Механизмы нарушения цитокинопосредованной регуляции апоптоза эозинофилов при больших эозинофилиях крови
|
|
Скачать 1.52 Mb.
|
|
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ СИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНтСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ На правах рукописи Григорьева Екатерина Сергеевна Механизмы нарушения цитокинопосредованной регуляции апоптоза эозинофилов при больших эозинофилиях крови 14.00.16 – патологическая физиология 03.00.25 – гистология, цитология, клеточная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Рязанцева Н.В. доктор медицинских наук, академик РАМН, профессор, Заслуженный деятель науки РФ Новицкий В.В. Томск – 2007 ОглавлениеОглавление 2 Список использованных сокращений 4 Введение 5 Глава 1. Обзор литературы. 10 Роль нарушения апоптоза эозинофилов в механизмах развития больших эозинофилий крови 10 1.1. Причины развития «больших эозинофилий крови». Общие представления о структуре, свойствах и функциях эозинофильных лейкоцитов 10 1.2. Роль дизрегуляции апоптоза эозинофильных гранулоцитов в патогенезе эозинофилии 23 1.2.1. Молекулярные основы реализации апоптотической гибели клеток 25 1.2.2 Общие представления о цитокинопосредованной регуляции апоптоза клеток 36 ^ 2.1. Характеристика объекта исследования 50 2.1.1. Клиническая характеристика пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови 51 2.1.2. Клиническая характеристика больных описторхозом 52 2.2. Методы исследования 55 2.2.1. Определение содержания общего количества лейкоцитов, эозинофилов и лимфоцитов в крови 55 2.2.2. Выделение эозинофилов крови 55 2.2.3. Культивирование эозинофилов крови 57 2.2.4. Оценка апоптотической реакции эозинофилов крови методом проточной лазерной цитометрии 57 2.2.4.1. Регистрация апоптоза эозинофилов крови 57 2.2.4.2. Оценка апоптоза эозинофилов крови при лишении ростовых факторов 58 2.2.4.3. Оценка влияния рекомбинантных форм цитокинов (IL-5, IL-3 и eotaxin) на апоптотическую гибель эозинофильных гранулоцитов 58 2.2.5. Выделение мононуклеарных лейкоцитов крови 59 2.2.6. Культивирование мононуклеарных лейкоцитов 59 2.2.7. Определение содержания эозинофилтропных цитокинов в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов и eotaxin в сыворотке крови 60 2.2.8. Статистический анализ результатов исследования 61 ^ 3.1. Количественные показатели лейкоцитарного звена крови у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией крови 63 3.2. Особенности реализации апоптоза эозинофилов у больных с эозинофилиями 67 3.3. Особенности реализации цитокинопосредованного апоптоза эозинофилов у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией крови 69 3.3.1. Уровень апоптотически измененных эозинофилов, полученных у больных с эозинофилией, в условиях инкубации in vitro с r-IL-5 70 3.3.2. Уровень апоптотически измененных эозинофилов, полученных у больных с эозинофилией, в условиях инкубации in vitro в среде с добавлением r-IL-3 76 3.3.3. Уровень апоптотически измененных эозинофилов, полученных у больных с эозинофилией, в условиях их инкубации in vitro в среде с добавлением r-eotaxin 82 3.3.4. Уровень апоптотически измененных эозинофилов, полученных у больных с эозинофилией, в условиях их инкубации in vitro в бессывороточной среде 87 Глава 4. Обсуждение результатов исследований 90 Выводы 116 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 117 ^ АТФ – аденозинтрифосфат АФК – активные формы кислорода ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота РНК - рибонуклеиновая кислота ФГА - фитогемагглютинин CD – поверхностный кластер дифференцировки CSF - колониестимулирующий фактор FasL - Fas-лиганд FasR - Fas-рецептор FcεR, FсγR – рецепторы к Fc-фрагменту IgE, IgG FITC - флюоресцеинизотиоцианат GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор IFN - интерферон Ig - иммуноглобулин IL – интерлейкин LTC4 – лейкотриен С4 MCP- протеин-хемоаттрактант для моноцитов M-CSF - макрофагальный колониестимулирующий фактор NK – натуральные киллеры PAF - фактор активации тромбоцитов Pg - простагландин Th – Т-хелпер TNF - фактор некроза опухоли Введение^ К числу часто встречаемых в клинической практике гематологических синдромов относится большая эозинофилия крови. Широкий круг нозологий, сопровождаемых гиперэозинофилией [Анаев Э.Х., 2002; Коровина Н.А. и соавт., 2002; Чучалин А.Г., 2003; Абдулкадыров К.М., 2006], а также формирование серьезных осложнений [Джальчинова В.Б., Чистяков Г.М., 1999; Озерецковская Н.Н., 2000; Чучалин А.Г., 2003; Семенкова Е.Н. и соавт., 2004; Куропатенко М.В., Желенина Л.А., 2005] определяют необходимость изучения патогенеза эозинофилий. В настоящее время известны лишь некоторые механизмы развития гиперэозинофилии при патологических процессах разного генеза: антителозависимый хемотаксис, развивающийся при паразитозах (IgE- или IgG-антитела); иммунный, опосредованный через IgE (наблюдается при аллергии); ответ на эозинофильный хемотаксический фактор, выделяемый некоторыми опухолями; собственно опухолевая эозинофилия - лейкоз [Адаскевич В.П., Зыкова О.С., 1998]. К числу общих для разных нозологий механизмов развития больших эозинофилий крови относятся подавление или дефекты системы апоптотической гибели эозинофилов [Druilhe A. еt al., 1996; Воробьев А.И., 2002]. В последние годы расшифрованы молекулярные механизмы реализации программированной гибели клетки, опосредованные системами внутриклеточной и межклеточной сигнализации [Невзорова В.А. и соавт., 2001; Мойбенко А.А. и соавт., 2005; Тяжелова В.Г., 2005; Москалева Е.Ю., Северин С.Е., 2006; Орловская И.А. и соавт., 2006]. При этом цитокины считаются наиболее многочисленной группой биологически активных веществ, влияние которых на апоптоз интенсивно изучается. Так, ряд цитокинов (IFN-γ, TNF, IL-1, IL-10) являются индукторами апоптоза как здоровых, так и злокачественно-трансформированных клеток [Meagher L.C. et al., 1996; Потапнев М.П., 2002; Бережная Н.М., 2005]. Вместе с тем выявлена большая группа медиаторов (IL-2, IL-3, IL-4, IL-10, IFN-), действие которых способствует запуску эндогенной программы защиты клеток от апоптотической гибели [Невзорова В.А. и соавт., 2001; Потапнев М.П., 2002]. При этом эффект некоторых цитокинов может быть разнонаправленным и зависеть как от типа клеток, так и от особенностей их функционального состояния [Потапнев М.П., 2002]. По данным ряда авторов, иммунорегуляторные молекулы, секретируемые преимущественно Th2-лимфоцитами, такие как IL-5, IL-3, а также гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), активируют эозинофильные гранулоциты и увеличивают их выживаемость in vitro, задерживая индукцию апоптоза [Tai P.C. et al., 1991; Yamaguchi Y. et al., 1991; Simon H. et al., 1997; Simon H., Alam R., 1999]. Кроме того, в литературе существуют сведения, согласно которым повышенный уровень eotaxin – хемокина СС-семейства, обладающего хемоаттракционным эффектом в отношении эозинофильных лейкоцитов, может вносить существенный вклад в формирование гемической и тканевой эозинофилии при патологических процессах разного генеза [Rothenberg M.E., 1999]. В этой связи представляет особый интерес выявление общих закономерностей и особенностей цитокинопосредованной дизрегуляции апоптоза эозинофилов при заболеваниях, сопровождающихся большими эозинофилиями крови. Выявление ключевых звеньев патогенеза этого синдрома позволит разработать патогенетически обоснованные подходы управления реактивностью эффекторных клеток крови – эозинофилов. ^ установить роль нарушения цитокинопосредованной регуляции апоптоза эозинофильных лейкоцитов в механизмах развития больших эозинофилиях крови. ^
^ Впервые с привлечением широкого комплекса современных гематологических, культуральных и молекулярно-биологических методов исследования представлены данные фундаментального характера о механизмах нарушения цитокинопосредованной гибели эозинофильных клеток в патогенезе больших эозинофилий крови при лимфопролиферативных гематологических заболеваниях и описторхозе. Продемонстрирован факт угнетения апоптоза эозинофилов при развитии гиперэозинофилии у пациентов со злокачественными заболеваниями системы крови и больных описторхозом. Представлены приоритетные данные, касающиеся ключевой роли эозинофилтропных цитокинов (IL-3, IL-5 и eotaxin) в реализации гиперэозинофильной реакции крови при лимфопролиферативных заболеваниях и описторхозе. Впервые получены результаты экспериментальных исследований in vitro, свидетельствующие о различной чувствительности эозинофильных гранулоцитов при больших эозинофилиях крови, осложняющих течение лимфопролиферативных гематологических заболеваний и описторхоза, к действию цитокинов с антиапоптотической активностью. ^ Полученные данные фундаментального характера о нарушении цитокинопосредованного апоптоза эозинофилов у больных лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом раскрывают новые молекулярно-клеточные аспекты патогенеза больших эозинофилий крови. Результаты настоящего исследования могут быть положены в основу разработки новой патогенетически обоснованной тактики коррекции гиперэозинофилии при гемобластозах и описторхозе. ^
^ Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на VIII Конгрессе «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении» (Москва, 2006), Российском медицинском форуме-2006 «Фундаментальная наука и практика» (Москва, 2006). В работе приводятся результаты исследований, поддержанных Советом по грантам Президента РФ для поддержки ведущих научных школ РФ, «Молекулярные основы нарушения гомеостаза клеток крови при актуальных заболеваниях инфекционной и неинфекционной природы» (НШ-4153.2006.7), а также результаты научно-исследовательских работ «Роль нарушений межклеточной кооперации в механизмах формирования больших эозинофилий крови» 2005-РИ-19.0/002/010 (государственный контракт № 02.442.11.7056 от 26.10.2005), «Молекулярные и клеточные основы управления реактивностью системы крови при актуальных заболеваниях инфекционной природы» 2006-РИ-112.0/001/384 (государственный контракт № 02.445.11.7419 от 09.06.2006 г.), выполненных в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники РФ на 2002-2006 годы». Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, из которых 6 – в центральных рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ. ^ Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырёх глав, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 10 рисунками и 19 таблицами. Библиографический указатель включает 272 источника (86 - отечественных и 186 - иностранных). |
отлично
1
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям