Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013





Скачать 2.5 Mb.
Название Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013
страница 7/11
Дата 03.04.2013
Размер 2.5 Mb.
Тип Документы
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11
^

Противопоказания к заготовке стволовых клеток


Абсолютные противопоказания к заготовке стволовых клеток - заболевания: ВИЧ, гепатит В и С, вирусу Т - клеточного лейкоза человека, токсоплазмоз, сифилис.

^ Относительные противопоказания к заготовке стволовых клеток: объем пуповинной крови менее 50-60 мл, низкое содержание стволовых клеток в объеме полученной пуповинной крови.
  1. ^

    Лечение стволовыми клетками


Стволовые клетки (за редким исключением) не "лечат" болезнь. Их роль заключается в восстановлении костного мозга, крови и иммунной системы пациента после проведения сочетанного лечения основного заболевания. Радио- и химиотерапия обычно успешно справляются с уничтожением, к примеру, раковых клеток. Но, наряду с "нежелательными" клетками, высокие дозы препаратов оказывают негативное воздействие и на организм в целом, - погибает костный мозг, точнее, находящиеся в нем стволовые клетки. Этим диктуется необходимость последующей трансплантации.

Заново введенные стволовые клетки репопулируют (обживают) погибший костный мозг, размножаются и восстанавливают его, начиная выполнять работу погибших клеток.

Это же свойство стволовых клеток используется и при ряде наследственных болезней крови. В этом случае донорские "здоровые" клетки трансплантируются после того, как собственный "дефектный" костный мозг тоже убивается, но уже преднамеренно.

Кроме источника получения стволовых клеток между ними множество других различий. Наиболее важное - их способность выживать в лаборатории без дифференциации. Эмбриональные стволовые клетки способны реплицироваться, оставаясь недифференцированными в течение года, что для стволовых клеток из взрослых организмов недостижимо.

За последние годы опубликованы сотни сообщений о применении соматических стволовых клеток (в первую очередь кроветворных стволовых клеток) в эксперименте и клинике. В связи с этим эмбриональные стволовые клетки кажутся более привлекательными, поскольку доказана их способность (в эмбриональном микроокружении) генерировать все клеточные типы. На практике, однако, чрезвычайно трудно получить в культуре из эмбриональных стволовых клеток тот тип клеток, который планируется.

^ Какова процедура лечения стволовыми клетками?

Процедура лечения стволовыми клетками состоит из трех этапов. На первом этапе мы получаем небольшое количество Ваших стволовых клеток, помещаем их в лабораторию и выращиваем в течение 45 - 60 суток до количества не менее 200 000 000 клеток. Как правило, такой объем стволовых клеток достаточен для излечения многих болезней.

Второй и третий этапы – введение стволовых клеток. Единоразовое введение – не более 100 000 000 клеток. Интервал между процедурами введения стволовых клеток составляет от 3 до 6 месяцев в зависимости от рекомендаций врача Клиники.

Введение стволовых клеток происходит амбулаторно, без дополнительной подготовки пациента. В течение 40 минут через капельницу стволовые клетки вводятся Вам внутривенно и с кровотоком поступают к органу или ткани, который необходимо вылечить.

Лечение стволовыми клетками – процедура, экономящая Ваше время и усилия. Благодаря малому времени Вашего участия в лечении, клеточная терапия идеально подходит для занятых энергичных людей, ценящих собственную свободу.

^ 5. Как действуют стволовые клетки?

Стволовые клетки способны стать полноценными клетками практически любого органа или ткани. Мезенхимальные стволовые клетки уникальны своей универсальностью, способностью дифференцироваться в клетки любого органа (кардиомиобласты – клетки сердца, гипотоциты – клетки печени, альвиолы – клетки легких, нейроны – клетки мозга, хондробласты – клетки хрящевой ткани, миобласты – клетки мышц и др.).

После процедуры введения стволовые клетки прикрепляются к здоровым участкам поврежденного органа. Стволовые клетки последовательно вытесняют поврежденные болезнью клетки органа и замещают их, трансформируясь в клетки данного органа. Результаты клеточной терапии диагностируются спустя 3 месяца, а субъективные ощущения изменения самочувствия начинаются на второй день после процедуры введения.

^ 5.3. Самостоятельная работа по теме:

Обучающийся должен ознакомиться с текстом учебных пособий и продемонстрировать следующие умения:


№ п/п

Название практических умений

1

Классифицировать способы получения эмбриональных стволовых клеток.

2

Классифицировать способы получения региональных стволовых клеток.

3

Соотносить виды стволовых клеток по способу получения с их возможным применением в медицине.


^ 5.4. Итоговый контроль знаний:

- ответы на вопросы по теме занятия:

1. Чем объясняется, что работу со стволовыми клетками связывают с вопросами биоэтики?

2. Назовите основные способы получения стволовых клеток.

3. В чём заключается способ использования ЭСК (эмбриональных стволовых клеток)? Какие разновидности этого способа получения стволовых клеток вы знаете?

4. В каком случае используют для получения ЭСК (эмбриональных стволовых клеток) эмбрионы, полученные в результате клонирования?

5. Какие правила должны быть соблюдены при получении и использовании ЭСК?

6. Почему в использовании абортивного материала особенно остро стоят вопросы биоэтики?

7. Какой из способов получения ЭСК (эмбриональных стволовых клеток) наиболее распространён в получении, но не биоэтичен. Почему?

8. В чём заключается особенность получения пуповинной крови?

9. Каким образом она сохраняется и применяется в последствии?

10. В чём преимущества в применении пуповинной крови?

11.Какие способы получения РСК (региональных стволовых клеток) человека вы знаете? Поясните их особенности и значение.

12. Назовите заболевания, для излечения которых используются стволовые клетки.

13. Поясните показания к применению стволовых клеток.

14. Каким образом осуществляется лечение стволовыми клетками?

15. В чём заключается процедура лечения стволовыми клетками?


- решение ситуационных задач:

Задача № 1.

Впервые в России в 2009 году разработан и апробирован метод получения аутологичных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из обычной клетки взрослого организма.

  1. Какой метод был использован?

  2. Какой материал был использован?

  3. Какие изменения происходили в клетках?


Задача № 2.

Представлены аутологичные и донорские стволовые клетки.

1.Какие стволовые клетки называются аутологичными?

2.Какие стволовые клетки имеют преимущества для транстплантации?

3.Перечислите ряд преимуществ аутологичных стволовых клеток перед донорскими.


Задача № 3.

.В лаборатории получили бластоцисту.

1.Какую часть клеточного материала можно взять для получения стволовых клеток?

2. Какие ткани образуют эти клетки?

  1. В каком году и где были впервые получены эти клетки?


Задача № 4.

Основным источником сырья для получения лабораторных стволовых клеток остаются эмбриональные стволовые клетки.

1.Из чего получают эмбриональные стволовые клетки?

2.В какой период жизни вступают эти выделенные клетки?

3.В обход какого процесса эмбриогенеза идёт этот период?


Задача № 5.

Имеются стволовые клетки и зрелые.

  1. Каким способом делятся те и другие?

  2. Чем отличается деление стволовой клетки от деления зрелой?

  3. Что происходит с образовавшимися клетками после деления?


^ 6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (ответить на контрольные вопросы и тестовые задания, решить ситуационные задачи по теме «Способы культивирования стволовых клеток», методические указания для обучающихся № 10 к внеаудиторной работе).


^ 7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой

Подготовить рефераты на темы:

1. Современные представления о происхождении клеток крови.

2. Аутологический способ получения стволовых клеток.

3. Метод селезёночных колоний и его значение для получения стволовых клеток крови.

4. Использование абортивных материалов для получения стволовых клеток.


^ 1. Занятие № 10

Тема: «Способы культивирования стволовых клеток».


2. Форма организации учебного процесса
: практическое занятие.

Разновидность занятия: беседа, консультирование. Методы обучения: работа с учебниками, конспектирование, упражнение, решение тестов и ситуационных задач, подготовка ответов на вопросы, фронтальный опрос.


^ 3. Значение изучения темы. Способы культивирования и этичности использования СК (стволовых клеток) различного происхождения.


4. Цели обучения:


- общая (обучающийся должен обладать ОК и ПК);

- способностью и готовностью анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК-1);

способностью и готовностью к логическому и аргументированному анализу, к публичной речи, ведению дискуссии и полемики (ОК-5);

- способностью и готовностью выявлять естественнонаучную сущность проблем, возникающих в ходе профессиональной деятельности врача-педиатра, использовать для их решения соответствующий физико-химический и математический аппарат (ПК-2);

- способностью и готовностью к формированию системного подхода к анализу медицинской информации, опираясь на всеобъемлющие принципы доказательной медицины, основанной на поиске решений с использованием теоретических знаний и практических умений в целях совершенствования профессиональной деятельности (ПК-3);

- способностью и готовностью анализировать закономерности функционирования отдельных органов и систем, использовать знания анатомо-физиологических основ, основные методики клинико-иммунологического обследования и оценки функционального состояния организма детей и подростков для своевременной диагностики заболеваний и патологических процессов (ПК-16);

- способностью и готовностью изучать научно-медицинскую информацию, отечественный и зарубежный опыт по тематике исследования (ПК-31);

способностью и готовностью к участию в освоении современных теоретических и экспериментальных методов исследования с целью создания новых перспективных средств в педиатрии, в организации работ по практическому использованию и внедрению результатов исследований (ПК-32);


- учебная: знать: способы культивирования и этичности использования СК (стволовых клеток) различного происхождения; уметь: соотносить виды стволовых клеток по способу культивирования и предполагаемый результат культивирования, а также варианты возможного применения в медицине.

владеть: медико-аналитическим понятийным аппаратом.


5. План изучения темы:

5.1. Контроль исходного уровня знаний (тестирование).

Выбрать один правильный ответ.


  1. ^ КУЛЬТУРА КЛЕТОК ЭТО

1) выращивание клеток, относящихся к одной ткани

2) стволовые клетки пуповинной крови

  1. абортивные материалы

  2. клеточный дифферон

  1. ^ ВЫДЕЛЕНИЕ КЛЕТОК ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ

1) из крови, с использованием только лейкоцитов

2) из мягких тканей с помощью ферментов

3) помещение в культуру кусочков ткани

4) все ответы верны


  1. ^ КУЛЬТУРА НАЗЫВАЕТСЯ «ПЕРВИЧНОЙ» КОГДА ОНА

  1. взята непосредственно из объекта

  2. получена в результате пассажирования

  3. извлечена из ткани

  4. получена в результате клонирования




  1. ^ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ НЕОБХОДИМ КОМПЛЕКС УСЛОВИЙ

1) инкубатор

2) постоянная температура

3) специальные питательные и газовые среды

4) все ответы верны


  1. ^ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ РАЗНЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК РАЗЛИЧАЮТСЯ

1) концентрации глюкозы и составу факторов риска

    1. по составу и концентрации глюкозы

    2. по составу, pH, концентрации глюкозы, составу факторов роста

    3. по составу факторов роста и риска




  1. ^ ЕСТЕСТВЕННЫЕ СУБСТАНЦИИ, СПОСОБНЫЕ СТИМУЛИРОВАТЬ

РОСТ, ПРОЛИФЕРАЦИЮ И/ИЛИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ^ ЖИВЫХ КЛЕТОК НАЗЫВАЮТСЯ

  1. фактор риска

  2. фактор роста

  3. экологический фактор

  4. культурой




  1. ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ОДНОЙ ИЗ ВАЖНЫХ ЗАДАЧ ЯВЛЯЕТСЯ

1) получить материал для культивирования

    1. получить культуру клеток

    2. исключение или сведение к минимуму использование зараженных ингредиентов

    3. обеспечить рост полученного материала




  1. ^ ПОЛУЧЕННЫЙ МАТЕРИАЛ МОЖНО ВЫРАЩИВАТЬ В

1) суспензии

2) адгезивном состоянии

3) суспензии, либо в адгезивном состоянии

4) все ответы верны


  1. ^ ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ КЛЕТОК МОГУТ ВОЗНИКНУТЬ СЛЕДУЮЩИЕ ПРОБЛЕМЫ

  1. может начаться клеточное дифференцирование

  2. накопление в питательной среде продуктов выделения и омертвевших клеток

  3. контактное ингибирование роста

  4. все ответы верны


^ 10. ДЛЯ ПОДДЕРЖАНИЯ НОРМАЛЬНОГО ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ КУЛЬТУР КЛЕТОК, А ТАКЖЕ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ НЕГАТИВНЫХ ЯВЛЕНИЙ ПЕРИОДИЧЕСКИ ПРОВОДЯТ,

1) замену питательной среды

2) пассажирование и трансфекцию клеток.

3) трансдукцию

4) замену питательной среды, пассажирование и трансфекцию клеток


^ 11. СТРОМАЛЬНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ИЗВЛЕКАЮТСЯ ПРИ ПОМОЩИ ПУНКЦИИ, ЗАТЕМ, В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ ОСОБЫМ ОБРАЗОМ ИХ

1) культивируют

2) мобилизируют, наращивают и вводят обратно в организм, где при участии специальных сигнальных веществ, они направляются к «больному месту»

3) стимулируют фактором роста

4) замораживают


^ 12. РОЛЬ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА ЗАКЛЮЧАЕТСЯ

1) пролиферации

2) в восстановлении костного мозга, крови и иммунной системы пациента после проведения сочетанного лечения основного заболевания радио- и химиотерапии

3) заживлении раны

4) регенерации


^ 13. ВВЕДЕННЫЕ В ПАЦИЕНТА СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ КОСТНОГО МОЗГА

1) рассасываются или уничтожаются иммунной системой пациента

2) распределяются в строме органов

3) мигрируют в кровеносном русле

4)репопулируют (обживают) погибший костный мозг, размножаются и восстанавливают его, начиная выполнять работу погибших клеток

^ 5.2. Основные понятия и положения темы.

1. Первый президент Национального консультативного этического комитета Франции Жан Бернар, реконструируя историю биомедицины с 1930 года, писал о двух революциях: терапевтической и биологической. Первая революция, открыв сульфамиды (1937) и пенициллин (1946), наделила человечество властью побеждать болезни, долгое время бывшие смертельными, такие как туберкулёз, сифилис, серьёзные заражения крови, воспаления эндокринных желёз, биохимические расстройства, лежащие в основе душевных заболеваний“.

Вторая революция произошла совсем недавно: она началась с открытия генетического кода и создания так называемой „геномной медицины“. После успеха Яна Вилмута, клонировавшего в 1997 году живое существо — овцу Долли, и работ Томпсона, в 1998 году доказавшего возможность получения стволовых клеток из бластоцист  с последующим культивированием плюрипотентных клеточных линий у человечества, наконец, появилась реальная надежда на излечение различных дегенеративных заболеваний (см. таблицу) или, как минимум, уменьшение страданий пациентов путём трансплантации стволовых клеток.

В апреле 2003 года в Брюсселе, под эгидой Европейского союза, прошла одна из наиболее представительных конференций с участием более 600 учёных, посвящённая итогам и перспективам развития проблемы стволовых клеток и терапевтического клонирования. Конференция отметила, что за последние годы число частных и государственных компаний, занимающихся этой проблемой, сократилось с 38 до „менее дюжины“. Это объясняется несколькими причинами. Не оправдались коммерческие планы компаний, потребность в стволовых клетках оказалась крайне низкой, что обусловлено, главным образом, неопределёнными и неубедительными результатами клинических наблюдений. Во многих случаях, по мнению экспертов, не публикуются отрицательные результаты пересадок CК.

Определилась настоятельная необходимость в дополнительных теоретических и экспериментальных исследованиях с использованием современных методов маркировки и идентификации стволовых клеток, включая анализ их генов и белков. Отсюда, вопрос о стандартизации клеточных технологий – выделении СК, их сохранности и культивирования является одним из насущных в современной медицине.

2. Культивирование клеток представляет собой процесс, посредством которого in vitro отдельные клетки (или единственная клетка) искусственно выращиваются в контролируемых условиях. На практике термин «культура клеток» относится в основном к выращиванию клеток, относящихся к одной ткани, полученных от многоклеточных эукариот, чаще всего животных. Историческое развитие технологии и методик выращивания культур клеток неразрывно связаны с выращиванием тканевых культур и целых органов.

Культивирование - создание искусственных условий для поддержания процессов жизнедеятельности и размножения микроорганизмов in vitro. «Русско-английский словарь терминов по микробиологии».

- выращивание микроорганизмов, животных и растительных клеток, тканей или органов в искусственных условиях. Большой медицинский словарь. 2000.

2.1.Выделение клеток

Для культивирования вне организма живые клетки могут быть получены несколькими способами. Клетки могут быть выделены из крови, но к росту в культуре способны только лейкоциты. Моноядерные клетки могут быть выделены из мягких тканей с помощью таких ферментов как коллагеназа, трипсин, проназа, разрушающих внеклеточный матрикс. Кроме того, в питательную среду можно поместить кусочки тканей.

Культуры клеток, взятых непосредственно от объекта (ex vivo), называются первичными. Большинство первичных клеток, за исключением опухолевых, имеют ограниченный срок использования. После определенного количества делений клетки такие стареют и прекращают делиться, хотя могут при этом не утратить жизнеспособность.

Существуют иммортализованные («бессмертные») линии клеток, способные размножаться бесконечно. У большинства опухолевых клеток эта способность является результатом случайной мутации, но у некоторых лабораторных клеточных линий она приобретена искусственно, путем активации гена теломеразы.

Культивирование клеток

Клетки выращивают в специальных питательных средах, при постоянной температуре, а для клеток млекопитающих обычно необходима также специальная газовая среда, поддерживаемая в инкубаторе клеточных культур. Как правило, регулируется концентрация в воздухе углекислого газа и паров воды, но иногда также и кислорода. Питательные среды для разных культур клеток различаются по составу, pH, концентрации глюкозы, составу факторов роста и др. Факторы роста, используемые в питательных средах, чаще всего добавляют вместе с сывороткой крови. Одним из факторов риска при этом является возможность заражения культуры клеток прионами или вирусами. При культивировании одной из важных задач является исключение или сведение к минимуму использование зараженных ингредиентов. Однако на практике это бывает достигнуто не всегда. Наилучшим, но и наиболее дорогостоящим способом является добавление вместо сыворотки очищенных факторов роста[9].

Клетки можно выращивать в суспензии, либо в адгезивном состоянии. Некоторые клетки (такие, как клетки крови) в естественных условиях существуют во взвешенном состоянии. Существуют также линии клеток, искусственно измененных таким образом, чтобы они не могли прикрепляться к поверхности; это сделано для того, чтобы увеличить плотность клеток в культуре. Для выращивания адгезивных клеток требуется поверхность, например, культура ткани, или пластик, покрытый элементами внеклеточного матрикса для улучшения адгезивных свойств, а также для стимулирования роста и дифференцировки. Большинство клеток из мягких и твердых тканей адгезивны. Из адгезивного типа культуры выделяются органотипические культуры клеток, которые представляют собой трехмерную среду, в отличие от обычной лабораторной посуды. Этот система культивирования физически и биохимически наиболее сходна с живыми тканями, но имеет некоторые технические сложности в обслуживании (например, нуждается в диффузии).

Особенности выращивания клеток. При выращивании клеток, из-за постоянного деления может возникнуть их переизбыток в культуре. В результате чего могут возникнуть следующие проблемы:

-Накопление в питательной среде продуктов выделения, в том числе токсичных.

-Накопление в культуре омертвевших клеток, прекративших жизнедеятельность.

-Скопление большого количества клеток оказывает негативное влияние на клеточный цикл, рост и деление замедляются, а клетки начинают стареть и отмирать (контактное ингибирование роста).

По той же причине может начаться клеточное дифференцирование.

Для поддержания нормального функционирования культур клеток, а также для предотвращения негативных явлений периодически проводят замену питательной среды, пассажирование и трансфекцию клеток. Во избежание загрязнения культур бактериями, дрожжами, или другими линиями клеток, все манипуляции обычно проводят с соблюдением правил асептики в стерильном боксе. Для подавления микрофлоры в питательную среду могут быть добавлены антибиотики (пенициллин, стрептомицин) и противогрибковые препараты (амфотерицин Б).

Одним из продуктов метаболизма в клетках являются кислоты, вследствие чего pH среды постепенно снижается. Для контроля кислотности питательных сред, в них добавляют индикаторы pH. Если культура клеток адгезивная, питательную среду можно полностью заменять.

Пассажирование клеток (разделение) клеток — это отбор небольшого количества клеток для выращивания в другом лабораторном сосуде. Если культура быстро растет, это необходимо делать регулярно, поскольку в среде истощаются питательные вещества и накапливаются продукты метаболизма. Суспензивные культуры пассажировать проще, так как для этого достаточно всего, лишь отобрать необходимое количество клеток, поместить их в другие сосуды, и добавить свежей питательной среды. Адгезивные же клетки перед этим следует отделить от субстрата и разделить их скопления. Чаще всего для этой цели используют смесь трипсина и ЭДТА или другие ферментные смеси, иногда достаточно только ЭДТА в физиологическом растворе (раствор Версена). Если культура растет медленно, ее обычно подкармливают без переноса в другой сосуд, периодически (обычно раз в 2-3 дня) отбирая часть использованной среды и добавляя свежую.

Трансфекция и трансдукция

Трансфекция — процесс введения нуклеиновой кислоты в клетки человека и животных невирусным методом. Трансфекция обычно включает образование в плазматической мембране отверстий через которые внутрь клетки может проникать внеклеточный материал. Трансфицирован может быть генетический материал, такой как ДНК или РНК, а также белки, например, антитела. Для трансфекции часто используют сильное электрическое поле (электропорация) или электростатически заряженные липиды, способные к образованию липосом, структур, которые сливаются с плазматической мембраной, выбрасывая внутрь клетки заключенный в них материал. Известны и другие методы трансфекции.

Первоначальный смысл слова трансфекция: инфекция для трансформации, т.е. введение в клетки вирусного генома, в результате чего начинается инфекция. Но, поскольку в приложении к человеку и животным термин трансформация имеет иное значение (генетические изменения, позволяющие вести клетки в культуре в течение длительного времени, преодолевая лимит Хейфлика, что типично, например, для раковых клеток), термин трансфекция было предложено использовать как замену термину трансформация в смысле изменения фенотипа путем введения чужеродной нуклеиновой кислоты.

Трансдукция. В клетки при их выращивании можно внедрять чужеродную ДНК путем трансфекции (невирусный метод). Часто данную технологию применяют для управляемой экспрессии генов. Сравнительно недавно для этих целей была успешно реализована трансфекция иРНК.

ДНК также может быть внедрена в геном клетки с помощью вирусов или бактериофагов. Они, являясь внутриклеточными паразитами, как нельзя лучше подходят для этих целей, так как внедрение генетического материала в клетку-хозяина является обычной частью их жизненного цикла[.Этот метод называется трансдукция.

Линии клеток человека

Как только стволовая клетка начинает делиться, их количество растет в контролируемой искусственной среде (культуре), эту «коллекцию» здоровых, делящихся и недифференцированных стволовых клеток можно называть клеточной линией.  Стволовые клетки можно стимулировать и заставить их дифференцироваться в необходимый тип клеток, этот процесс называется контролируемая направленная дифференцировка.  При этом эмбриональные стволовые клетки показывают способность к большему числу типов клеток по сравнению с взрослыми стволовыми клетками.

Культивирование человеческих клеток несколько противоречит правилам биоэтики, поскольку изолированно выращиваемые клетки могут пережить родительский организм, а затем использоваться для проведения экспериментов или для разработки новых методов лечения и извлечения из этого прибыли. Первое судебное решение в данной области было вынесено в Верховном суде штата Калифорния по делу «Джон Мур против представителей Калифорнийского университета», согласно которому пациенты не имеют никаких прав собственности на линии клеток, полученных из органов, удаленных с их согласия.

2.1.1.Методы хранения ЭСК (бластоцист).

В клиниках ЭКО используется две технологии криоконсервации. Технология, называемая "медленным замораживанием", и витрификация.

- "Медленное замораживание". Эту процедуру осуществляют таким образом: эмбрион переносят из пробирки с питательным раствором в среду с криопротекторами, и выдерживают около 10 мин.

Криопротекторы – это вещества, защищающие клетки от перемораживания, образования кристалликов льда и повреждения клетки. При медленном замораживании криопротекторами служат пропиленгликоль и сахароза (попросту - тростниковый сахар). Пропиленгликоль защищает клетки эмбриона изнутри, а сахароза - снаружи.

Эмбрионы с криопротекторной средой засасывают в пластиковые соломинки, наподобие тех, что подают к коктейлям, только покороче и потоньше, и сделаны они из нетоксичного пластика. Кроме того, у криосоломинок есть «пробочка» для запечатывания. На соломинке с эмбрионом пишут несмываемым маркером фамилию пациентки, номер ее карты, дату замораживания и порядковый номер соломинки. Так что перепутать их при размораживании невозможно.

Далее соломинку с эмбрионом начинают медленно охлаждать. Охлаждать соломинку нужно очень медленно, с постоянной скоростью – полградуса в минуту. Для создания таких строгих условий используют специальные аппараты – "программируемые замораживатели".

Когда температура снизится до 7 градусов мороза, к соломинке прикасаются охлажденным в жидком азоте пинцетом - и содержимое соломинки замерзает. Кристаллики необходимы, чтобы вызвать процесс вымораживания воды из клеток эмбриона – примерно так, как на морозе высыхает белье. Далее продолжают медленно охлаждать соломинку до минус 35 градусов, а затем быстрым движением переносят ее в жидкий азот, в котором и хранят окончательно при температуре 196 градусов мороза.

Слабые стороны метода медленного замораживания, в том, что защита эмбрионов ото льда в технологии медленного замораживания построена на вымораживании воды, приводящем к обезвоживанию клеток.

Вымораживание воды для эмбрионов – "палка о двух концах". С одной стороны, обезвоживание эмбрионов помогает им пережить замораживание. Но с другой стороны, обезвоживание само по себе зачастую оказывается губительным. Речь ведь идет об очень сильном обезвоживании, при медленном замораживании клетка теряет до 85-90% воды. При таких потерях из клетки уходит не только вся так называемая "свободная вода", но частично и "связанная вода", входящая в состав белков. А это приводит к разрушению белковых молекул и, в конечном итоге, к разрушению самой клетки.

Это опасно для эмбрионов, не слишком эффективно. Для осуществления этого метода необходима дорогостоящая аппаратура, неоправданно большие затраты тонкого ручного труда.

Аппаратов для медленного замораживания не может лучших. Это равносильно тому. Что не может быть лучших пишущих машинок или керосиновых ламп. Среди них, безусловно, есть лучшие, но для современной медицины это не имеет никакого значения.

- Технология витрификации. При витрификации защита эмбрионов основана на другом подходе - тут не допускается образования кристаллов льда вообще. Вся жидкость – как в криосоломинке, так и в клетках эмбриона – при охлаждении до температуры жидкого азота переходит в стекловидное состояние, не образуя кристаллы. Для этого используют другие, более сложные криопротекторные среды, чем при медленном замораживании. Эмбрионы находятся в криопротекторной среде всего одну-две минуты, а затем набирают в криосоломинку и погружают в жидкий азот.

Метод витрификации гораздо более безопасен для эмбрионов, нежели медленное замораживание. По самым последним данным, при витрификации погибают и повреждаются не более 10-12% эмбрионов. Остальные эмбрионы размораживаются без потерь. В то же время, при применении медленного замораживания гибель эмбрионов составляет 25-65%.

Срок хранения замороженных эмбрионов, если условия хранения стабильны, не ограничен. Но пока известен случай наступления беременности после переноса эмбрионов, хранившихся в жидком азоте 12 лет.

Крио-хранилище представляет собой помещение с сосудами Дьюара – нечто вроде гигантского металлического термоса, заполненного жидким азотом. В нем есть специальные ячейки, в которых находятся соломинки с замороженными эмбрионами.

Замораживание эмбрионов осуществляется для того чтобы сохранить избыточные, но хорошие эмбрионы, не использованные в программе ЭКО. В некоторых клиниках их запросто называют "лишними" эмбрионами, но мне такое слово не нравится. Они не лишние, они именно избыточные на данный момент. Ведь в программе ЭКО не переносят пациентке больше двух эмбрионов, а остальные хорошие эмбрионы замораживают. Если беременность не наступит, оставшиеся эмбрионы можно разморозить и перенести пациентке в другом цикле.

В нашей стране, например, в соответствии с международными нормами и приказом МЗ РФ (№ 301 от 28.12.1993 года) „лишние“ бластоцисты должны сохраняться некоторое время в замороженном виде, но затем непременно уничтожаться. Лишь в шести странах приняты законы, разрешающие их использование в исследовательских целях: США, Великобритания, Финляндия, Греция, Голландия и Швеция. В пяти странах полностью запрещено использование бластоцист: в Австрии, Дании, Франции, Ирландии и Испании. В большинстве других европейских стран, в частности в Италии и Португалии, а также в России, по этому вопросу нет законодательств. В Германии разрешён ввоз эмбриональных стволовых клеток.

Ввиду пластичности и потенциально неограниченного потенциала самообновления, эмбриональные стволовые клетки имеют перспективы применения в регенеративной медицине и замещении поврежденных тканей. Однако в настоящий момент не существует никакого медицинского применения эмбриональных стволовых клеток.

2.2.2. Пуповинная кровь. Плацентарно-пуповинная кровь, собранная после рождения ребенка, очень богата стволовыми клетками. Взяв эту кровь и поместив в криобанк стволовых клеток, в дальнейшем можно использовать ее для восстановления практически любых тканей и органов, а также для лечения любых заболеваний, в том числе и онкологических. Однако существует мнение, что количество стволовых клеток в пуповинной крови не достаточно велико, и эффективное их применение возможно только однократно для самого ребёнка до 10 лет.

Сегодня в основном в банках стволовых клеток хранятся клетки, выделенные из пуповинной крови, собранной при рождении ребенка.

При использовании плодов, особенно при поздних абортах, для получения эмбриональных стволовых или прогениторных  клеток следует получить информированное согласие женщины на использование абортивного материала и одобрение программы исследования комитетом по биоэтике. Этическими правилами особо подчёркивается необходимость не допускать коммерциализации таких исследований. Это необходимо, прежде всего, для того, чтобы избежать психологического давления на мать (с помощью денежного подкупа или путем ложной оценки состояния её плода) при получении её согласия на прерывание беременности.

2.2.3. РСК


Выделение и сохранение стволовых клеток может рассматриваться как форма биологического страхования, поскольку с возрастом количество стволовых клеток в организме уменьшается, а именно они, по мнению, ученых, смогут в будущем стать панацеей от многих болезней.

Полученный костный мозг обрабатывают, чтобы удалить кровь и фрагменты кости. В полученный костный мозг могут добавлять консервант или замораживать его, чтобы сохранить стволовые клетки до тех пор, пока они понадобятся. Эта процедура известна как криоконсервирование. Стволовые клетки могут быть заморожены в течение многих лет.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Сборник методических указаний для обучающихся к внеаудиторной (самостоятельной) работе для специальности

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Ик методических указаний для обучающихся к практическим занятиям по дисциплине «Антропология» для

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Учебной работе д м. н., проф. С. Ю. Никулина 2012 г. Перечень вопросов к экзамену по дисциплине «Анатомия»

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Форма освоения основной профессиональной образовательной программы по специальности 060101 Лечебное

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Ика внутренних болезней тестовый контроль с эталонами ответов для студентов 3-го курса, обучающихся
«Красноярский государственный медицинский университет им проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого Министерства...
Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Методические указания к практическим занятиям для студентов медицинского факультета специальности

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Программа по микробиологии для обучения студентов лечебного факультета и факультета спортивной медицины

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Учебно-методическое пособие по дисциплине «пропедевтика внутренних болезней, лучевая диагностика»

Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon В. В. Иванова Патология сборник ситуационных задач с эталонами ответов для студентов 2-3 курсов,
Патология: сборник ситуационных задач с эталонами ответов для студентов 2-3 курсов, обучающихся по...
Сборник методических указаний для обучающихся к практическим занятиям для специальности 060101 Лечебное дело (очная форма обучения) Красноярск 2013 icon Сборник тестовых заданий с эталонами ответов для студентов 6 курса, обучающихся по специальности
Патофизиология: сборник тестовых заданий с эталонами ответов для студентов 6 курса, обучающихся по...
Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина


База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Документы