|
Скачать 2.5 Mb.
|
^
Образец c пробиркой-спутником помещают в специальный контейнер - криобокс, переносят в хранилище и подвергают плавному охлаждению до -80оС, после чего погружают в жидкий азот, в котором они и будут храниться. В каждой ячейке криобокса хранится один образец в мешке или криопробирках с пробиркой-спутником. есть все основания предполагать, что они могут храниться гораздо дольше. ^ Выделенные стволовые клетки находятся в аутологичной плазме. Никаких чужеродных для человеческого организма компонентов. Каждая ампула с клетками помещается в герметично запаянный пластиковый пенал, обеспечивающий дополнительную защиту содержимого и маркировки. Данный способ является наиболее адекватным по сравнению с хранением цельной крови в пластиковых мешках. Стволовые клетки расфасованы в несколько ампул. В случае необходимости, это позволит использовать нужное на данный момент количество клеток, а оставшиеся сохранить для будущих нужд, учитывая быстрое развитие новых клеточных технологий. Стволовые клетки подвергаются программному замораживанию в специальной установке, обеспечивающей оптимальную скорость охлаждения и максимальную жизнеспособность выделенных клеток. Клетки хранятся в уникальных условиях: в жидком азоте при температуре -196°С. При такой температуре они сохраняют жизнеспособность и биологическую активность на протяжении практически неограниченного периода времени. Чтобы исключить риск возможного инфицирования бактериальными или вирусными агентами, ни один образец не попадет в хранилище, не пройдя тщательного бактериологического и вирусологического контроля. До этого времени, все пробы проходят "карантинное" хранение и изолированы друг от друга. Только "чистые" по всем показателям образцы попадают в основное хранилище клеток. Криохранилище представляет собой резервуар (дюар), заполненный жидким азотом, внутри которого находится система для размещения криобоксов. Температура в дюаре - 196оС. Сегодня считается, что клетки могут сохраняться в жидком азоте без потери активности до 15 лет, однако есть все основания предполагать, что они могут храниться гораздо дольше. Стромальные стволовые клетки извлекаются оттуда при помощи пункции. Затем, в лабораторных условиях особым образом их мобилизируют, наращивают и вводят обратно в организм, где при участии специальных сигнальных веществ, они направляются к «больному месту». Следует отметить, что даже из одной единственной стромальной клетки можно вырастить колонии. И уж совсем невероятная метаморфоза - стромальные стволовые клетки могут настолько «забыть» о своем костном мозговом происхождении, что под влиянием определенных факторов превращаются в нервные клетки (нейроны) или клетки сердечной мышцы. Показано, что через 2 недели после добавления специального сигнального вещества в культуру стромальных клеток, они уже на 80 % состоят из нейронов. 90 % стромальных клеток, введенных в зону инфаркта, полностью перерождаются в клетки сердечной мышцы, восстанавливая функции миокарда практически полностью. Однако стромальные клетки взрослого организма обладают ограниченной функциональностью, то есть их возможная тканевая специализация в той или иной степени лимитирована. Помимо этого все стволовые клетки взрослого человека каталогизированы и снабжены специальным штампиком: <�моё>. Так что донорство в этой области чревато возникновением противостояния, называемого <�трансплантат - против хозяина> Стволовые клетки взрослых организмов и стволовые клетки спинного мозга используются для терапии различных заболеваний. Некоторые заболевания крови и иммунной системы (в том числе генетические) могут быть вылечены такими неэмбриональными стволовыми клетками. Разрабатываются методы лечения с помощью стволовых клеток таких патологий, как онкологические заболевания, юношеский диабет, синдром Паркинсона, слепота и нарушения работы спинного мозга. Преимущества сохранения собственных стволовых клеток: - однажды полученные, клетки могут храниться десятилетиями в жидком азоте при температуре -196 С°; - каждый образец проходит тщательный бактериологический и вирусологический контроль; - кровные родственники (братья, сестры, мать, отец) имеют высокий шанс оказаться иммунологически совместимыми и, в случае необходимости, могут стать реципиентами стволовых клеток ребенка; - стоимость затрат на выделение и <�именное> (персональное) хранение клеток из пуповинной крови в десятки раз меньше, чем поиск и приобретение аналогичных, но донорских; - область применения клеточных технологий постоянно расширяется: с развитием медицинской науки, заблаговременно заготовленные стволовые клетки могут стать незаменимой основой для новейших способов лечения многих заболеваний. Лечение стволовыми клетками костного мозга. Стволовые клетки (за редким исключением) не "лечат" болезнь. Их роль заключается в восстановлении костного мозга, крови и иммунной системы пациента после проведения сочетанного лечения основного заболевания. Радио- и химиотерапия обычно успешно справляются с уничтожением, к примеру, раковых клеток. Но, наряду с "нежелательными" клетками, высокие дозы препаратов оказывают негативное воздействие и на организм в целом, - погибает костный мозг, точнее, находящиеся в нем стволовые клетки. Этим диктуется необходимость последующей трансплантации.Заново введенные стволовые клетки репопулируют (обживают) погибший костный мозг, размножаются и восстанавливают его, начиная выполнять работу погибших клеток. Это же свойство стволовых клеток используется и при ряде наследственных болезней крови. В этом случае донорские "здоровые" клетки трансплантируются после того, как собственный "дефектный" костный мозг тоже убивается, но уже преднамеренно. Выводы:
Ключевые слова: Факторы роста - естественные субстанции, способные стимулировать рост, пролиферацию и/или дифференцировку живых клеток. Как правило, это пептидные или стероидные гормоны. Факторы роста функционируют как сигнальные молекулы для взаимодействия между клетками. Примерами являются цитокины и гормоны, связываемые специфическими клеточными рецепторами. Другими широко известными факторами роста являются эритропоэтин и инсулиноподобный фактор роста 1. Первичные прогениторные клетки — стволовые клетки половых зачатков эмбриона. ^ Обучающийся должен ознакомиться с текстом учебных пособий и продемонстрировать следующие умения:
^ - ответы на вопросы по теме занятия: 1. В чем, по мнению первого президента Национального консультативного этического комитета Франции Жан Бернар заключались две революции биомедицины? 2. Дайте определение понятия « культивирование». 3. Какие способы выделения клеток для культивирования вне организма вы знаете? 4. Существуют ли ограничения в сроках культивирования клеток? 5. Поясните особенности культивирования клеток? 6. В чём заключаются особенности выращивания клеток? 7. В каком случае используется пассажирование клеток? 8. Каким образом осуществляется метод «медленного замораживания». 9. В чём заключается технология витрификации? 10. С какой целью в медицине используют ЭСК (эмбриональные стволовые клетки)? 11. Какие клетки пуповинной крови культивируются? В каком случае они используются? 12. Почему культивирование и сохранения СК (стволовых клеток) абортивного материала больше всего подвергается биотическому обсуждению? 13. Почему выделение и сохранение РСК (региональных стволовых клеток) рассматривается как форма биологического страхования? 14. В каком случае стромальные клетки «забывают» о своём происхождении? 15. В чём преимущества сохранения собственных стволовых клеток? - решение ситуационных задач: Задача № 1. Клетки можно выращивать в адгезивном состоянии.
Задача № 2. При выращивании клеток, из-за постоянного деления может возникнуть их переизбыток в культуре и может начаться клеточное дифференцирование.
Задача № 3. Для поддержания нормального функционирования культур клеток, а также для предотвращения негативных явлений периодически проводят замену питательной среды, пассажирование и трансфекцию клеток.
Задача № 4. В клиниках ЭКО используется две технологии криоконсервации: технология, называемая "медленным замораживанием" и витрификация.
Задача № 5. При использовании плодов, особенно при поздних абортах, для получения эмбриональных стволовых или прогениторных клеток следует получить информированное согласие женщины на использование абортивного материала и одобрение программы исследования комитетом по биоэтике.
^ ответить на контрольные вопросы и тестовые задания, решить ситуационные задачи по теме «Эмбриональные стволовые клетки – понятие, характеристики, свойства», методические указания для обучающихся № 5 к внеаудиторной работе). ^ Подготовить рефераты на темы: 1. Основные методы и методы культивирования клеточного материала. 2. Биоэтика о культивировании стволовых клеток. 3. Пуповинная кровь - плюсы и минусы использования. 4. Стромальные стволовые клетки – вариант продления активной жизни? ^ итоговое занятие. 3. Значение изучения темы. Основными видами работы на занятии являются тестирование, устное собеседование, анализ особенностей разновидностей стволовых клеток, по которым можно судить о применении их в медицине. Знание месторасположения в организме, происхождение, а также способов и особенностей получения и культивирования стволовых клеток, позволяют приобретать более глубокие знания по применению их в медицине. ^ (обучающийся должен обладать ОК и ПК): - способностью и готовностью анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК-1); - способностью и готовностью к логическому и аргументированному анализу, к публичной речи, ведению дискуссии и полемики (ОК-5); - способностью и готовностью выявлять естественнонаучную сущность проблем, возникающих в ходе профессиональной деятельности врача-педиатра, использовать для их решения соответствующий физико-химический и математический аппарат (ПК-2); - способностью и готовностью к формированию системного подхода к анализу медицинской информации, опираясь на всеобъемлющие принципы доказательной медицины, основанной на поиске решений с использованием теоретических знаний и практических умений в целях совершенствования профессиональной деятельности (ПК-3); - способностью и готовностью анализировать закономерности функционирования отдельных органов и систем, использовать знания анатомо-физиологических основ, основные методики клинико-иммунологического обследования и оценки функционального состояния организма детей и подростков для своевременной диагностики заболеваний и патологических процессов (ПК-16); - способностью и готовностью изучать научно-медицинскую информацию, отечественный и зарубежный опыт по тематике исследования (ПК-31); - способностью и готовностью к участию в освоении современных теоретических и экспериментальных методов исследования с целью создания новых перспективных средств, в организации работ по практическому использованию и внедрению результатов исследования (ПК-32); -учебная: знать основания для классификации стволовых клеток и их классификационные группы; происхождение, особенности и способы получения и культивирования; разбираться в вопросах этичного использования стволовых клеток. уметь определять групповую принадлежность стволовых клеток по их происхождению, использовать знание о стволовых клетках разных групп для применения в медицине; владеть навыками анализа и синтеза информации. ^ Тестовые задания с эталонами ответов см. в методических указаниях для обучающихся к внеаудиторной работе № 4-10. ^ Основные понятия и положения темы см. в методических указаниях для обучающихся для аудиторной работы № 4-10. 5.3. Перечень и стандарты практических умений. Перечень и стандарты практических умений см. в методических указаниях для обучающихся к внеаудиторной работе № 4-10. ^ - ответы на вопросы по теме занятия: Вопросы см. в методических указаниях для обучающихся к внеаудиторной работе 4-10. - решение ситуационных задач: Ситуационные задачи см. в методических указаниях для обучающихся к внеаудиторной работе № 4-10. ^ : (ответить на контрольные вопросы и тестовые задания, решить ситуационные задачи к зачетному занятию, см. методические указания для обучающихся №4-10 к внеаудиторной работе). ^ Темы рефератов см. в методических указаниях для обучающихся к внеаудиторной работе № 4-10. 1. Занятие № 12 Тема: «Новое оборудование для работы в морфологических лабораториях. Характеристика реактивов, используемых в морфологических исследованиях. Новые направления в их производстве». ^ Основная задача морфологической лаборатории заключается в постановке точного прижизненного диагноза в работе врача. Для достижения оптимальных результатов в любом гистологическом исследовании необходимо использовать качественное оборудование. Использование нового оборудования в морфологических лабораториях позволит значительно сократить время получения гистологического заключения и постановки диагноза, обеспечит назначение своевременной и адекватной терапии; снизит количество ошибок, сократит экономические затраты, связанные с повторными исследованиями. На сегодняшний день существует множество компаний, которые являются поставщиками оборудования на лабораторном рынке. На данном занятии проводится знакомство с новыми химреактивами и новым оборудованием для морфологических лабораторий. ^ (обучающийся должен обладать ОК и ПК): - способностью и готовностью анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК-1); - способностью и готовностью к логическому и аргументированному анализу, к публичной речи, ведению дискуссии и полемики (ОК-5); - способностью и готовностью выявлять естественнонаучную сущность проблем, возникающих в ходе профессиональной деятельности, использовать для их решения соответствующий физико-химический и математический аппарат (ПК-2); - способностью и готовностью к формированию системного подхода к анализу медицинской информации, опираясь на всеобъемлющие принципы доказательной медицины, основанной на поиске решений с использованием теоретических знаний и практических умений в целях совершенствования профессиональной деятельности (ПК-3); - способностью и готовностью анализировать закономерности функционирования отдельных органов и систем, использовать знания анатомо-физиологических основ, основные методики клинико-иммунологического обследования и оценки функционального состояния организма взрослого человека, для своевременной диагностики заболевания и патологических процессов (ПК-16); - способностью и готовностью изучать научно-медицинскую информацию, отечественный и зарубежный опыт по тематике исследования (ПК-31); - способностью и готовностью к участию в освоении современных теоретических и экспериментальных методов исследования с целью создания новых перспективных средств, в организации работ по практическому использованию и внедрению результатов исследований (ПК-32). - учебная: знать основные методы гистологического исследования неживых и живых объектов, основные этапы изготовления препаратов для световой и электронной микроскопии, правила техники безопасности и работы в морфологической лаборатории с химреактивами, приборами и животными; уметь работать с микроскопом, используя различные источники освещения, объективы и окуляры на основании «Правил пользования микроскопом»; владеть медико-аналитическим понятийным аппаратом, навыками микрокопирования и современными методами окраски гистологических препаратов. 5. План изучения темы: 5.1. Контроль исходного уровня знаний (тестирование). Выбрать один правильный ответ.
^ Выполнение задач лаборатории предусматривает осуществление забора и вырезки биологического материала, подготовку гистологического материала и его многоуровневую морфологическую оценку. В настоящее время применяют технологию реорганизации производственных процессов на основе процессного подхода, позволяющую сформировать логически выстроенную, документированную, прозрачную систему управления морфологической лабораторией. Разработана комплексная модель производственного процесса морфологической лаборатории, сформированная на основе технологии графического моделирования IDEF 0. Модель представлена подготовительным, исследовательским и заключительным этапами. Основной процесс в морфологической лаборатории - это «Процесс выполнения гистологических исследований». ^ Представляют этот основной процесс три взаимодействующих между собой процесса: подготовительный (преаналитический), исследовательский (аналитический) и заключительный (постаналитический) этапы. 1. Подготовительный этап является важнейшим этапом моделирования деятельности лаборатории. Подготовительный (в лабораториях общего профиля более принято обозначать как преаналитический) этап включает в себя несколько подпроцессов – регистрация пациента в лечебно-профилактическом учреждении, планирование услуги, взятие биоматериала, фиксация, маркировка, оформление направительных документов, транспортировка, приемка, сортировка, первичная регистрация в лаборатории. 2. Исследовательский этап описывает основной технологический процесс морфологической лаборатории. Исследовательский (в лабораториях общего профиля более принято обозначать как аналитический) этап включает в себя несколько подпроцессов – макроскопическое описание, вырезка, фиксация, проводка, заливка, микротомия, окраска и заключение микропрепаратов, оценка микропрепаратов: ^
2 Оборудование для подготовки биологического материала для проведения гистологического и морфологического анализа
^
Оборудование, применяемое в лаборатории можно разделить на: общелабораторное и для гистологического исследования. ^ включает в себя: - дозирующее оборудование (электронные и механические дозаторы; наконечники; вспомогательные устройства для дозирования; мерная лабораторная посуда: пипетки, цилиндры, колбы); - центрифуги высокоскоростные (для микробъёмов и универсальные для больших ёмкостей) с микропроцессорным управлением и сенсорной панелью. - открытые и закрытые ламинарно – потоковые шкафы (для защиты оператора, рабочей зоны и окружающей среды). Стандартное оснащение ламинарно-потоковых шкафов:
Для защиты рабочей зоны используют открытые ламинарно-потоковые шкафы серии KV и KH, которые:
Для защиты оператора, рабочей зоны и окружающей среды используют ламинарно-потоковые шкафы II класса биологической безопасности:
- автоклавы и суховоздушные стерилизаторы; - низкотемпературные морозильники; - лабораторная мебель. Гистологическое оборудование включает в себя инновационное оборудование и классическое. Инновационное оборудование представляют уникальные тканевые процессоры, работа которых основана на микроволновой технологии. Они позволяют выполнять скоростную гистологическую обработку тканей и получать улучшенные цитоморфологические показатели, что сокращает время ожидания гистологического заключения с 3-7 дней до 1 дня. Возможна одновременная обработка материала из различных типов ткани (например почка, легкое, матка, молочная железа, кожа и т.д.). Кроме этого не проводится процесс депарафинирования в ксилоле. Классическое оборудование: - микроскопы (бинокулярный, электронный, цифровой); ^ - это микроскоп, укомплектованный цифровой видеокамерой, с помощью которой изображения передаются в компьютер для хранения и анализа. Цифровой микроскоп состоит из:
Цифровой микроскоп дает возможность не просто наблюдать микро-объекты в окуляры, но и
- микротомное оборудование (санные, ротационные, распиливающие, вибрационные микротомы, микротомы с замораживанием срезов – креостаты, ультромикротомы, для изготовления срезов); - системы для заливки образцов парафином; - системы окраски и заключения срезов (коверслипер-производительность до 520 стекол в час); - оборудование для электронной микроскопии; - шкафы для хранения гистологических препаратов (декальцинатор); - среда для окрашивания («Биомант»). Современное качественное оборудование и современные материалы, создают все условия для эффективной работы лаборатории, для точной клинической диагностики и прогрессивных научных исследований. ^ Обучающий должен ознакомиться с текстом учебных пособий, лекций и продемонстрировать следующие умения:
^ - ответы на вопросы по теме занятия:
- решение ситуационных задач: Задача № 1. На занятии студент изучил микропрепарат при малом увеличении микроскопа, а затем хотел рассмотреть интересующие его структуры при большом увеличении, но несмотря на попытки сфокусировать изображение, четкости он не добился.
Задача № 2. Известно, что в состав клетки входят различные органические вещества.
^ (ответить на контрольные вопросы и тестовые задания, решить ситуационные задачи по теме «Работа в морфологической лаборатории. Отработка навыков по изготовлению гистологических препаратов, овладение основными методами окраски гистологических препаратов (гематоксилин-эозин)», см. методические указания для обучающихся № 13 к внеаудиторной работе). ^ Подготовить рефераты на темы:
1. Занятие № 13 |