Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк

Скачать 1.83 Mb.

Название	Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк
страница	6/10
	Ж. Г. Шабан
Дата	25.03.2013
Размер	1.83 Mb.
Тип	Документы

Содержание

II. Этапы БЛМИ при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
Процедура алкогольного шока: в
Процедура теплового шока
Таблица 9 Схема бактериологического метода исследования
изучение мофотипов колоний
и сследование свойств чувствительных к кислороду культур
выдача заключения

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

4 этап.

А. Учет и анализ результатов. Учитывают результаты изучения биохимических, серологических, генетических и др. характеристик и сравнивают их со свойствами эталонных (типовых) штаммов различных видов микроорганизмов. Относят идентифицируемый микроорганизм к тому виду, с которым он проявляет наибольшее сходство. Учитывают спектр чувствительности к противомикробным препаратам.

Б. Выдача заключения. Оформляют заключение, которое представляет собой заверенный бланк с данными о пациенте, исследованном материале, выделенных видах микроорганизмов (в случае выделения УПМ необходимо указывать количество), спектре их чувствительности к противомикробным препаратам.

^

II. Этапы БЛМИ при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.

Среди облигатных анаэробов выделяют спорообразующие анаэробы клостридии (возбудители ботулизма, столбняка, газовой гангрены) и неспорообразующие (неклостридиальные)  пептококки, пептострептококки, вейлонеллы, пропионобактерии, бактероиды, порфиромонады, превотеллы, фузобактерии.

1 этап.

А. Забор материала и транспортировка с использованием транспортных систем для анаэробов.

Б. Микроскопическое исследование материала (в материале присутствуют полиморфные микроорганизмы, либо грубые грамположительные палочки с обрубленными концами).

В. Предварительная обработка материала методами температурного или алкогольного шока для выделения спорообразующих анаэробов.

^ Процедура алкогольного шока: в течение 1 часа при комнатной температуре (2225⁰С) при постоянном перемешивании выдерживают смесь равных объемов абсолютного (или 96%) этилового спирта и исследуемого материала (суспензия фекалий, раневой экссудат).

^ Процедура теплового шока: в подогретую на водяной бане при 80⁰С в течение 5 минут пробирку со средой из рубленого мяса с глюкозой и крахмалом (chopped meat-glucose-starch medium) добавляют 1 мл суспензии соответствующего образца. Экспонируют пробу в течение 10 минут, а затем извлекают пробирку и охлаждают перед посевом в холодной воде.

Г. Посев материла на анаэробный кровяной агар и на элективные, дифференциально-диагностические среды (анаэробный кровяной агар с гентамицином или анаэробный кровяной агар с неомицином и налидиксовой кислотой) с целью получения изолированных колоний. Посевы инкубируют 2448 часов при 37⁰С в анаэробных условиях (в анаэробной камере, либо в микроанаэростате, либо в анаэробном пакете).

Д. Посев материла в жидкую тиогликолевую среду с целью определения летучих жирных кислот.

2 этап.

А. Изучение морфтипов колоний на кровяном анаэробном агаре. Колонии анаэробов слизистые, выпуклые, мелкие, полупрозрачные, с серо-белыми, преимущественно ровными краями. Колонии пигментирующих видов превотелл, порфиромонад, пептококков и пептострептококков приобретают светло-коричневое или черно-коричневое окрашивание на 714 сутки инкубации на средах, содержащих кровь. Колонии бактероидов на кровяном агаре могут давать зоны -гемолиза. Колонии Clostridium perfringens могут обуславливать двойной гемолиз: 1 зона (внутренняя)  -гемолиз, 2 зона (внешняя)  -гемолиз. Роящийся рост типичен для C. septicum, C. tetani. C. difficile образуют колонии в виде битого стекла, могут иметь круглую или неправильную форму со слегка волокнистыми краями. Колонии Fusobacterium spp. имеют желтоватый или желто-кремовый оттенок.

Б. Хроматография тиогликолевой среды и индикация анаэробов в среде по наличию летучих жирных кислот.

В. Микроскопия колоний.

Г. Изучение флюоресценции колоний с помощью лампы Вуда. В проходящем длинноволновом УФ-свете (365 нм) представители рода Prevotella дают ярко-красную флюоресценцию, рода Porphyromonas и C. difficile - желто-зеленую флюоресценцию.

Д. Посев изолированных колоний с целью определения их чувствительности к кислороду. Селективные анаэробные среды не всегда эффективно ингибируют рост сопутствующей факультативно-анаэробной микрофлоры, в связи с чем, на втором этапе бактериологического исследования подтверждают чувствительность исследуемой культуры к кислороду. Для этого намеченные для дальнейшего бактериологического исследования колонии высевают параллельно на сектора на две чашки Петри, одну из которых инкубируют в анаэробных условиях, а другую в аэробных (рис. 24).

1 2

5 4

 

                            

 

Культуры

1, 2, 5

подвергают

дальнейшему

бакисследованию

инкубация в аэробных условиях

1 2

6 3

5 4

инкубация в анаэробных условиях

Рис. 24. Подтверждение чувствительности исследуемой культуры к кислороду

Посев на сектора осуществляют для всех морфотипов колоний; в случае однотипности колоний пересевают не менее пяти колоний. Посев на сектора позволяет также накопить чистые культуры анаэробных микроорганизмов, что важно на дальнейших этапах идентификации и определения чувствительности к антимикробным средствам. Посевы инкубируют 24 – 48 часов при 37⁰с.

3 этап. На третьем этапе исследуют свойства культур, для которых подтверждена чувствительность к кислороду.

А. Определение чистоты культуры анаэробов в мазке по Граму.

Б. Окончательная идентификация чистой культуры анаэробов на основании биохимических признаков и спектра летучих жирных кислот. Ориентировочная идетификация до рода проводится с использованием ограниченного числа тестов, развернутая идентификация до вида – с использованием широкого спектра тестов.

Изучение биохимических признаков предпочтительно с использованием коммерческих тест-систем для биохимической идентификации анаэробов, которые позволяют проводить относительно точную видовую идентификацию. Большинство тест-систем применяются в комплексе с компьютеризированным банком данных биохимических профилей различных видов анаэробов, что упрощает процесс идентификации микроорганизмов.

В. Определение спектра чувствительности к антибиотикам.

4 этап – аналогично выделению аэробов и факультативных анаэробов.

А. Учет и анализ результатов.

Б. Выдача заключения.

Оценка БЛМИ.

Достоинства:

относительно высокая чувствительность (около 10² микроорганизмов в мл);
относительно высокая специфичность (возможность установления этиологии заболевания);
возможность определения количества микроорганизмов в исследуемом материале;
возможность определения спектра чувствительности выделенной чистой культуры к антибиотикам;
ранний метод исследования (может применяться с первых дней заболевания).

Недостатки:

относительная длительность;
трудоёмкость;
опасность инфицирования;
дорогостоящий.

^ Таблица 9

Схема бактериологического метода исследования

Цели	1. Постановка этиологического диагноза.
	2. Определение дополнительных свойств (например, чувствительности микроорганизма к антибиотикам и бактериофагам).
	3. Определение количества микробов при диагностике инфекций, вызываемых УПМ.
	4. Типирование микроорганизмов (определение фаговаров и сероваров) в эпидемиологических целях.
Этапы		Выделение аэробов и факультативных анаэробов		Выделение облигатных анаэробов
	1	забор, транспортировка, хранение, предварительная обработка материала посев в среду обогащения (при необходимости) микроскопия посев на питательные среды с целью получения изолированных колоний (количественный посев при выделении УПМ)		забор материала и транспортировка с использованием транспортных систем для анаэробов микроскопия предварительная обработка материала методами температурного или алкогольного шока для выделения спорообразующих анаэробов посев на анаэробный кровяной агар и на элективные, дифференциально-диагностические среды с целью получения изолированных колоний посев в жидкую тиогликолевую среду с целью определения летучих жирных кислот
	2	^ изучение мофотипов колоний микроскопия колоний ориентировочная РА на стекле с поливалентными сыворотками (при необходимости) накопление чистой культуры		изучение морфотипов колоний на кровяном анаэробном агаре микроскопия колоний хроматография тиогликолевой среды и определение летучих жирных кислот изучение флюоресценции колоний с помощью лампы Вуда отсев изолированных колоний с целью определения их чувствительности к кислороду
	3	учет роста на среде накопления		^ и сследование свойств чувствительных к кислороду культур
		оценка чистоты культуры в мазке по Граму окончательная идентификация чистой культуры определение спекрта чувствительности к антибиотикам
	4	учет и анализ результатов ^ выдача заключения
Оценка	достоинства		относительно высокая чувствительность (около 10² микроорганизмов в мл) относительно высокая специфичность (возможность установления этиологии заболевания) возможность определения количества микроорганизмов в исследуемом материале возможность определения спектра чувствительности выделенной культуры к антибиотикам ранний метод исследования (может применяться с первых дней заболевания)
	недостатки		относительная длительность трудоёмкость опасность инфицирования дорогостоящий

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

плохо

не очень плохо

средне

хорошо

отлично

Ваша оценка этого документа будет первой.

Ваша оценка:

	Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк 616. 3-092 (075. 8)		Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк 611. 831. 81 (075. 8)
	Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк 616-092. 19-097 (075. 8)		Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк 616. 36-002-092 (075. 8)
	Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк 616. 981. 711-036. 22-084 (075. 8)		Учебно-методическое пособие Минск, бгму 2010
	Учебно-методическое пособие Минск бгму 2009 удк 616. 8-092 (075. 8)		Учебно-методическое пособие Минск бгму 2009 удк 616-056. 3-071 (075. 8)
	Учебно-методическое пособие Минск бгму 2008 Удк 613. 2-099-057. 3 (075. 8)		Учебно-методическое пособие Минск 2010 удк 616. 379-008. 64: 618. 2(075. 9)

Учебно-методическое пособие Минск бгму 2010 удк

II. Этапы БЛМИ при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.

изучение мофотипов колоний

и сследование свойств чувствительных к кислороду культур

выдача заключения

Похожие:

и

сследование свойств чувствительных к кислороду культур