Приказ Минздрава России от 09. 01. 1998г. №2 инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови I. Введение > 1
|
|
Скачать 2.36 Mb.
|
|
Примечание 1. При определении групповой принадлежности крови больных в лечебных учреждениях могут встретиться трудности, вызванные изменением свойств крови при различных патологических состояниях. Это может выразться в неспецифической агглютинабельности эритроцитов, например, при аутоиммунной гемолитической анемии, у новорожденных с гемолитической болезнью, у больных циррозом печени, с ожогами, при гнойно-септическом состоянии. При некоторых заболеваниях, например, при лейкозах, наблюдается снижение агглютинабельности эритроцитов, особенно группы A(II), а также снижение активности групповых агглютининов. В таких случаях определение групповой принадлежности крови больного должно производиться повторно с использованием стандартных сывороток более высокой активности, желательно в лабораторных условиях. Примечание 2. При использовании для определения групп крови сстемы АВО моноклональных антител следует руководствоваться специальной инструкцией, которая прилагается к комплектам моноклональных антител при их выдаче.
Таблица 1. Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сыороток двух серий каждой группы. Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие ее.
Таблица 2. Оценка результатов определения групп крови перекрестным методом при помощи изогемагглютинирующих сывороток двух серий каждой группы и стандартных эритроцитов. Приложение 4 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01.1998г. № 2 ИНСТРУКЦИЯ по применению Цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ диагностических жидких для определения групп крови человека системы АВО (антитела моноклональные анти-А, анти-В, анти-АВ) ТУ 9398-205-27575295-94 1. НАЗНАЧЕНИЕ Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. ^ Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его аонтаминации патогенными для человека вирусами. ^ Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости: и на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С. 3.1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями. 3.2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). 3.3. Смешайте кровь с реагентом. 3.4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины или планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, но наблюдение следует вести три минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. 3.5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. 3.6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлены в таблице.
*Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации. ** Окончательно АВ0 принадлежность устанавливается только по результатам перекрестного определения:антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютинининов в сыворотке. ^ В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведение контроля с растворителем. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости одну каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе. ^ Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5-10 мл. Цоликлон анти-А - красного цвета, анти-В -синего и анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%. 6. ХРАНЕНИЕ Срок хранения - два года при температуре 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8°С в закрытом виде в течение одного месяца. 7. РЕКЛАМАЦИЯ Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостности флакона, наличие хлопьев, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями. При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины по которым реагент признан негодным. Нобходимо также приложить протокол с результатами проверки реагнта. Вмете с рекламацией направляют 2-3 невскрытых флакона с Цоликлоном данной серии. Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель. Приложение 5 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01.1998г. № 2 ^ Стандартные сыворотки антирезус служат для определения резус-принадлжености крови людей и приготавливаются из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору, содержащих в крови активные резус-антитела. ^ Кровь (плазма) для изготовления сывороток антирезус может быть получена: а) от женщин, сенсибилизированных к резус-фактору во время беременности; б) от больных, перенесших трансфузионные реакции или осложнения, которым производят кровопускание в процессе их лечения (обменные трансфузии, плазмаферез) и от тех же лиц после их излечения; в) от доноров, дающих свою кровь для переливания больным, в тех (редких) случаях, когда у них обнаружены в крови резус-антитела; г) от лиц, специально иммунизированных антигеном резус. (см. Метод. рекомендации "Иммунизация доноров для получения сывороток и иммуноглобулина антирезус"). ^ Наиболее часто сенсибилизация к резус-антигену происходит у женщин во время беременности. Выявление таких лиц производится персоналом женских консультаций и родильных домов. Кровь резус-отрицательных женщин исследуют на наличие антител. При выявлении резус-антител сведения о таких лицах передаются в учреждения Службы крови. ^ В тех случаях, когда устанавливается сенсибилизация к резус-антигену, т.е. наличие в крови у женщин резус-антител, таких женщин регистрируют и заводят на них карту "Учета изоиммунных лиц". Карты заполняются персоналом родильных домов,в женских консультациях и в учреждениях Службы крови. ^ У женщин, в крови которых содржатся резус-антитела, может быть взята кровь для изготовления стандартной сыворотки. Привлечение таких лиц к донорству требует особого подхода. Следует учитывать, что большинство из них перенесло тяжелую психическую травму в связи с болезнью, а иногда и смертью ребенка. Желательно рассказать женщине, что из ее крови будет приготовлена сыворотка-реактив, которую необходимо использовать при лечении детей с таким же заболеванием. При согласии женщины дать кровь необходимо обследовать состояние ее здоровья и установить возможность и дозы взятия крови. В дальнейшем, но не ранее, чем через полгода после родов и по окончании периода лактации желательно привлечение женщин, иммунизированных во время беременности, к систематическому донорству, а при падении титра антител- к реиммунизации, в соответствии с "Методическими рекомендациями по иммунизации доноров для получения сыворотки и иммуноглобулина антирезус". ^ Показателем пригодности крови для приготовления из нее стандартной сыворотки является ее активность, т.е. титр резус-антител. В виду возможного снижения титра антител при обработке сыворотки следует привлекать к донорству лиц, в крови которых содержатся антитела анти-D с титром, превышающим окончательные требования, предъявляемые к стандартным сывороткам. Для полных антител титр долже быть не ниже, чм 1:32, для неполных антител при исследовании их в непрямой пробе Кумбса - не ниже, чем 1:128, а при исследовании реакцией с применением желатина в пробирках или реакцией в сывороточной среде на плоскости - не ниже 1:64. Исходный титр резус-антител при изготовлении стандартного универсального реагента должен быть не ниже 1:32. ^ Взятие крови от лиц, сенсибилизированных к резус-антигену предыдущими беременностями или трансфузиями крови, а также от искусственно иммунизированных доноров, состояние здороья которых соответствет требованиям инструкции, предъявляемым к донорам, дающим кровь для переливания больным, допускается в дозах, предусмотренных этой инструкцией. Плазму, содержащую резус-антитела, рекомендуется получать также методом плазмафереза, однако только вне периода беременности. Оплата на усиление питания лицам, из крови которых изготавливается сыворотка антирезус, при любом методе взятия крови и последующего отделения сыворотки или плазмы, проводится в тройном размере. ^ При получении плазмы из крови донора методом плазмафереза, плазма не позже, чем через 2-3 дня должна быть дефибринирована. Для этого плазму переливают из пластикатного мешка во флакон, добавляют в нее 20% раствор хлорида кальция из расчета 3 мл на 100 мл плазмы и содержимое флакона тщательно перемешивают. Через несколько минут после этого, а затем еще через 30 минут, флаконс плазмой встряхивают для отделения свертка от стенок флакона и оставляют на 2 часа при комнатной температуре, после чего помещают в холдильник при температуре 4-8°С. На следующий день сыворотку отсасывают от свертка в другой флакон и консервируют борной кислотой из рачета 2-3 г на 100 мл сыворотки или азидом натрия - 1 г на 1 л. Если кровь берут обычным путем в сухой флакон, то через несколько минут после взятия крови, а затем еще через 30 минут, флакон встряхивают для отделения свертка от стенок и оставляют на 2 часа при комнатной температуре, после чего помещают в холодильник при температуре 4-8°С. На следующий день сыворотку отсасывают от свертка в другой флакон и консервируют. При всоком титре резус-антител можно получить дополнительное количество сыворотки антирезус путем прготовления смывов со свертка. Для этого сверток измельчают (разрезают на много частей) и заливают его до половины объема изотоническим раствором NaCl или сывороткой группы AB(IV) с высокими конглютинирующими свойствами, станартным разводителем или альбумином. Флакон со свертком, залитым жидкостью, плотно закрывают пробкой и несколько раз переворачивают для того, чтобы лучше вымыть из свертка сыворотку антирезус, а затем помещают в холодильник при температуре 4-8°С. На следующий день сыворотку-смыв сливают в другой сосуд и оставляют в холодильнике до полного оседания эритроцитов, после чего переливают в другой сосуд и полученный смыв исследуют на активность резус-антител. Если титр соответствует требованиям, изложенным в пункте 11, смыв соединяют с первоначально полученной сывороткой или обрабатывают далее отдельно, предварительно длобавляя в него борную кислоту из расчета 2-3 г на 100мл сыворотки или азид натрия - 1 г на 1 л. Приготовление смыва можно повторить. Изотонический раствор NaCl применяется для смывов в тех случаях, когда предполагается последующее использование сыворотки антирезус реакцией агглютинации в солевой среде ( в маленьких пробирках) или реакцией конглютинации с применением желатина или полиглюкина. После такой первичной обработки сыворотку хранят при 4-8°С не менее 2-3 недель и затем приступают к дальнейшим исследованиям. ^ Исследование сыворотки следует производить через 2-3 недели после ее заготовки и консервирования ввиду того, что в этот период может происходить снижение титра антител. Исследование начинают с проверки групповой принадлежности сыворотки по системе АВ0. Полученные результаты сверяют с паспортными записями на флаконе с сывороткой. Следует учесть, что если исследуется смыв со свертка, полученный сывороткой группы AB(IV) или стандартным разводителем AB(IV), то может произойти нейтрализация групповых антител a и b. Если это будет установлено, тоделают соответствующие изменения в паспортных записях. Далее определеяют в сыворотке присутствие полных и неполных антител с помощью методов, описанных в "Инструкции по исследованию сыворотки на наличие резус-антител". Для испытания применяется не менее трех образцов стандартных эритроцитов одноименной с испытуемой сывороткой группы 0(I), срдержащих в том или ином сочетании три антигена резус: D, C и E, а также два образца резус-отрицательных (ccddee) эритроцитов. Положительный результат с резус-положительными эритроцитами и отрицательный с резус-отрицательными подтверждает наличие в сыворотке резус-антител. После этого сыворотку титруют тем же методом,которым в ней были выявлены антитела. Например, если сыворотка дала положительный результат в солевой среде, ее титруют в солевой среде; если сыворотка дала положительный результат в непрямой пробе Кумбса или в реакции с применением желатина, ее титруют, используя эти методы; если сыворотка оказалась активной при использовании обоих методов, она титрутся также с помощью двух методов (методы титрования см. в "Инструкции по исследованию сыворотки на наличие резус-антител"). Сыворотку считают пригодной для дальнейшей обработки и исследования,если в ней выявляют антитела любым методом и если при этом антитела достаточно активны. Активность антител определяется их титром,который на этом этапе исследования должен быть для полных антител не ниже 1:16, а для неполных антител в непрямойпробе Кумбса не ниже 1:64, реакциями с применением желатина или полиглюкина, и в сывороточной среде на плоскости - не ниже 1:32. Сыворотки сохраняют в холодильнике при 4-8°С еще не менее 2 недель, после чего повторно титруют. Примечание: в тех случаях, когда сыворотка антирезус принадлежит к группе Оab(I), Аb(II) или Вa(III) для удобства последующего использования ее рекомендуется абсорбировать, т.е. удалить из нее групповые агглютинины, сделав таким образом ее универсальной. Если в сыворотке присутствуют слабые антитела анти-С или анти-Е, их необходимо также удалить из сыворотки путем абсорбации. После абсорбации (нейтрализации) сыворотку антирезус вновь исследуют и титруют как сказано выше. Способы удаления или нейтрализации антител см. в Методических рекомендациях "Удаление из сыворотки антирезус-D антител другой специфичности". ^ Повторное титрование сыворотки производят, используя метод, который дал положительный результат при первом исследовании сыворотки. Если титр антител сохранился или снизился не более, чем на одну ступень, но так, что все же остался не ниже цифр, указанных в пункте 8, сыворотку можно подвергнуть стандартизации. ^ Стандартизация заключается в исследовании специфичности антител и в определении пригодности ее для практического использования. Для стандартизации сыворотку исследуют с помощью того же метода, в котором оказались активными содержащиеся в сыворотке антитела. Испытание ведется со стандартными эритроцитами одноименной группы или группы 0(I), содрежащими различные антигены резус, в том числе каждый из этих антигенов в отдельности: ccDee, Ccddee и ccddEe, и резус-отрицательными - ccddee. В число резус-отрицательных включают образцы эритроцитов, содержащих и не содержащих факторов Даффи (FY) и Келл (K). Если при стандартизации сыворотка дает положительный результат со всеми образцами резус-положительных эритроцитов, независимо от их антигенной структуры, и отрицательный результат с эритроцитами Ccddee, ccddEe и резус-отрицательными - ccddee, то значит в сыворотке содержатся резус-антитела анти-D. Если в сыворотке таким образом выявлены антитела специфичности анти-D, то ее титруют при использовании того же метода. Если сыворотка при стандартизации дает положительный результат с некоторыми образцами резус-положительных эритроцитов и с эритроцитами Ccddee или ccddEe, но дает отрицательный результат с эритроцитами ccDee и с резус-отрицательными - ссddee, то это значит, что в сыворотке крови содержатся резус-антитела анти-С или анти-Е. Антитела анти-С и анти-Е также титруют, используя метод, при помощи которого они были выявлены. Если сыворотка при стандартизации дает положительный результат одновременно со всеми образцами резус-положительных эритроцитов, а также с эритроцитами Ccddee и ccddEe, но отрицательный результат со всеми резус-отрицательными ccddee, то это значит, что сыворотка содержит антитела соответственно к двум или трем антигенм резус, т.е. анти-D+C, анти-D+E или анти-D+C+E. Каждое из антител титруют отдельно теми методами, при использовании которых они оказались активными. Следует отметить, что различные резус-антитела в одной и той же сыворотке бывают полными и неполными и поэтому могут быть соответственно активными в той или иной среде. В этих случаях их титрование следует проводить, используя разные методы. Если исследуемая сыворотка дала положительный результат избирательно среди резус-отрицательных образцов, это значит, что в ней содержатся другие антитела, например анти-Даффи или анти-Келл. Исследование и обработку таких сывороток см. в "Инструкции по изготовлению сывороток редких групп". ^ Сыворотка считается стандартной и пригодной для практического использования, если она содержит одно или несколько резус-антител в любой форме (полные или неполные) с титром анти-D: в солевой среде не ниже 1:16; в непрямой пробе Кумбса - не ниже 1:64; для реакции с применением желатина или полиглюкина. Ввиду редкости антител анти-С и анти-Е допускается использование таких сывороток с более низким титром при условии хорошо выраженного положительного результата. Сыворотки, отвечающие этим требованиям, считаются стандартными сыворотками данной специфичности. ^ Сыворотка антирезус, признанная стандартной, может быть использована в зависимости от формы установленных в ней антител: реакцией агглютинации в солевой среде, реакцией с применением желатина, реакцией в сывороточной среде на плоскости. Кроме того, сыворотка, содержащая неполные резус-антитела, может быть использована для приготовления стандартного универсального реагента антирезус с применением 33% раствора полиглюкина. Для этого требуется ее дальнейшая обработка (см.п.16). Во всех случаях сыворотка и реагент, предназначенные для практического использования, должны быть расфасованы и паспортизированы. ^ После стандартизации и заключения о пригодности сыворотки фильтруют и разливают в ампулы или маленькие флаконы по 2-5 мл, в зависимости от потребности. На флаконы (ампулы) наклеивают этикетки с наименованием учреждения-изготовителя, номера серии, обозначения группы крови по системе АВО, специфичности, формы антител антирезус и срока годности. ^ Расфасованные стандартные сыворотки антирезус хранят в холодильнике при 4-8°С или в замороженном состоянии при -15°С и ниже. При хранении в замороженном состоянии сыворотка не изменяет свойств в течение 2 лет. При размораживании или хранении ее при 4-8°С срок годности устанавливают 4 мес. Активность резус-антител в большинстве случаев сохраняется и дольше. Поэтому по истечении срока годности сыворотки могут быть проверены (см.п.10) и при сохранении их специфичности и титра срок годности продлевают: для сыворотки, хранящейся в замороженном состоянии - еще на 1 год, а для сыворотки, хранившейся при 4-8°С - на 2 месяца.
Рисунок 1. Форма этикеток для стандартных сывороток антирезус. На этикетках группы A(II), B(III) и AB(IV) наносят по диагноали цветные полосы: для сыворотки группы A(II) - синие; для сыворотки группы B(III) - красные; для группы AB(IV) и специально приготовленной - универсальной - желтые. ^ При выдаче стандартной сыворотки антирезус к ней необходимо приложить инструкцию по использованию. Для сыворотки антирезус это особенно важно, так как сыворотки, содержащие антитела, разные по форме (полные и неполные) и приготовленные для разных методов исследования, активны только при применении определенного метода и будут неактивными или неспецифическими при неправильном их использовании. Инструкции по использованию для каждого метода см.дополнения 1, 2, 3. ^ Стандартный универсальный реагент антирезус пригоден для определения резус-фактора крови, независимо от ее групповой принадлежности по системе АВО. Реагент готовят из сывороток, содержащих неполные резус-антитела, предварительно обработанных, исследованных и признанных пригодными, как стандартные (см.п.п.6-11). Для изготовления реагента отбирают сыворотки группы AB(IV) или другой группы, но освобожденные от групповых агглютининов a и b путем удаления или нейтрализации (см.Методические рекомендации "Удаление из сыворотки антирезус-D антител другой специфичности"). Для изготовления реагента пригодны сыворотки антирезус с титром не ниже, чем 1:32. Если исходные сыворотки имеют более высокий титр, допускается их разведение до титра 1:32 изотоническим раствором NaCl, сывороткой группы AB(IV) или стандартным универсальным разводителем. (см.Методические рекомендации "Приготовление сыворотки-разводителя и стандартного разводителя"). ^ производят с применением 33% раствора полиглюкина. В штатив устанавливают 10 пробирок с обозначением 1:2, 1:4 и т.д. до 1:1024. Во все пробирки вводят по 2 капли изотонического растовра NaCl. Затем в первую пробирку вводят той же пипеткой 2 капли исследуемой сыворотки антирезус, из первой пробирки, после перемешивания содержимого переносят 2 капли во вторую, из третьей - в четвертую и т.д. до последней, из которой 2 капли удаляют. Затем во все пробирки добавляют по 1 капли резус-положительных эритроцитов или их смеси и по 1 капле 33% раствора полиглюкина. Примечание: смесь эритроцитов готовят из крови 4-6 доноров группы 0(I) резус-положительной, взятой не более, чем за 2-3 дня. Пробирки встряхивают для перемешивания содержимого, затем наклоняют почти до горизонтали и в таком положении медленно покачивают по оси так, чтобы содержимое растеклось по стенкам пробирки. Такой контакт сыворотки с эритроцитами при поворачивании пробирок продолжают 3 минуты. Через 3-5 минут во все пробирки добавляют по 2-3 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содержимое путем 1-2 кратного переворачивания пробирок (не встряхивать!) Результат наблюдают в проходящем свете невооруженным глазом или через лупу. Оценку результата производят по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов в виде комочков или хлопьев на фоне полностью или частично обесцвеченной жидкости. Последнее разведение, в котором имеется агглютинация эритроцитов, принимают за титр исследуемой сыворотки. Установив, что титр резус-антител в данном методе не ниже 1:32, переходят к дальнейшему исследованию, для чего готовят пробный образец реагента. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям