Учебно-методическое пособие Составители: Д. А. Васильев, А. А. Щербаков, Л. В. Карпунина С. Н. Золотухин удк 619: 616
|
|
Скачать 3.74 Mb.
|
|
^
Микроорганизмы, объедененные в данный род, включают 13 видов. Они известны с 1909 г, со времени выделения в Англии Мак Федиеном и Штокманом культуры C.fetus из эмбрионов при инфекционных абортах овец. Позднее, у КРС эту культуру выделили Смит и Тейлор (США, 1918). В СССР заболевание впервые диагносцировано у коров, в 1926 В. Якимовым. Морфологически это спиральные, S-oбpaзные или изогнутые в виде запятой, «крыла чайки» бактерии; размеры которых — 0,5-5,0 0,2-0,8 мкм, могут иметь один и более витков и достигать длины 8 мкм. При культивировании более 48-72 ч образуют кокковидные формы. Подвижные, обладают характерным «винтообразным движением», подвижность обусловлена наличием жгутика, расположенного на одном или двух полюсах (могут в 2-3 раза превышать длину клетки). Спор не образуют; хемоорганотрофы, у большинства видов метаболизм дыхательный. Углеводы не ферментируют и не окисляют, не образуют кислых и нейтральных конечных продуктов метаболизма, энергию получают расщеплением аминокислот и интермедиатов цикла Кребса. Оксидазоположительны, редуцируют нитраты. Патогенные для человека виды капнофилы (необходимая концентрация СО2 10-15%) и микроаэрофилы (необходимая концентрация О2 3-15%) Некоторые могут также расти и в аэробных условиях (21% О2), другие, например, С. fetus subsp. fetus, способны к росту в анаэробных условиях. Для роста в микроаэробных условиях некоторые виды нуждаются в ионах Н+ и формиатах. Некоторые виды растут в анаэробных условиях в присутствие фумарата, либо фумарата + формиата, формиата и Н+. Грамотрицательны, но водные и спиртовые растворы анилиновых красителей воспринимают с трудом, для идентификации их обычно окрашивают карболовым фуксином Циля (в разведении 1:5). Типовой вид — С. fetus. Род включает виды, патогенные да человека и теплокровных животных, вызывают поражения известные как кампилобактериозы. Обычно их выделяют из органов мочеполовой системы, кишечника и ротовой полости. Виды, патогенные для человека и вызываемые ими поражения, представлены в табл. 21, дифференциальные признаки — в табл. 22. Среди них наибольшее медицинское значение имеет С. jejuni, чья патогенность для человека, как возбудителя пищевой токсикоинфекции, была установлена сравнительно недавно (1972 г). ^ Культуральные свойстваТемпературный оптимум 42°С; оптимум рН 7,0-7,2; для создания микроаэрофильных условий в анаэростате замещают 75% воздуха смесью из 90% азота и 10% СО2 Оптимальную газовую среду получают с помощью коммерческих газогенераторных пакетов (например, Campy Pak II); удовлетворительный рост можно получить в анаэростате со свечой. В полевых условиях используют стерильные пластиковые пакеты, в которые вносят чашку, засеянную исследуемым материалом, и чашку, засеянную чистой культурой любого факультативного анаэроба (например, эшерихиями); последние будут поглощать О2 и выделять СО2 в процессе роста. Кампилобактерии плохо переносят транспортировку; при наличии опыта можно проводить непосредственную их идентификацию в образцах фекалий; в противном случае их следует помещать в консервант, например, тиогликолевый бульон (рН 8,5) или щелочную пептонную воду, содержащую 0,05% тиогликолята Na и 0,025% цистеина, и хранить при температуре 4°С. Для получения более чистых культур используют метод фильтрации через мембранные фильтры (диаметр пор 0,65 мкм), основное достоинство метода — возможность посева фильтрата на неселективные среды (например, КА или ША), основной недостаток — возможность больших потерь бактерий, но обычно ее не принимают во внимание, т.к. 1 г фекалий больного содержит 107-108 жизнеспособных кампилобактерий. ^
Для более быстрого выделения производят посев на селективные среды, например, среды Скирроу, Бутцлера или Престона. На твердых средах образуют колонии двух типов — плоские, влажные, прозрачные с мелкой грануляцией, слизистые, сероватые, «расползающиеся» колонии с неровными краями (могут быть очень мелкими и напоминать капли конденсата) либо мелкие дискретные блестящие выпуклые колонии размером до 1-2 мм, ровными краями. На полужидких и жидких средах образуют поверхностную голубовато-серую пленку. ^ Инертны к углеводам; кислых или нейтральных конечных продуктов не образуют; большинство видов редуцирует нитраты; образуют H2S; молоко не свертывают; не проявляют гемолитическую активность. Для роста не требуют сыворотки, энергию получают от аминокислот или промежуточных продуктов цикла Кребса, реакции Фогеса-Проскауэра и с метиловым красным отрицательные; желатину и мочевину не гидролизуют; оксидазоположительны; липазная активность отсутствует, пигментов не образуют. ^
* С. cinaedi и C.fennelliae напоминают Helicobacter pylori и, очевидно, скоро будут перенесены в род Helicobacter. ** В настоящее время выделены штаммы С. fetus подвид fetus, резистентные к цефалотину. *** В настоящее время выделены гиппурат-отрицательные и резистентные к налидиксовой кислоте штаммы С. jejuni. Для дифференцирования Campylobacter jejuni и С. coli, вызывающих абсолютно идентичные поражения, применяют экспресс-тест с гиппуратом (свежевыделенные штаммы С. jejuni всегда дают положительный результат). Для дифференцирования Campylobacter jejuni и С. laridis можно использовать тест чувствительности к налидиксовой кислоте (первый вид чувствительный, второй — резистентный). ^ Важнейшие поверхностные Аг представлены ЛПС (О-Аг) и кислоторастворимыми белковыми фракциями, играющими ведущую роль в серотипировании. Общий Аг энтеробактерий отсутствует. Идентифицирован жгутиковый (Н-) Аг. По термостабильному, соматическому О –Аг, штаммы подразделяются на 60 сероваров, по термолабильному, поверхностному на 50 сероваров. О-Аг определяют иммунологическую специфичность кампилобактеров, выявляемую в РНГА; они представлены низкомолекулярными веществами, а антигенные различия между разными сероварами обусловлены варьированием углеводного состава внутреннего ЛПС. Белковый жгутиковый Аг, общий для всех сероваров. ПатогенезПатогенез заболеваний обусловлен высокой адгезивной и инвазивной активностью кампилобактерий. Последние размножаются в присутствии желчи и быстро колонизируют верхние отделы тонкой кишки. Прикрепление бактерий к слизистой оболочке во многом обеспечивают поверхностные специфические адгезины; большое значение имеет способность бактерии проникать через слизь и перемещаться вдоль эпителия (жизнеспособность в слизи coxраняют более 30 минут), т.е. жгутики — также важный фактор адгезии. Данные микроорганизмы легко проникают через мембрану эпителиальных клеток и межклеточные ходы, например, после внесения бактерий в культуру клеток HeLa и часовой инкубации практически во всех клетках обнаруживают бактерии. Клинический признак, подтверждающий их инвазивность, — наличие крови и слизи в испражнениях больных. Колонизация кампилобактериями тонкой кишки приводит к развитию воспалительных изменений и отека слизистой оболочки; в lamina propria обнаруживают инфильтрат, содержащий полиморфноядерные лейкоциты, лимфоциты и плазматические клетки. Эндоскопия выявляет отек и гиперплазию слизистой оболочки, эрозии, сливающиеся в крупна изъязвления (в тонкой и толстой кишках). Определенный вклад в патогенез поражений вносят термолабильный и термостабильный энтеротоксины. По механизму действия термолабильный энтеротоксин напоминает термолабильные диареегенные токсины эшерихий и холерного вибриона (повышает уровень внутриклеточного цАМФ). Термостабильный энтеротоксин (эндотоксин) высвобождается после гибели кампилобактерий; проявляет все свойства эндотоксинов грамотрицательных бактерий. Вызывает гибель мышей после введения живых или убитых микроорганизмов. Характер и выраженность поражений определяют факторы макроорганизма и, в первую очередь, состояние иммунной системы. Группу повышенного риска составляют дети (особенно до 2 лет), пожилые, страдающие сопутствующими заболеваниями, пациенты с иммунодефицитами либо получающие стероиды и цитостатики. ^ Основана на выделении возбудителя из испражений; следует помнить, что на характер колоний возбудителя влияет качество среды – на «свежих» средах колонии более склонны расползаться. При посеве фекалий от больных на селективные среды рост возбудителя отмечают на 3 и 4 квадрантах, но следует тщательно осматривать всю чашку, т.к. они могут вырасти на 1 квадранте в окружении колонии контаминирующей микрофлоры. Для быстрой идентификации можно провести микроскопическое исследование фекалий; кампилобактеры видны как нежные грамотрицательные спиралевидные или S-образные бактерии (особенно часто типичные формы наблюдают при окраске кристаллическим фиолетовым). Также можно применять фазово-контрастную микроскопию суспензии испражнений в жидкой среде (например, в среде для культивирования бруцелл или Мюллера-Хинтона). Для идентификации кампилобактериозов также могут быть использованы серологические методы, например РА (на 2 нед. титр AT составляет 1:8-1:32) или РСК (видоспецифическая реакция, требующая соответствующего Аг). В РФ разработаны экспериментальные партии диагностикумов для выявления AT в реакции РНГА. РаспространенностьКампилобактериальные гастроэнтериты выявляют повсеместно; однако получению более полной картины препятствует несовершенство методов диагностики. Заболеваемость может носить спорадический, преимущественно автохтонный характер (у городского населения - чаще при выездах в сельскую местность), особенно при слабой или умеренно выраженной диарее. Характерная особенность — сезонность заболевания (подъем заболеваемости в сельской местности наблюдают в зимние месяцы, а у горожан пик заболеваемости приходится на теплый сезон). Однако во многих случаях она может быть связана с выездом в другие страны («диарея путешественников»). Отмечены эпидемические вспышки различного происхождения (пищевые, водные, молочные). Резервуар. Источники инфекции — животные (в том числе домашний скот и птица), от которых возбудители могут попадать в организм человека при употреблении сильно обсемененных продуктов. Важная роль принадлежит диким водоплавающим птицам, способным загрязнять источники водопользования. В ряде случаев резервуаром может быть больной человек, но процент носителей обычно бывает очень низким (менее 1% в популяции) и, учитывая относительно низкую вирулентность возбудителей, его можно не принимать во внимание. ^ Впервые выделен в 1909 г. при инфекционных абортах; у человека (от беременных женщин, госпитализированных по поводу лихорадки неясного генеза) возбудитель выделил Венсан (1947). У части пациенток инфицирование приводило к выкидышам. Из крови ребенка, родившегося у одной из пациенток, был выделен микроорганизм, позднее идентифицированный как С. fetus подвид fetus и его посчитали причиной абортов. В настоящее время известно много случаев, зарегистрированных в США, Германии, Франции, Южной, Африке и Непале. Однако, механизмы инфицирования остаются плохо изученными; доказана возможность заражения при контактах с животными, при употреблении загрязненных воды и пищи; но в 30% случаев подобные факторы исключены и, предположительно, инфекция происходит из эндогенного источника. Клиническая картина поражений вариабельна: пиогенные менингиты и шингоэнцефалиты, аборты, эндокардиты, тромбофлебиты, артриты и желтуха с гепатомегалией. Установление точного диагноза возможно лишь при выделении возбудителя (чаще из крови, реже из гнойного отделяемого). Поскольку более 75% поражений приходится на возраст старше 45 лет, то можно полагать, что важную роль в развитии заболеваний играет состояние организма и наличие сопутствующих заболеваний (например, сахарный диабет, почечная или печеночная недостаточность, дефекты кроветворения), а сам возбудитель следует рассматривать как условно-патогенный. Иногда микроорганизм колонизирует ротовую полость; стоматологические манипуляции могут вызвать бактериемию. Выделение возбудителя проводят способами, рассмотренными выше; культуральные характеристики аналогичны таковым у прочих кампилобактеров. С. coliНа плотных средах образуют округлые, выпуклые, гладкие, блестящие колонии диаметром 1-2 мм. На кровяном агаре не дают гемолиза. При посеве уколом на полужидких средах растут ближе к поверхности среды. Рост на среде с 8%-ной глюкозой и резистентность к бриллиантовой зелени, способность гидролизовать гиппураты являются дифференцирующими признаками от С.jejuni. ^ Изогнутые, короткие клетки длиной 1,0-2,8 мкм, В старых культурах преобладают клетки кокковидной или нитчатой формы. Для развития микроба необходимы в атмосфере микроаэрофильные условия, обеспечиваемые газовой смесью (5% О2, 10% СО2 и 85% Н2) или анаэробные (Н2). На агаре образуют грязно-желтого цвета, приподнятые, с плоской поверхностью колонии диаметром до 1,5 мм. Растут на средах, содержащих 0,5% дезоксихолата натрия, бриллиантовый зеленый (1:100 000), 6% желчи. Не обладают уреазной активностью. Не гидролизуют желатин. Не образуют индол. Известно три серологических варианта: А, В и С. Патогенны для свиней. Выделяются из слизистой кишечника с явлениями аденоматоза, некротического энтерита, локального илеита и пролиферативной геморрагической энтеропатии. Кроме того, могут быть выделены из ротовой полости у свиней. ^ Вид с неустановленным систематическим положением. Представляют собой ригидные спиралевидные клетки диаметром 1 мкм, длиной 5-12 мкм. Подвижны, имеют на концах по одному жгутику. Предположительно вызывают у цыплят месячного возраста заболевание, сходное с дифтероидным стоматитом. Возможность культивирования на искусственных питательных средах не установлена. ^ Сафранино-железо-новобиоциновая (СЖН) среда. В смесь, состоящую из 250 мл экстракта мышцы сердца, 250 мл печеночной воды и 500 мл дистиллированной воды, вносят 10 г пептона, 5 г NaCl. Кипятят 15 минут, доводят дистиллированной водой до первоначального объема, устанавливают рН 7,1-7,2, после чего добавляют 2 г агара и кипятят до его полного растворения (15-20 минут). К 985 мл полученного полужидкого агара добавляют 5 мл 2%-ного раствора сернокислого железа, 5 мл 0,5%-ного водного раствора сафранина Т и 5 мл 0,2%-ного водного раствора новобиоцина. Среду фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки и автоклавируют при 115°С 25 минут. Готовая к использованию среда должна быть розового цвета, рН 6,8. При культивировании на данной среде культур кампилобактерий ее цвет не изменяется, другой микрофлоры — приобретает ярко-желтую окраску, ^ В смесь, состоящую из 745 мл сердечного и 245 мл мозгового отваров, вносят 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 20 г агара, 1 г цистеина, 5 мл 0,5%-ного раствора сафранина Т и 5 мл 0,2%-ного раствора новобиоцина. Среду автоклавируют при 115°С 25 минут, охлаждают до 45-50°С, добавляют 10% дефибринированной крови барана или крупного рогатого скота и разливают в чашки Петри. Рост культуры становится заметен на 2-3 сутки. Дифференциальные среды предназначены для дифференциации кампилобактерий в пределах рода по их способности расти в присутствии 1% глицина, 3,5% хлорида натрия, 1% желчи, бриллиантового зеленого (1:100 000, 1:33 000). ^ В смесь, состоящую из 500 мл водопроводной, 250 мл мясной и 250 мл печеночной воды, вносят 10 г пептона, 2 г агара. Кипятят до полного растворения агара (15-20 минут). Устанавливают рН 7,3-7,4. Добавляют 10 г глицина, 35 г хлорида натрия, 10 мл желчи, 1 или 3 мл раствора бриллиантового зеленого 1:1000, разливают и автоклавируют при 115°С 30 минут. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
отлично
1
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям