эритроциты оседают на дно, предварительно войдя в контакт с сывороткой антирезус. ^ Пробирки (планшеты) рассматривают по продольной оси над источником света закрытым матовым стеклом. Результат трактуют по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов, что выражается в разной форме их осадка на дне. При положительном результате осадок эритроцитов располагается на дне неравномерным слоем. Видна шероховатость, губчатость или зернистость его структуры. Края осадка никогда не бывают ровными, они изогнуты, иногда завернуты внутрь. В некоторых случаях эритроциты располагаются в виде волнистого венчика вокруг более светлой центральной части. При отрицательном результате осадок эритроцитов располагается равномерным слоем без шероховатостей и неровностей, иногда с небольшим просветлением в центре. Границы его представляют собой правильно очерченный круг. Диаметр при отрицательном результате всегда меньше, чем при положительном. Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой анти-D-, резус-положительные (Rh+). Образцы эритроцитов, не давшие агглютинации с сывороткой анти-D, -резус-отрицательные (rh-). Однако результаты можно учитывать какистинные только при совпадении их в обеих сериях сыворотки антирезус и после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы 0(I). Примечания: 1. Изредка встречаются образцы эритроцитов, дающие слабо выраженную реакцию. В этих случаях следует повторно исследовать их несколькими сериями сыворотки антирезус высокой активности. Антиген крови Du в реакции солевой агглютинации не выявляется. 2. При определении резус-принадлежности крови доноров недостаточно разделения их только на резус-положительных и резус-отрицательных по сыворотке анти-D, а необходимо дополнительно исследовать сыворотками содержащими антитела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных доноров зачисляются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов, т.е. фенотипа ccddee. 3.Определение антигенов системы резус - С, Е, с и е производится сыворотками, содержащими антитела соответствующей специфичности. Эти антитела могут быть в сыворотке как в чистом виде, так и в различных сочетаниях, в том числе и с анти-D. Эти исследования производятся теми же методами, что и определение резус-антигена D. В качестве контролей используются эритроциты соответствующего фенотипа. Подробности о технике реакции, оценке результатов, мерах предупреждения возможных ошибок см. в "Инструкции по определению резус-принадлежности крови". Приложение 6 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01.1998г. № 2 ^ Общие сведения В практической работе по определению резус-принадлежности крови наибольшее удобство представляет использование сывороток антирезус группы крови AB(IV), не содержащих групповых агглютининов a и b. Такие сыворотки являются универсальными, так как позволяют определять резус-принадлежность в крови любой группы по системе АВО. Сыворотки антирезус, принадлежащие к группам O(I), A(II) и B(III), также могут быть превращены в универсальные путем абсорбии или нейтрализации в них групповых агглютининов a и b. Помимо групповых агглютининов использованию сыворотки антирезус мешают также имеющиеся в отдельных случаях изоиммунные антитела другой специфичности, чаще всего анти-С и анти-Е. Если эти антитела имеют низкий титр, они могут быть удалены при помощи абсорбции или путем разведения сыворотки. Использование универсальных сывороток антирезус упрощает работу, повышает эффективность лабораторной службы и исключает получение ошибочных результатов из-за несоответствия группы сыворотки антирезус и исследуемых эритроцитов. Для освобождения сыворотки антирезус от агглютининов a, b и от антител анти-С и анти-Е можно применять разные способы: а) нейтрализацию групповых агглютининов a и b соответствующим групповым веществом, содержащимся в амниотической жидкости (см.п.1) б) нейтрализацию групповых агглютининов a и b естественным групповым веществом А и В (субстанция Витебского) (см.п.2) в) абсорбцию групповых агглютининов a и b резус-отрицательными эритроцитами, находящимися в свртках крови после снятия с них сыворотки (см.п.3) г) нейтрализацию групповых агглютининов a и b путем разведения сыворотки (см.п.4) д) абсорбцию антитела анти-С и анти-Е эритроцитами этой специфичности (см.п.5) е) нейтрализацию антитела анти-С и анти-Е путем разведения сыворотки (см.п.6). ^ Амниотическая жидкость содержит растворенную групповую субстанцию, соответствующую группе крови плода. Она может быть использована как в нативном виде, так и предварительно высушенная и затем растворенная дистиллированной водой (получение и обработку амниотической жидкости см.п.8). Для нейтрадизации агглютининов a и b в сыворотке антирезус группы Oab(I) используют амниотическую жидкость группы AB(IV) или смесь образцов амниотической жидкости групп A(II) и B(III). Для нейтрализации агглютининов b в сыворотке группы Ab(II) используют амниотическую жидкость группы B(III). Для нейтрализации агглютининов a в сыворотке антирезус группы Ba(III) используют амниотическую жидкость группы A(II). Для полного истощения групповых агглютининов в исходной сыворотке антирезус проводят подбор оптимального соотношения амниотической жидкости и нейтрализуемой сыворотки антирезус, для чего: - в штатив устанавливают пять пробирок с обозначениями 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, во все пробирки вносят ао 2 капли амниотической жидкости - нативной или растворенной после высушивания.; - в первую пробирку добавляют 4 капли нейтрализуемой сыворотки,во вторую - 6 капель, в третью - 8 капель, в четвертую - 10 капель, в пятую - 12 капель; - содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 10 минут при комнатной температуре; - после 10-ти минутной экспозиции смесь из каждой пробирки контролируют на плоскости на полноту нейтрализации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, содержащими антиген, соответствующий нейтрализуемым агглютининам; - последнее разведение, в котором отсутствует агглютинация (время наблюдения 5 минут) принимается за оптимальное соотношение амниотической жидкости и нейтрализуемой сыворотки; - если агглютинация отсутствует во всех разведениях, готовят разведения 1:7, 1:8, 1:9 и продолжают исследование, как сказано выше; - после того, как выбрано оптимальное соотношение, к основному объему сыворотки антирезус добавляют соответствующее количество амниотической жидкости и перемешивают их. Через 10-20 минут после перемешивания вновь проверяют сыворотку на полноту абсорбции на плоскости с 6-8 образцами резус-отрицательных эритроцитов группы A(II) и B(III); - далее сыворотку исследуют и обрабатывают в соответсвии с "Инструкцией по изготовлению стандартных сывороток и реагнта антирезус". Примечание: В целях упрощения получения универсальных сывороток из сывороток антирезус группы Ab(II) и Ba(III) их можно предварительно смешивать, что позволяет нейтрализовать одномоментно агглютинины a и b амниотической жидкостью группы AB(IV) или смесью амниотической жидкости группы A(II) и B(III). Предварительно смешивние сыворотки противоположных групп целесообразно еще и потому, что при этом происходит частичная взаимная нейтрализация групповых агглютининов, что снижает количество амниотической жидкости, необходимое для полной нейтрализации, а, следовательно, снижается степень разведения абсорбируемой сыворотки. ^ При низком титре сыворотки антирезус, ограничивающем ее разведение, для нейтрализации агглютининов целесообразно использовать сухой порошок. К нейтрализации приступают так же, - с определения оптимального соотношения сыворотки антирезус и сухого порошка, полученного из амниотической жидкости, для чего: - в штатив устанавливают четыре пронумерованные пробирки, в которые вносят по 0,5 мл сыворотки антирезус; - в первую пробирку добавляют 2 мг высушенной амниотической жидкости, во вторую - 4 мг, в третью - 8 мг и в четвертую - 16 мг. Содержимое пробирок перемешивают до полного растворения порошка и оставляют при комнатной температуре; - через 10 минут проводят испытание на плоскости на полноту нейтрализации с эритроцитами групп A(II) и B(III) и выбирают оптимальное соотношение ингредиентов; - выбранное соотношение используют для изготовления основного объема сыворотки; - далее сыворотку исследуют и обрабатывают в соответствии с "Инструкцией по изготовлению сывороток и реагента антирезус". * Амниотическая жидкость нейтрализует a и b антитела, относящиеся в классу IgM, неполные a и b антитела, относящиеся к классу IgG, при этом не нейтрализуются. ^ Групповые специфические вещества А и В являются вsсокомолекулярными полисахаридами, приготавливаются в производственных условиях из слизистой оболочки свиных и лошадиных желудков путем их ферментативного переваривания с последующим осаждением и очисткой органическими растворителями. Количество группового специфического вещества, необходимого для нейтрализации антител в сыворотке, зависит от активности вещества. Для нейтрализации групповых агглютининов к сыворотке антирезус добавляют групповое специфическое вещество из расчета: - к 1000 мл сыворотки антирезус группы O(I) - 0,1 г группового вещества А и 0,1 г группвого вещества В; - к 1000 мл сыворотки антирезус группы A(II) - 0,1 г группового вещества В; - к 1000 мл сыворотки антирезус группы B(III) - 0,1 группового вещества А. Для растворения групповго вещества необходимое его количество сначала растирается стеклянной палочкой в пробирке или на часовом стекле с небольшим количеством (1 мл) сыворотки антирезус, подогретой до 37°С, затем это групповое вещество переносят в общее количество сыворотки антирезус, тщательно многократно смывая его сывороткой со стекла. Сыворотку антирезус перемешивают с групповым веществом и помещают в термостат на 3 часа, перемешивая каждые 30 минут. После этого сыворотку помещают в холодильник при 4°С не менее, чем на трое муток, а затем исследуют на пластинке на содержание групповых агглютининов с 6-8 образцами резус-отрицательной крови группы A(II) и B(III). Отсутствие агглютинации означает, что групповые агглютинины полностью нейтрализованы. Наличие агглютинации означает неполную нейтрализацию групповых агглютининов. В случае неполной нейтрализации групповых агглютининов к сыворотке вновь добавляют такое же или большее (до 0,5 г) количество группового вещества и вся процедура повторяется. При полной нейтрализации групповых агглютининов сыворотку исследуют и обрабатывают далее в соответствии с "Инструкцией по изготовлению стандарных сывороток и реагента антрезус". ^ Неотмытые свертки крови группы AB(IV), оставшиеся после отсасывания сыворотки антирезус, допустимо хранить при 4-8°С в течение 1-2 суток. Для абсорбции охлажденный сверток измельчают при помощи стеклянной палочки и добавляют к нему также охлажденную сыворотку антирезус в количестве 1/6-1/3 объема по отношению к объему занимаемому измельченным свертком (к 300 мл свертка приливают 50-100 мл абсорбируемой сыворотки, в зависимости от активности групповых антител). Сыворотку тщательно смешанную со свертком оставляют на 18-20 часов при 4-8°С, после чего отделяют от свертка путем центрифугирования. Далее сыворотку проверяют на плоскости с 6-8 образцами резус-отрицательных эритроцитов и в случае полной абсорбции групповых агглютининов обрабатывают и исследуют в соответствии с "Инструкцией по изготовлению сывороток и реагента антирезус". |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям